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Immunology and Infection

inoculating Published: January 12, 2017 doi: 10.3791/55013
Automatic Translation
1,2, 1,2, 2, 1
1Laboratoire d'écologie et d'épidémioloigie parasitaire, Institut de biologie, Université de Neuchâtel, 2Merkle Lab, Department of Entomology, Pennsylvania State University

Abstract

प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की उत्तेजना प्रभावकारिता और प्रतिरक्षा तंत्र की जांच करने के लिए अकशेरुकी अध्ययन में एक आम उपकरण है। इस उत्तेजना, कीड़ों में गैर रोगजनक कणों के इंजेक्शन पर आधारित कणों के रूप में प्रतिरक्षा प्रणाली द्वारा पता लगाया जाएगा और प्रतिरक्षा प्रभावोत्पादक के उत्पादन के लिए प्रेरित करेगा। हम मच्छर एनोफ़ेलीज़ gambiae में melanization प्रतिक्रिया की उत्तेजना पर यहाँ ध्यान केंद्रित। विदेशी कणों और मेलेनिन के एक अंधेरे परत के साथ परजीवी के encapsulation में melanization प्रतिक्रिया का परिणाम है। इस प्रतिक्रिया को प्रोत्साहित करने के लिए, मच्छरों microcapillary ग्लास ट्यूब का उपयोग करते हुए वक्ष गुहा में मोतियों के साथ inoculated हैं। फिर, 24 घंटे के बाद, मच्छरों मोती पुनः प्राप्त करने के विच्छेदित कर रहे हैं। मनका के melanization की डिग्री छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग कर मापा जाता है। मोती परजीवी के रोगजनक इफेक्ट नहीं है, या अपनी क्षमता से बचने या प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को दबाने के लिए। ये इंजेक्शन measu करने के लिए एक तरीका हैप्रतिरक्षा प्रभावकारिता और इस तरह के उपजाऊपन या दीर्घायु के रूप में अन्य जीवन इतिहास लक्षण, पर प्रतिरक्षा stimulations के प्रभाव को फिर से। यह वास्तव में सीधे मेजबान परजीवी बातचीत का अध्ययन कर के रूप में ही नहीं है, लेकिन यह प्रतिरक्षा और इसके विकासवादी पारिस्थितिकी का अध्ययन करने के लिए एक दिलचस्प उपकरण है।

Introduction

3 कि उनके छल्ली या उनके आद्यमध्यांत्र उपकला 4 के माध्यम से ब्रीच - कीड़े खुद को परजीवी और रोगजनकों 1 के खिलाफ की रक्षा करने के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया पर निर्भर हैं। मच्छरों में, इन प्रतिक्रियाओं बैक्टीरिया 5, वायरस 6, फाइलेरिया नेमाटोड 7, और मलेरिया परजीवी के खिलाफ 1,8,9 कुशल हैं। 12 - मच्छरों में एक महत्वपूर्ण प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया मेलेनिन 10 के साथ विदेशी कणों के encapsulation है। 12 - इस encapsulation आद्यमध्यांत्र में या hemolymph घूम प्रणाली 10 में भी हो सकता है। इस melanization प्रतिक्रिया समर्थक phenoloxidase का परिणाम झरना 10 - 12, और यह परजीवी की मौत के लिए या उनके phagocytosis को जन्म दे सकता है। वयस्क मच्छरों, जहां hemocytes कोशिकाओं की संख्या सीमित है, melanization एक त्रिदोषन प्रतिक्रिया, प्लाज्मोडियम परजीवी या फाइलेरिया नेमाटोड 7 के खिलाफ की तरह है।कुछ अन्य कीड़ों में, यह सीधे hemocytes कोशिकाओं है कि उन्हें 7 melanize करने के परजीवी के आसपास इकट्ठा होते हैं। इसके अलावा, मेलेनिन भी अंडा उत्पादन और छल्ली घावों को भरने 7 की तरह कई अन्य शारीरिक प्रक्रिया के लिए आवश्यक है।

18 - प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की उत्तेजना कई कृषि और सार्वजनिक स्वास्थ्य मॉडल प्रणाली 13 में कीट प्रतिरोधक क्षमता का अध्ययन करने के लिए एक उपकरण के रूप में प्रयोग किया जाता है। 16,19 - यह एनोफ़ेलीज़ में gambiae मच्छरों, अफ्रीका में मलेरिया के प्रमुख वेक्टर, मेजबान परजीवी बातचीत 14 अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है। इन तकनीकों में कीड़े की क्षमता को अपने पैटर्न मान्यता रिसेप्टर्स (PRR) 2 के साथ परजीवी का पता लगाने के आधार पर कर रहे हैं। मच्छरों भी इस तरह के रोगज़नक़ जुड़े आणविक पैटर्न (PAMPs) के रूप में उनके जीव विज्ञान के साथ हस्तक्षेप अन्य अणुओं का पता लगाने कर सकते हैं, या अपने स्वयं के क्षतिग्रस्त कोलेजन और न्यूक्लिक एसिड की रिहाई के कारण कोशिकाओं का पता लगाने। मच्छर प्रतिरक्षा सेल23 - इस तरह के hemocytes के रूप में पता लगाने के लिए 20 उपयोग किया जाता है। मुख्य प्रतिरक्षा संकेत दे रास्ते हैं आईएमडी, टोल, जे ए / स्टेट 24, और ribonucleic एसिड हस्तक्षेप (आरएनएआई) 25,26। दोनों टोल और आईएमडी रास्ते melanization प्रतिक्रिया को प्रभावित करती है और समर्थक phenoloxidase के साथ बातचीत 10 झरना - 12।

मानक melanization प्रतिक्रिया को प्रोत्साहित करने के लिए उपकरण का इस्तेमाल किया वक्ष गुहा की hemolymph में एक छोटे से मनका के साथ एक मच्छर की टीका है। मेलेनिन encapsulation की डिग्री तो मच्छर के विच्छेदन के माध्यम से मनका पुन: प्राप्त करने के बाद 19 मापा जा सकता है। ज्यादातर अध्ययनों में, केवल एक मनका मच्छर 15,16,27 प्रति इंजेक्ट किया गया था, लेकिन अधिक मोती इंजेक्शन लगाने melanization प्रतिक्रिया 19 की सीमा का अध्ययन करने के क्रम में संभव है। ये मोती मच्छर शरीर क्रिया विज्ञान की अशांति को सीमित करने का एक इंजेक्शन समाधान (शारीरिक सीरम) का उपयोग कर रहे हैं और इंजेक्शनमच्छर 15,16,27 के सुखाना। एक डाई इस समाधान मनका चयन को कम करने के लिए कहा है। यह विच्छेदन मनका 15,16,27 को पुनः प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल समाधान के लिए ही है।

गैर रोगजनक उत्तेजनाओं के साथ कीड़े inoculating का लाभ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया पर सीधा प्रभाव पर ध्यान केंद्रित करने की क्षमता है। 31, या प्रतिरक्षा चोरी के 31 - - 34 कोई उलझी प्रभाव परजीवी pathogenicity 28, प्रतिरक्षादमन 29 के कारण कर रहे हैं। इसके अलावा, इस तरह के दीर्घायु या उपजाऊपन के रूप में अन्य जीवन इतिहास लक्षण, पर stimulations के परिणामों का भी अध्ययन किया जा सकता है। इस प्रकार, विकासवादी पारिस्थितिकी का अध्ययन शोधकर्ताओं ने ऐसे उपकरण 2,35,36 आवश्यकता हो सकती है। उदाहरण के लिए, इम्युनो को चुनौती दी bumblebees भुखमरी के तहत एक छोटा जीवन काल है। प्रतिरक्षा stimulations और तैनाती के इसी तरह के नकारात्मक प्रभाव को अलग अकशेरुकी मॉडल में देखा गया है, अक्सर एक छोटी, जिसके परिणामस्वरूपएर उम्र या उससे कम प्रजनन सफलता 13,27,37। इस तरह के अध्ययन अलग वातावरण 2,4,38 में आयोजित किया जा सकता है। उत्तेजक प्रतिरोधक क्षमता भी इम्युनोपैथोलोजी 39,40 पर सीधे ध्यान केंद्रित कर उन लोगों के लिए ब्याज की है।

इस प्रोटोकॉल मच्छरों melanization प्रतिक्रिया को उत्तेजित और सीधे मेलेनिन की मात्रा को मापने के साथ मोती का टीका पर आधारित है। यह अलग प्रयोगात्मक सेटिंग में melanization प्रतिक्रिया के मात्रात्मक और गुणात्मक अध्ययन सक्षम बनाता है। मारे गर्मी बैक्टीरिया 41 तरह के एक उपकरण जैसे जीवाणुरोधी प्रतिक्रिया के रूप में अन्य प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, की उत्तेजना के लिए बढ़ाया जा सकता है। यह भी कई पारिस्थितिक सेटिंग्स में आयोजित किया जा सकता है।

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Protocol

1. इंजेक्शन और विच्छेदन के लिए खारा समाधान

  1. पीएच = 6.8 में 1.3 मिमी NaCl, 0.5 मिमी KCl, और 0.2 मिमी 2 CaCl प्राप्त करने के लिए आसुत जल को NaCl, KCl, और 2 CaCl जोड़कर नमकीन घोल तैयार करें।
  2. खारा समाधान के 99 मिलीलीटर 0.1% मिथाइल हरी समाधान के 1 मिलीलीटर जोड़ें पारदर्शी मोती रंग करने के लिए। यह 0.001% मिथाइल हरी "इंजेक्शन समाधान है।"
  3. तब, खारा समाधान के 45 मिलीलीटर के लिए 0.1% मिथाइल हरी समाधान के 5 मिलीलीटर जोड़ें। यह 0.01% मिथाइल हरी "विच्छेदन समाधान" विच्छेदन के दौरान मोतियों की रंगाई और अपने प्रेक्षण की सुविधा के लिए 10 बार मिथाइल हरे रंग में अधिक ध्यान केंद्रित किया है।
    नोट: यदि आवश्यक हो तो फ़िल्टर बफर बाँझ।

2. केशिका तैयारी

  1. हीट-पुल microcapillary ग्लास ट्यूब एक बहुत अच्छी टिप छोटी से छोटी मोती (φ = 40 माइक्रोन) 42 की तुलना में थोड़ा बड़ा प्राप्त करने के लिए।
  2. ओपन और एकचिमटी के साथ टिप तोड़कर या सिरे से काटने का कार्य द्वारा प्रत्येक केशिका djust।

3. मच्छर पालन

  1. 26 ± 1 डिग्री सेल्सियस पर रियर ए gambiae, 70 ± 5% सापेक्ष आर्द्रता, और एक 12:12 मानव संसाधन प्रकाश: अंधेरे चक्र। वयस्क महिलाओं रखें और उन्हें एक 10% चीनी समाधान करने के लिए पहुँच दे।

4. केशिका साथ मनका चयन

  1. एक 5 सेमी पेट्री डिश में नकारात्मक आरोप लगाया मोती (व्यास में 40-120 माइक्रोन) की 0.009 जी डालो और अग्रिम में इंजेक्शन समाधान 30 मिनट के 5 मिलीलीटर जोड़ें।
    नोट: लक्ष्य डाई मोती रंग इंजेक्शन आसान के लिए मनका चयन करने के लिए जाने के लिए है। मोती आटोक्लेव अगर वे में एक बाँझ जार नहीं आते हैं।
  2. एक केशिका केशिका एक पिपेट बल्ब में घुड़सवार का प्रयोग, नेत्रहीन एक दूरबीन माइक्रोस्कोप के तहत खारा समाधान के 0.1 μl में सबसे छोटी मनका का चयन करें।
    नोट: जब कई मोती एक साथ inoculating, 0.1 μl की कुल मात्रा से तीन मोतियों का चयन करें।

5. मच्छर हैंडलिंग और टीका

  1. एक कीट खींचने की मशीन का उपयोग करना, एक 50 मिलीलीटर ट्यूब में प्रत्येक मच्छर जगह है।
  2. कुचल बर्फ (2-5 मिनट) में ट्यूब डाल द्वारा संक्षेप में प्रत्येक मच्छर टेंशन मत लो।
  3. अपनी सही पक्ष पर एक मच्छर दूरबीन माइक्रोस्कोप के नीचे रखें।
  4. एक stereomicroscope के तहत, मजबूती से वक्ष गुहा छल्ली के बाईं ओर के माध्यम से भेदी और फिर तरल और मनका इंजेक्शन द्वारा केशिका के साथ मच्छर टीका लगाना।
    नोट: देखभाल संभव के रूप में मच्छर के रूप में खड़े बल केशिका धारण करके उड़ान की मांसपेशियों को नुकसान नहीं ले लो।
  5. केशिका निकालें।
  6. फेदरवेट कीटविज्ञान संदंश का प्रयोग, व्यक्तिगत रूप से एक 180 मिलीलीटर की प्लास्टिक जाल मच्छर के साथ कवर कप में प्रत्येक महिला जगह; उन्हें एक 10% चीनी समाधान करने के लिए पहुँच दे।
    नोट: सावधानी, चीनी समाधान के साथ आवश्यक रूप मच्छर चीनी समाधान बूंदों पर अटक सकता है।

6. मच्छरविच्छेदन और मनका फोटोग्राफी

  1. जाँच करें अगर मच्छरों टीका के बाद 24 घंटे जीवित हैं। यदि हां, तो उनकी हालत की जाँच करें और केवल मच्छरों कि उड़ान भरने में सक्षम हो सकता है।
  2. -20 डिग्री सेल्सियस पर इन मच्छरों रुक।
    नोट: वे, विच्छेदन के पहले महीने के लिए कई दिनों तक रखा जा सकता है अगर जरूरत है।
  3. 32X बढ़ाई पर एक दूरबीन माइक्रोस्कोप के तहत चिमटी का उपयोग कर मच्छरों 'पंख निकालें। पारदर्शी टेप के साथ कांच स्लाइड पर पंखों को ठीक करें। नीचे प्रत्येक व्यक्ति के मच्छर के लिए इस्तेमाल किया कोड लिखें।
  4. एक स्कैनर में कांच स्लाइड रखो और उन्हें 1,200 डीपीआई पर स्कैन।
    नोट: जांच करें कि कोड प्रत्येक व्यक्ति के मच्छर के लिए पठनीय है।
  5. एक गिलास खुर्दबीन स्लाइड पर और विच्छेदन समाधान में, सिर और पेट से छाती को अलग करने के संदंश का उपयोग करें।
  6. संदंश के साथ छाती खोलें मोती निकालते हैं।
    नोट: मोती कि पेट के लिए कदम नहीं है, एक दूसरे के साथ संपर्क में नहीं हैं और उनमें से ज्यादातर टी में स्वतंत्र रूप से नाववह hemolymph। संदंश के साथ मनका तोड़ने के लिए नहीं सावधान रहना होगा, के रूप में एक गैर-melanized मनका खोजने के लिए मुश्किल हो सकता है। मोती रंग प्राप्त करने के लिए 1 से 5 मिनट के लिए प्रतीक्षा करें।
  7. एक गिलास खुर्दबीन स्लाइड पर विच्छेदन समाधान की एक छोटी बूंद में मोती स्थानांतरण, तस्वीर लेने से पहले।
    नोट: मोती धोने के लिए कोई ज़रूरत नहीं है।
  8. एक कैमरा से लैस एक माइक्रोस्कोप का उपयोग करना, एक मानक प्रकाश सेटिंग और 400X बढ़ाई प्रत्येक मनका की एक डिजिटल छवि ले।
    ध्यान दें: उनकी तुलना सक्षम करने के लिए अलग अलग चित्रों के बीच रोशनी मत बदलो।

7. तस्वीर विश्लेषण: मनका melanization

  1. छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर खोलें। "फाइल" पर क्लिक करें और फिर "खुला" पर एक मनका छवि को खोजने के लिए।
  2. पर क्लिक करें "का विश्लेषण।" पर क्लिक करें "सेट माप।" "सेट माप" विंडो में "ग्रे मूल्य मतलब" बॉक्स को टिक करें।
  3. वृत्त चयन उपकरण आइकन पर क्लिक करें। मनका परिधि का चयन करें; में रहनामनका पक्ष और उसके चारों ओर चमकदार प्रभामंडल से बचें।
  4. "विश्लेषण" मेनू पर क्लिक करें। पर क्लिक करें "उपाय।" मतलब ग्रे मूल्य और मनका के पार के अनुभागीय क्षेत्र के आकार प्राप्त करते हैं।
    1. प्रत्येक मनका के melanization मूल्य प्राप्त करने के लिए, एक कैलकुलेटर या कैलकुलेटर सॉफ्टवेयर का उपयोग कर के बाद कार्रवाई करते हैं: "256 - ग्रे मूल्य मतलब है।" melanization उपाय के 0 एक पूरी तरह से सफेद छवि का प्रतिनिधित्व करने के साथ, 0 और 256 के बीच एक मूल्य है।

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Representative Results

मच्छरों में एक ही रास्ते में मोती melanize सब नहीं था, जैसा कि कुछ मोती कम (चित्रा 1) दूसरों की तुलना में मेलेनिन के साथ कवर किया गया। दरअसल, कुछ मोती melanization की कमी की वजह से नीले रंग की बनी हुई है, जबकि दूसरों को पूरी तरह से अंधेरा थे (चित्रा 1)। Melanization मान 0 (जो एक नीले और unmelanized मनका के लिए corresponded) और 100 (एक अंधेरे और भारी melanized मनका के लिए इसी) (चित्रा 2A और 2 बी) के बीच एक मूल्य के लिए रेखीय प्रक्षेप द्वारा मानकीकृत किया गया। इन मूल्यों को मोतियों की melanization की डिग्री है और इस तरह, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की ताकत का संकेत मिलता है।

हम उनके melanization मूल्यों की तुलना द्वारा एक दूसरे से मोती तुलना कर सकते हैं। melanization प्रतिक्रिया आम तौर पर एक गाऊसी वितरण, जो एनोवा या गाऊसी GLM की तरह शास्त्रीय सांख्यिकीय विश्लेषण में सक्षम बनाता है इस प्रकार है।

"Fo: रख-together.within-पेज =" 1 "> हम मोती एक साथ एक मच्छर में टीका की संख्या के संबंध में melanization प्रतिक्रिया की भिन्नता का अध्ययन लक्ष्य परिवर्तनशीलता और की सीमाओं का एक बेहतर समझ हासिल करने के लिए किया गया था। melanization प्रतिक्रिया। मनका के आकार के किसी भी प्रभाव नहीं था।

औसत मनका melanization मूल्य 50 करने के लिए 71 से कमी आई है जब मोतियों की संख्या में वृद्धि हुई है टीका (एफ igure 2)। एक मच्छर जब प्रतिरक्षा चुनौती बढ़ जाती है में melanization प्रतिक्रिया के कुछ सीमा नहीं है। इसके अलावा, melanization प्रतिक्रिया कम से कम-melanized मनका के लिए प्रत्येक मच्छर में से 35 एक से तीन मोती के लिए क्रमश: कमी आई है, 71 से,। हालांकि, सबसे जोरदार melanized मनका के melanization मूल्य के बारे में लगातार रुके थे। melanization की परिवर्तनशीलता मोतियों की संख्या के साथ वृद्धि हुई है। melanization प्रयास, एक दिया मच्छर में सभी मोती के बीच एक समान नहीं थाके रूप में एक मनका दूसरों पर प्राथमिकता के आधार पर किया गया था। यह इंजेक्शन तकनीक मच्छरों में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की परिवर्तनशीलता अध्ययन करने के लिए उपयोगी है।

आकृति 1
चित्रा 1: एक गैर melanized का चित्र उदाहरण, एक आंशिक रूप से melanized, और एक अत्यंत melanized मनका विच्छेदन के बाद। छोड़ दिया, मध्य, और सही पर एक गैर-melanized मनका, एक आंशिक रूप से melanized मनका, और एक अत्यंत melanized मनका, क्रमशः रहे हैं।

चित्र 2
चित्रा 2: टीका मोतियों की संख्या के एक समारोह के रूप में मनका melanization। (क) प्रत्येक बिंदु के लिए एक एकल मनका (melanization मूल्यों के साथ गैर-melanized भारी melanized लोगों के लिए 100 के लिए मोती के लिए 0 से लेकर) और बिंदुओं में से प्रत्येक स्तंभ के melanization से पता चलता है एक व्यक्ति मच्छर प्रतिनिधित्व करते हैं। प्रत्येक mosquito एक, दो, तीन या मोतियों के साथ inoculated किया गया था। ठोस अंक प्रति मच्छर, पार अंक मध्यवर्ती melanization मूल्य का प्रतिनिधित्व उच्चतम melanization मूल्य प्रतिनिधित्व करते हैं, और खाली अंक निम्नतम melanization मूल्य प्रतिनिधित्व करते हैं। ठोस लाइनों मतलब melanization प्रति मनका उपचार प्रतिनिधित्व करते हैं, धराशायी लाइनों उच्चतम melanization का मतलब दिखाने के लिए, और बिंदीदार रेखा सबसे कम melanization का मतलब संकेत मिलता है। (ख) मतलब और melanization, उच्चतम melanization और मनका टीका उपचार के प्रति सबसे कम melanization की मानक त्रुटि। काला (गैर melanized भारी melanized लोगों के लिए 100 के लिए मोती के लिए 0 से लेकर melanization मूल्यों के साथ) मोतियों की संख्या के एक समारोह के रूप में मतलब मनका melanization प्रतिनिधित्व करते हैं। लाल बिंदु उच्चतम melanization का मतलब प्रतिनिधित्व करता है। नीला त्रिकोण सबसे कम melanization का मतलब प्रतिनिधित्व करता है। सलाखों के मानक त्रुटियाँ हैं। संदर्भ 19 से संशोधित। </ P>

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Discussion

यह इंजेक्शन तकनीक को प्रोत्साहित और मच्छरों में melanization प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए उपयोगी है। उदाहरण के लिए, यहाँ हम प्रतिरक्षा उत्तेजनाओं लोड के प्रभाव का अध्ययन किया।

इस प्रक्रिया में महत्वपूर्ण कदम ठीक से मच्छर टीका लगाना है। उड़ान की मांसपेशियों के लिए या मच्छर ही करने के लिए किसी भी अत्यधिक क्षति खिलाने से मच्छर रोक सकता है या विच्छेदन से पहले ही मार सकता है। एक दूसरा महत्वपूर्ण कदम बर्फ लंबे उन्हें मारने के बिना उन्हें बाहर दस्तक करने के लिए पर्याप्त पर मच्छरों रखने के लिए है। एक छोटे कंटेनर को कम करने और प्रक्रिया में तेजी लाने, के रूप में यह बर्फ के साथ घनिष्ठ संपर्क में सक्षम बनाता होगा। अंत में, विशेष देखभाल विच्छेदन के दौरान की जरूरत है, के रूप में चिमटी अन्यथा मोती तोड़ सकता है। मच्छर के ऊतकों में एम्बेडेड अधिक समय लग सकता है मोती विच्छेदन समाधान द्वारा रंग का हो।

मोती के कई प्रकार का उपयोग करना (जैसे निष्पक्षता से, सकारात्मक, या नकारात्मक आरोप लगाया मोती या कांच के मोती) विभिन्न परिणामों के लिए, नेतृत्व करेंगे के रूप में वे मीप्र सभी एक ही डिग्री 27,43 को melanized नहीं किया। दरअसल, निष्पक्षता से आरोप लगाया मोतियों की तुलना में, नकारात्मक आरोप लगाया मोतियों मच्छरों 27 के बीच melanization जवाब में अधिक परिवर्तनशीलता के लिए सीसा। कांच के मोती, दूसरे हाथ पर, मच्छरों में निष्क्रिय रहे हैं और सभी 27 पर melanization प्रतिक्रिया ट्रिगर नहीं है। नकारात्मक आरोप लगाया मोतियों इस प्रकार पसंद किया जा सकता है, लेकिन विभिन्न मोतियों के बीच तुलना भी प्रासंगिक हो सकता है। हालांकि, मनका के प्रकार पर निर्भर करता है, एक अलग डाई इंजेक्शन और विच्छेदन के समाधान के लिए आवश्यक हो सकता है; उदाहरण के लिए, cresyl वायलेट डाई जब कांच के मोती 27 का उपयोग कर मिथाइल हरे रंग की जगह इस्तेमाल किया जाना चाहिए।

यह इंजेक्शन तकनीक मच्छर के लिए आक्रामक है। यहां तक ​​कि अगर क्षति और चोट को कम से कम और नियंत्रित किया जा सकता है, वैकल्पिक उपकरणों के लिए एक बेहतर विकल्प हो सकता है, प्रयोगात्मक डिजाइन पर निर्भर करता है। यह वही मच्छर में प्रोत्साहित करने के लिए और एक साथ उपाय कई प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया मुश्किल है। कामजब प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया 28 के बीच सह-संबंध पर देख रहे परिवारों या मच्छरों के समूहों पर आईएनजी की आवश्यकता है। इसके अलावा, मोती केवल आंशिक रूप से एक कीट में परजीवी की वास्तविक उपस्थिति के समान हैं।

सबसे पहले, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को प्रेरित किया है, और फिर परिणामस्वरूप प्ररूपी प्रतिक्रिया, encapsulation मापा जाता है, लेकिन क्या दोनों के बीच में होता अज्ञात है। शारीरिक या आणविक उपकरण 10 के साथ इंजेक्शन युग्मन - 12 इस melanization प्रतिक्रिया के बारे में हमारी समझ में सुधार कर सकते हैं। 12 - melanization प्रतिक्रिया के अंतर्निहित तंत्र का अध्ययन करने के लिए, कुंजी एंजाइम या समर्थक phenoloxidase झरना के दौरान उत्पादन अणुओं की अभिव्यक्ति 10 मापा जा सकता है। हालांकि, ऊपर या नीचे पर नियमन इस तरह के अणुओं का पूरी तरह ध्यान केंद्रित, अंतिम encapsulation के वास्तविक परिणामों को जानने के बिना, melanization प्रक्रिया का गलत मूल्यांकन करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। इसलिए, का अध्ययन ENCApsulation और एक साथ आणविक तंत्र, अत्यधिक जानकारीपूर्ण किया जाएगा तथ्य यह है कि वे एक वैध वैज्ञानिक तकनीक जब अलग से इस्तेमाल प्रत्येक रहे हैं के बावजूद।

समाप्त करने के लिए, इस प्रतिरक्षा और प्रतिरोधक क्षमता के विकास का अध्ययन करने के लिए एक तकनीक है। वहाँ मलेरिया परजीवी को कीटनाशक प्रतिरोध और मच्छर संवेदनशीलता के बीच एक कड़ी के लिए सबूत बढ़ रही है, उदाहरण के लिए होता है। यह इंजेक्शन तकनीक क्षेत्र परीक्षण में, इस तरह के एक संदर्भ में इस्तेमाल किया जा सकता है और साथ ही। एक दूसरा काम दिशा में विस्तार से प्रतिरक्षा रास्ते अध्ययन करने के लिए जीन knockdowns के साथ प्रतिरक्षा उत्तेजना गठबंधन करने के लिए किया जाएगा।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Microcapillary glass tubes GB120TF-10 science-products.com GB120TF-10 http://www.science-products.com/Products/CatalogG/Glass/Glass.html
Microcaps Capillary pipette bulb Drumond 1-000-9000
negatively charged Sephadex CM C-25 beads Sigma-Aldrich, Steinheim, Germany C25120 SIGMA need few to start
Methyl green Sigma-Aldrich 323829 ALDRICH need few to start
Software ImageJ opensource Version 1.47f7 or later

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References

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इम्यूनोलॉजी अंक 119 प्रतिरक्षा melanization प्रतिक्रिया मच्छर, टीका मोती उत्प्रेरण
inoculating<em&gt; एनोफ़ेलीज़ gambiae</em&gt; प्रेरित और उपाय करने के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया melanization मोती के साथ मच्छरों
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Barreaux, A. M. G., Barreaux, P.,… More

Barreaux, A. M. G., Barreaux, P., Thomas, M. B., Koella, J. C. Inoculating Anopheles gambiae Mosquitoes with Beads to Induce and Measure the Melanization Immune Response. J. Vis. Exp. (119), e55013, doi:10.3791/55013 (2017).

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