Rotifers are microscopic zooplankton used as models in ecotoxicological and aging studies. Here we provide a protocol for powerful and reproducible measurement of survival time in Brachionus rotifers. Synchronization of culture conditions over several generations is of particular importance because maternal condition affects life history of offspring.
Rotifers are microscopic cosmopolitan zooplankton used as models in ecotoxicological and aging studies due to their several advantages such as short lifespan, ease of culture, and parthenogenesis that enables clonal culture. However, caution is required when measuring their survival time as it is affected by maternal age and maternal feeding conditions. Here we provide a protocol for powerful and reproducible measurement of the survival time in Brachionus rotifers following a careful synchronization of culture conditions over several generations. Empirically, poor synchronization results in early mortality and a gradual decrease in survival rate, thus resulting in weak statistical power. Indeed, under such conditions, calorie restriction (CR) failed to significantly extend the lifespan of B. plicatilis although CR-induced longevity has been demonstrated with well-synchronized rotifer samples in past and present studies. This protocol is probably useful for other invertebrate models, including the fruitfly Drosophila melanogaster and the nematode Caenorhabditis elegans, because maternal age effects have also been reported in these species.
Rotiferler filumunu Rotifera 1 oluşturduğu mikroskopik kozmopolit zooplankton (<1 mm) 'dir. Bu yaklaşık 1000 somatik hücreler gibi karakteristik bir tekerlek gibi siliyer cihazından oluşan basit bir vücut düzeni hareket kabiliyeti ve besleme için kullanılan korona, adı vardır. Çoğu rotifer yaklaşık 1.600 ve 500 tür, sırasıyla 2 ihtiva sınıflar Monogononta veya bdelloidea aittir. Bdelloid rotifer zorunlu parthenogenesis 3 ile yeniden oluşturma sırasında Monogonont rotiferler genellikle hem eşeyli ve eşeysiz üreme evreleri (döngüsel parthenogenesis) var. Deneylerde, yüksek tekrarlanabilirliği sağlanır genetik olarak özdeş rotifer bireyler elde etmek mümkündür. Buna ek olarak, bu kadar kısa bir ömrü, kültür kolaylığı, genomik ve transkriptomik dizi verilerine 4-7 kullanılabilirliği ve uzak benzersiz bir filogenetik pozisyon gibi model organizmalar gibi birçok başka avantajları varrthropods ve nematodların 8. Rotifer Bu nedenle ekolojik, toksikolojik omurgasız modelleri vaat ve çalışmalar 9-12 yaşlanma vardır.
Çevresel strese ya da kimyasallara maruz altında hayatta kalma süresi bu araştırma alanlarında 13-19 bir çok ölçülen parametredir. Bu annelerinin çevre koşullarına maruz olduğu rotiferler hayatta kalma süresini ölçme, ancak, dikkatli gereklidir. Yani, monogonont rotiferi Brachionus manjavacas olarak, yaşlı annelerden gelen kadın yavrular genç annelerden daha kısa bir ömrü var; Ancak, anne kalori kısıtlaması (CR) kısmen ileri anne yaşı 20 zararlı etkilerini dengeler. B. plicatilis, anne CR yavru uzun ömürlü, açlık altında uzun yaşam süresi ve antioksidan enzimler 21,22 gelişmiş ifadesi ile ilişkili yüksek oksidatif stres direnci sağlar. anne yaşı etkisiAyrıca bdelloid rotiferler 23 gözlenmiştir. Bu nedenle, deneysel rotifer koşulları dikkatlice sağkalım süresi ölçümleri önce birkaç nesil boyunca senkronize edilmelidir.
Burada birkaç nesil boyunca kültür koşulları senkronizasyon aşağıdaki Brachionus rotifer sağkalım süresinin ölçümü için bir protokol sağlar. Aralıklı açlık (IF), rotiferler periyodik beslenir CR bir varyasyon nedeniyle uzun ömürlü 22,24 tarihinde IF tanınmış etkilerine senkronizasyon etkisini ortaya çıkarmak için uygulanmıştır.
Mevcut protokolü Brachionus rotiferler sağkalım süresini ölçmek için bir yöntem tarif eder. Kritik adım birkaç nesil boyunca rotifer koşulları eşitleme olduğunu. Deneysel rotifer iyi senkronize edildiğinde birkaç önceki çalışmalarda 18,24,37,38 belirtildiği gibi, tipik bir tip I sağkalım eğrisi çok az erken mortalite ile görülmektedir. onların hayatta kalma süresi standart sapmaları dolayısıyla yüksek istatistiksel güç sonuçlanan kötü senkronize rotifer göre dah…
The authors have nothing to disclose.
Biz filme katkılarından dolayı George Jarvis, Martha Bock ve Bette Hecox-Lea, Deniz Biyoloji Laboratuvarı müteşekkiriz.
Sodium chloride | Wako | 190-13921 | |
Magnesium chloride | Wako | 136-03995 | |
Magnesium sulfate | Wako | 131-00427 | |
Potassium chloride | Wako | 168-22111 | |
Calcium chloride | Wako | 035-00455 | |
Sodium bicarbonate | Wako | 199-05985 | |
Sodium bromide | Wako | 190-01515 | |
Membrane filter (0.45 µm pore size) | Millipore | HAWP04700 | |
Culture plate, 6-well, non-treated | Thomas Scientific | 6902D01 | Flat bottom |
Culture plate, 48-well, non-treated | Thomas Scientific | 6902D07 | Flat bottom |
Tetraselmis, Living | Carolina Biological Supply Company | 152610 | |
PRISM 6 | GraphPad Software | Version 6.0d |