Rotifers are microscopic zooplankton used as models in ecotoxicological and aging studies. Here we provide a protocol for powerful and reproducible measurement of survival time in Brachionus rotifers. Synchronization of culture conditions over several generations is of particular importance because maternal condition affects life history of offspring.
Rotifers are microscopic cosmopolitan zooplankton used as models in ecotoxicological and aging studies due to their several advantages such as short lifespan, ease of culture, and parthenogenesis that enables clonal culture. However, caution is required when measuring their survival time as it is affected by maternal age and maternal feeding conditions. Here we provide a protocol for powerful and reproducible measurement of the survival time in Brachionus rotifers following a careful synchronization of culture conditions over several generations. Empirically, poor synchronization results in early mortality and a gradual decrease in survival rate, thus resulting in weak statistical power. Indeed, under such conditions, calorie restriction (CR) failed to significantly extend the lifespan of B. plicatilis although CR-induced longevity has been demonstrated with well-synchronized rotifer samples in past and present studies. This protocol is probably useful for other invertebrate models, including the fruitfly Drosophila melanogaster and the nematode Caenorhabditis elegans, because maternal age effects have also been reported in these species.
रोटीफर्स सूक्ष्म महानगरीय प्राणीमन्दप्लवक (<1 मिमी) कर रहे हैं कि जाति रोटिफेरा 1 गठन। वे एक साधारण शरीर लगभग 1000 दैहिक कोशिकाओं के साथ ही एक विशेषता पहिया तरह सिलिअरी तंत्र की रचना की योजना कोरोना, जो हरकत और खिलाने के लिए प्रयोग किया जाता है कहा जाता है। अधिकांश रोटीफर्स कक्षाओं Monogononta या Bdelloidea, जिसके बारे में 1600 और 500 प्रजातियों में क्रमश: 2 को रोकने के लिए संबंधित। Monogonont रोटीफर्स आम तौर पर, दोनों यौन और अलैंगिक प्रजनन चरणों (चक्रीय अनिषेकजनन) है, जबकि bdelloid रोटीफर्स अनिवार्य अनिषेकजनन 3 से पुनरुत्पादन। यह इस प्रकार आनुवंशिक रूप से समान किरीटी व्यक्तियों, जो प्रयोगों में उच्च reproducibility सुनिश्चित करता है प्राप्त करने के लिए संभव है। इसके अलावा, वे इतने कम उम्र, संस्कृति में आसानी, जीनोमिक और transcriptomic अनुक्रम डेटा 4-7 की उपलब्धता, और एक अद्वितीय वंशावली स्थिति एक से दूर के रूप में मॉडल जीवों के रूप में कई अन्य लाभ है,rthropods और नेमाटोड 8। रोटीफर्स इसलिए पारिस्थितिकी, विषाक्तता में अकशेरुकी मॉडल का वादा किया, और उम्र बढ़ने के अध्ययन 9-12 रहे हैं।
पर्यावरण के तनाव या रसायनों के लिए जोखिम के तहत अस्तित्व के समय इन अनुसंधान क्षेत्रों 13-19 में एक बार मापा पैरामीटर है। हालांकि, सतर्कता जब रोटीफर्स के अस्तित्व के समय को मापने क्योंकि यह उनकी माताओं के पर्यावरण की स्थिति के लिए अतिसंवेदनशील है की जरूरत है। अर्थात्, monogonont किरीटी Brachionus manjavacas में, वृद्ध मां से महिला वंश युवा माताओं से उन लोगों की तुलना में कम देता है; हालांकि, मातृ कैलोरी प्रतिबंध (सीआर) आंशिक रूप से उन्नत मातृ उम्र 20 के हानिकारक प्रभावों ऑफसेट। बी में plicatilis, मातृ सीआर संतानों दीर्घायु, भुखमरी के तहत लंबे समय जीवित रहने के लिए, और उच्च ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिरोध एंटीऑक्सीडेंट एंजाइमों 21,22 का बढ़ाया अभिव्यक्ति के साथ जुड़ा हुआ है। मातृ उम्र प्रभावयह भी bdelloid रोटीफर्स 23 में देखा गया है। इसलिए, प्रयोगात्मक रोटीफर्स की शर्तों को ध्यान से अस्तित्व के समय के मापन से पहले कई पीढ़ियों पर सिंक्रनाइज़ किया जाना चाहिए।
यहाँ हम कई पीढ़ियों से अधिक संस्कृति की स्थिति के तुल्यकालन निम्नलिखित Brachionus रोटीफर्स में अस्तित्व के समय की माप के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं। रुक-रुक कर उपवास (यदि), सीआर के विभिन्नता जहां रोटीफर्स समय समय पर तंग आ चुके हैं, दीर्घायु 22,24 पर अगर अच्छी तरह से ज्ञात प्रभाव के कारण तुल्यकालन के प्रभाव प्रकट करने के लिए लागू किया गया था।
वर्तमान प्रोटोकॉल Brachionus रोटीफर्स में अस्तित्व के समय को मापने के लिए एक विधि का वर्णन है। महत्वपूर्ण कदम कई पीढ़ियों से अधिक किरीटी की स्थिति के तुल्यकालन है। जब प्रयोगात्मक रोटीफर्स अच्छी तरह से स…
The authors have nothing to disclose.
हम फिल्मांकन में उनकी मदद के लिए, जॉर्ज जार्विस, मार्था बोक, और बेट्टे Hecox-घास का मैदान, समुद्री जैव प्रयोगशाला के आभारी हैं।
Sodium chloride | Wako | 190-13921 | |
Magnesium chloride | Wako | 136-03995 | |
Magnesium sulfate | Wako | 131-00427 | |
Potassium chloride | Wako | 168-22111 | |
Calcium chloride | Wako | 035-00455 | |
Sodium bicarbonate | Wako | 199-05985 | |
Sodium bromide | Wako | 190-01515 | |
Membrane filter (0.45 µm pore size) | Millipore | HAWP04700 | |
Culture plate, 6-well, non-treated | Thomas Scientific | 6902D01 | Flat bottom |
Culture plate, 48-well, non-treated | Thomas Scientific | 6902D07 | Flat bottom |
Tetraselmis, Living | Carolina Biological Supply Company | 152610 | |
PRISM 6 | GraphPad Software | Version 6.0d |