在支撑脂双层配体纳米簇阵列
Summary
我们提出了一个协议官能玻璃与由流体脂质双层包围的纳米蛋白贴剂。这些基材与先进的光学显微镜兼容，并有望作为细胞黏附和迁移的研究平台。
Abstract
目前，处于钝化表面的细胞生物学研究的海洋产生黏附蛋白岛的有序阵列相当大的兴趣。在过去几年里，它已成为越来越清楚地看到活细胞反应，不仅能呈现给他们的分子的生化性质，而且这些分子的显示方式。创建蛋白微图案因此现在在许多生物学实验室的标准;纳米图案也更方便。然而，在细胞间相互作用的背景下，有必要图案不仅蛋白质，而且脂质双层。这种双PROTEO脂质的图案至今没有得到方便。我们提供了一个浅显的技术来创建支持玻璃蛋白质纳米点，提出了一种方法，用支撑脂双层（SLB）回填点间的空间。从示踪剂的光漂白包括在SLB荧光脂质，我们证明了双层的-PL表现出相当大的ANE流动性。用荧光基团功能化的蛋白点，使我们能够像他们，并表明他们在规则六边形网格排列。典型的点尺寸是大约800nm和这里展示的间距为2微米。这些基板有望成为用于细胞粘附，迁移和机械 – 感测研究，作为有用的平台。
Introduction
细胞粘附通过专门的细胞粘附分子（凸轮），蛋白质存在于细胞膜，其能够在细胞外基质或在另一细胞结合到其对应的发生。上粘附的细胞，最粘附分子包括整联无处不和钙粘蛋白，在簇1中的形式存在。 T淋巴细胞（T细胞）与抗原呈递细胞（的APCs）的相互作用提供的在两个小区之间的界面形成受体簇的重要性特别引人注目插图 – 通常被称为免疫突触。在形成与充当信令的平台2，3，4，并最终集中的T细胞形式微米尺度簇的表面上的APC，T细胞受体（TCR）的第一接触，以形成一个较大的中心超分子簇（CSMAC ）小姑娘= “外部参照”> 5，6，7。最近，已表明在APC上侧，所述TCR的配体也聚集8。
在T细胞的APC相互作用，混合动力系统的部署，其中APC通过与相关蛋白官能化的人造表面模仿的上下文中，已大大提高了我们突触接口2，3，4，5，6，7的理解。在这种情况下，它是设计APC模拟表面可捕捉到目标小区的一个或多个方面密切相关。例如，如果配体是在支持的脂质双层接枝，它们可以以双层的平面扩散，模仿APC表面上的情况，并在同一时间允许的形成CSMAC 6,7。类似地，APC上的簇已经通过在聚合物9，10，11，12，13，14的海创建配体的岛屿模仿。然而，这两个功能迄今尚未合并。
在这里，我们描述了一种新技术，以创建由脂质双层与扩散脂质包围抗CD3（靶向TCR复合物的抗体）的纳米点。双层使用朗缪尔-布罗杰特/朗缪尔-谢弗技术7，15，16沉积并如果需要的话，可以用一个特定的蛋白质被官能化-例如，T细胞整联配体（称为ICAM1）。此外，抗CD3蛋白点腠LD与另一种抗体或CAM来代替。虽然我们选择的蛋白质如T细胞黏附的研究平台将来使用，这里详细的策略可以适用于任何的蛋白质和DNA，甚至。
Protocol
Representative Results
Discussion
上述方案中的关键步骤是通过一个支撑脂双层相关的蛋白质纳米点或这些点周围的空间的回填的形成。相对于蛋白质纳米点的第一个关键步骤是胎圈掩模的制备方法。盖滑动的清洁是至关重要的。将载玻片需要与被推荐用于清洗石英比色杯中，或用氧等离子体的洗涤剂溶液中或者清洗。其它清洁技术，如浸渍在乙醇或异丙醇处理不会使玻璃充分亲水，并因此不支持大覆盖珠单层的形成。与此同时?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢洛朗Limozin，皮尔·迪拉德和阿斯特丽德·瓦赫勒继续有关手机应用富有成效的讨论。我们也从PLANETE洁净室设备感谢弗雷德里克·贝杜他与SEM观察的帮助。这项工作是部分由欧洲研究委员会通过批准号307104 FP / 2007-2013 / ERC资助。
Materials
| Glass coverslips | Assistent, Karl Hecht KG | |
| Observation chamber | Home made | |
| Alkaline surfactant concentrate (Hellmanex) | Hella Analytics | 9-307-011-4-507 |
| Ultra-sonicator | ThermoFisher | |
| Desiccator | Labbox | |
| Crystallizer | Shott | |
| Neutravidine | Thermo Fischer Scientifique | 84607 |
| PBS | Sigma-aldrich | P3813 |
| Water MQ | ELGA, Veolia France | |
| Silica beads | Corpuscular Inc | 147114-10 |
| APTES | Sigma-aldrich | A3648 |
| BSA-Biotin | Sigma-aldrich | A8549 |
| DOPC | Avanti Polar Lipids | 850375C |
| Dansyl-PE | Avanti Polar Lipids | 810330C |
| Chloroform | Sigma-aldrich | 650471 |
| Gastight syringe | Dominique Dustcher , France | 74453 |
| Film balance | NIMA | Medium |
| Microscope | Zeiss, Germany | TIRF-III system |
| Aluminium Target | Kurt J. Lesker Compagny, USA | |
| Radio Frequency Magnetron sputtering Système | modified SMC 600 tool by ALCATEL , France |
References
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