Human sclera tissue is mainly collagen; therefore, it is not easily usable for immunohistochemistry. To achieve the goal of performing immunohistochemistry for confocal microscopy of scleral tissue, a laminating technique was used.
sklera kapakları ve göz koruyan yoğun bağ dokusu olduğunu. Özellikle yoğun kolajen demetleri (tip I, III, IV, V, VI ve VII) oluşur. Nedeniyle otofloresansı, opaklık, ve kalınlık için, konfokal mikroskopi için uygun bulunmamıştır. Antijen alımı için doku ön ısıtma, özellikle, immünhistokimya için parafine gömüldü formalin ile fikse sklerasına kullanan teknik zorlukları vardır Burada sunulan birine alternatif bir yaklaşım. sklera hücreleri ve damarlar hem de göreceli olarak zayıf olduğu için, daha büyük doku örneklerinin kullanılması bakan hücreleri önlemek ve gemi ve diğer anatomik sitelere ilişkin kendi yerleşimini anlamada yardımcı olmak için araştırılmıştır. konfokal mikroskop altında daha büyük bir doku örneklerinin analizi için izin vermek için, bir laminasyon tekniği sklera ince tabakaları oluşturmak için gerçekleştirilmiştir. CD31 kan damarları ve lenfatik damar endotel hyalu sonuçlarının analizini takibenronan reseptör 1 (LYVE1) Bilimsel inceleme için onay elde edildiği için pozitif hücrelerin, bu yöntemin avantajları ve sınırlılıkları tartışılmıştır.
sklera yoğun bağ dokusu yapılmış göz kapakları, sert dış tabakasıdır. Göz içi yapıları korumak için ve göz içi basıncı korumaya yardımcı olur. Böylece, sklera net görüş için gereklidir. Bu lenf damarlarının 1,2 yoksun ve böylece o ve lenfatik serbest gözün iç 3-7 arasında bir dış lenfatik serbest sınırını oluşturur. Aynı zamanda bu sayede tendonların anatomik benzerlik paylaşarak, göz dışı kaslarının için bağlanma siteleri sağlar. Sklera esas tip I kollajenin yoğun demetleri oluşur ve kolajen tip III, IV, V, VI, VIII, 8,9 ve elastin 10,11 daha az sayıda sahip olduğu için, bu doku immünohistokimya için kullanımı kolay değildir.
(1) yüzeysel vaskülarize episkleraya, konjonktiva ve tenon kapsülünün altında bulundu ve iki tarafın ve inci doğru: Anatomik olarak, sklera üç ana katmandan ayrılabiliryörüngeye bakan gözün e geri; (2) sklera stroma, sklera ana parçası; ve (3) ile doğrudan uvea üzerinde bulunan ince, pigmentli tabaka, tabakanın fusca. Sklera ile ilgili bizim anatomik bilgi 20. yüzyılın ilk yarısında kaynaklanmaktadır. O zaman, araştırmacılar başta Hindistan mürekkep enjeksiyonları 12 kullanılarak ve damar 13-15 döküm damarsal anatomisi okudu. Daha sonra, bu anjiografik çalışmalar 16-19 yılında araştırılmıştır.
O zamandan bu yana, eski teknikler geliştirildi ve yenileri bize önceki anatomik bilgiyi tamamlamak için izin olduğunu geliştirilmiştir. Bu lenfatik damar endotel spesifik hiyalüronan alıcısı-1 (LYVE1) 20 veya podoplanin 21 gibi, güvenilir lenf belirteçleri beri Örneğin, sadece on yıl olmuştur. Mikroskopisi farklı ti anatomik özelliklerini incelemek için yeni imkanlar sunuyorgöz ssues. Birden lekeler hücrelerin işaretleri ayırt etmek için ya da kan damarları ve diğer anatomik yapılara göre hücre lokalizasyonu için kullanılmak üzere bu sağlar. Numune daha büyük bir boyutta olduğunu ve ne zaman belirli bir hücre tipi arama bize örnek üzerinden tarama sağlar zaman bir bakış sağlar. Z yığın tekniği ile, konfokal mikroskopi 100-200 um kadar örnekler için kullanılabilir. Sklera kas eklemeleri arkasında 0.3 mm ve arka kutupta 11 1 mm arasındaki kalınlıklarda farklıdır. kalınlığı ve opaklık hem nedeniyle, sklera geleneksel yöntemlerle konfokal mikroskopi için uygun değildir.
Bu durumu düzeltmek için, skleral dokular konfokal mikroskobu ile analiz için izin lamine edilmiştir. Bu teknoloji, insan sklera hem de fizyolojik ve patolojik durumların daha iyi anlamaya için yararlıdır.
İnsan sklera Laminasyon Bu doku üzerinde eş odaklı mikroskopi gerçekleştirmek için kullanılan bir yöntemdir. Bu süreçte kritik bir adım doku yapıştırılması için etanol kullanımı yerine formalin olduğunu. sabitleme için etanol yerine formalin kullanırken bizim deneyim, daha iyi sonuçlar elde edilmektedir. Blunt neşter prosedürü ağırlaştırmak ve kaçınılmalıdır. Benzer şekilde, sklera kuruması o prosedürü komplike ve görüntülerin kalitesini azaltır, kaçınılmalıdır.
<p cl…The authors have nothing to disclose.
German Research Foundation (FOR2240 “(Lymph) Angiogenesis and Cellular Immunity in Inflammatory Diseases of the Eye” to CC and LMH; HE 6743/2-1 and HE 7643/3-1 to LMH; CU47/6-1 to CC), German Cancer Aid (to LMH and CC), GEROK program University of Cologne (to SLS and LMH), and EU COST BM1302 “Joining Forces to Corneal Regeneration” (to CC).
96% ethanol | Merck Chemicals, Darmstadt, Germany | P075.4 | |
binocular stereo microscope | Motic, Hongkong, China | n.a | |
26G needles | Terumo, Leuven, Belgium | 303800 | |
15.5mm trepan | Geuder, Heidelberg, Germany | n.a | |
no.10 scalpel | Feather, pfm medical, Osaka, Japan | 2E+08 | |
ophthalmic scalpel micro feather | Feather, pfm medical, Osaka, Japan | no. 7657BR | |
CD 31 antibody (monoclonal mouse anti human) | Dako, USA | IR610 | |
LYVE1 antibody (polyclonal rabbit anti human) | Zytomed, Germany | RBK014-05 | |
goat anti mouse FITC antibody | Sigma Aldrich, Steinheim, Germany | F0257 | |
goat anti rabbit Cy3 antibody | Dianova, Germany | 111-165-003 | |
Goat Serum normal | Dako, Glostrup, Denmark | X090710-8 | |
DAPI | Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany | 6335.1 | |
microscope slides | Engelbrecht, Edermünde, Germany | WC7695002 | |
Coverslips 24x24mm | Th. Gayer, Lohmar, Germany | 7695026 | |
DAKO fluorescent mounting medium | DAKO, USA | S3023 | |
LSM Meta 510 confocal microscopy | Carl Zeiss AG, Jena, Germany | n.a |