Intravital माइक्रोस्कोपी और एक हेयरलैस माउस के कान के सिरे में thrombus प्रेरण
Summary
गंजा SKH1 घंटे का घंटा माउस के कान मॉडल की जांच की microvascular बिस्तर में पूर्व शल्य तैयारी के बिना microcirculation और phototoxic thrombus प्रेरण के intravital प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी सक्षम बनाता है। इसलिए, गंजा माउस के कान विवो मॉडल में एक उत्कृष्ट microvascular thrombus गठन, thrombus विकास, और थ्रोम्बोलिसिस दौरान जटिल बातचीत का अध्ययन करने के लिए है।
Abstract
संवहनी रोगों के thrombotic जटिलताओं रुग्णता और औद्योगिक देशों में मृत्यु दर में से एक प्रमुख कारण हैं। Thrombus गठन के दौरान सेलुलर और गैर सेलुलर रक्त घटकों के बीच जटिल संबंधों के कारण, शरीर विज्ञान और घनास्त्रता के pathophysiology के विश्वसनीय पढ़ाई केवल विवो में किया जा सकता है। इसलिए, इस लेख गंजा चूहों में एक कान मॉडल प्रस्तुत करता है और microcirculation, thrombus गठन, और थक्का विकास के इन विवो विश्लेषण पर केंद्रित है। intravital प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी और अंतःशिरा (चतुर्थ) संबंधित फ्लोरोसेंट रंजक के आवेदन का उपयोग करके, अलिंद में microcirculation के दोहराव विश्लेषण आसानी से शल्य तैयार करने के लिए आवश्यकता के बिना किया जा सकता है,। इसके अलावा, इस मॉडल विभिन्न मुद्दों के इन विवो पढ़ाई, घाव भरने, reperfusion चोट, या एंजियोजिनेसिस सहित के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। सारांश में, गंजा चूहों के कान में विव के लिए एक आदर्श मॉडल हैशारीरिक या pathophysiological की स्थिति में हैं और विभिन्न प्रणालीगत या सामयिक उपचार की प्रतिक्रिया के मूल्यांकन के लिए त्वचा microcirculation की ओ अध्ययन।
Introduction
वर्तमान अनुच्छेद के प्रयोजन के प्रत्यक्ष अवलोकन और microcirculation के विश्लेषण, thrombus गठन, और थक्का विकास के लिए गंजा माउस के अलिंद के लिए आवेदन किया intravital माइक्रोस्कोपी की तकनीक का वर्णन करने के लिए है। 1000 में 1 की एक घटना दर के साथ, शिरापरक घनास्त्रता अभी भी रुग्णता का एक आम कारण है। हालांकि निदान, रोकथाम रणनीतियों, और चिकित्सा हाल के वर्षों में विकसित किया गया है, शिरापरक घनास्त्रता का एक तिहाई एक फुफ्फुसीय अन्त: शल्यता 1 के रूप में प्रकट होता है। धमनी घनास्त्रता हृदय रोगों, जो औद्योगिक देशों में मौत का सबसे आम कारण हैं में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। धमनी atherosclerotic सजीले टुकड़े का टूटना के आधार पर घनास्त्रता दिल का दौरा, mesenteric रोधगलन, और मिरगी में शामिल है। हर सर्जरी रक्त घटकों को subendothelial संरचनाओं को उजागर करता है, रक्त प्रवाह की गतिशीलता बदल जाता है, और रोगी immobilizes। निचले अंग, अंग टी की endoprosthetic सर्जरी मेंransplantation और फ्लैप सर्जरी घनास्त्रता जटिलताओं के लगातार कारण होते हैं। विशेष रूप से माईक्रवैस्कुलर घनास्त्रता अक्सर नैदानिक लक्षणों की कमी के कारण, अपरिवर्तनीय क्षति का कारण बनता है। इसी तरह, microvascular घनास्त्रता थ्रोम्बोटिक थ्रोम्बोसाइटोपेनिक परपूरा, पूति, फैलाया intravascular जमावट, antiphospholipid सिंड्रोम, और क्रोनिक शिरापरक कमी, अन्य लोगों के अलावा सहित कई रोगों में एक महत्वपूर्ण नियम निभाता है।
चिकित्सा और घनास्त्रता की रोकथाम के लिए कई नई दवाओं हाल के वर्षों में विकसित किए गए, लेकिन एन्टीप्लेटलेट दवाओं और थक्का-रोधी अभी भी दुष्प्रभाव, कमी विरोधी है, और लंबी अवधि के प्रभाव शामिल हैं। इन कमियों को आपातकालीन चिकित्सा सेवा में समस्याओं को जन्म दे। इस प्रकार, और अधिक शोध जटिल प्रक्रियाओं है कि घनास्त्रता, जो शायद ही इन विट्रो में नकली किया जा सकता है के दौरान होने को उजागर करने की जरूरत है।
गंजा SKH1 घंटे का घंटा माउस लंदन में एक चिड़ियाघर 1926 की खोज की थी।गुणसूत्र 14 पर एक जीन दोष के कारण, पशु अपने फर प्रसव के बाद दिन 10 के बाद यह अच्छी तरह से vascularized अलिंद वाहिकाओं के intravital माइक्रोस्कोपी के लिए सुलभ बना देता है खो देता है। कान की औसत मोटाई 300 सुक्ष्ममापी है। यह त्वचा की दो परतों, जो उपास्थि से अलग होते हैं के होते हैं। उपास्थि के उत्तल पृष्ठीय पक्ष पर, 3 संवहनी बंडलों earlobe दर्ज करें। शिखर संवहनी आर्क्स और बेसल शंट तीन बंडलों कनेक्ट। venules 200 सुक्ष्ममापी (बेसल) और 10 सुक्ष्ममापी (शिखर) के बीच व्यास की है। बंद meshed केशिकाओं के चारों ओर खाली बाल कूप 2। गंजा SKH1 घंटे का घंटा माउस की शारीरिक रचना अलिंद घनास्त्रता अनुसंधान के लिए एक शक्तिशाली और लागत प्रभावी मॉडल बनाता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
वहाँ SKH1 घंटे का घंटा चूहों के कान के सिरे में सफल thrombus शामिल करने के लिए कई महत्वपूर्ण कदम हैं। समस्या निवारण के लिए, प्रोटोकॉल के संबंधित चरणों कोष्टक में दर्शाया गया है।
6 सप्ताह और एपिडर?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों कोई स्वीकृतियां की है।
Materials
| SKH-1/hr mice | Charles River | 477 | can be purchased from other vendors |
| standard laboratory food | ssniff Spezialdiaeten | V1594-0 | can be purchased from other vendors |
| operation stereomicroscope | Leica | M651/M655 | can be purchased from other vendors |
| intravital microscope | Zeiss | Axiotech Vario 100 | can be purchased from other vendors |
| objective (20x/0.95) | Zeiss | 20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR | can be purchased from other vendors |
| objective (63x/0.95) | Zeiss | 63x/0,95 W; ACHROPLAN | can be purchased from other vendors |
| black and white CCD-camera | Pieper | FK 6990 IQ-S | can be purchased from other vendors |
| DVD-recorder | Panasonic | DMR-EX99V | can be purchased from other vendors |
| sodium chloride | Braun | 5/12612055/1011 | can be purchased from other vendors |
| Ketamine 10% | Bela pharm | F3901-6 | can be purchased from other vendors |
| Xylazine 2% | Bayer | 6293841.00.00 | can be purchased from other vendors |
| FITC-dextran 5% | Sigma | 46945-100MG-F | can be purchased from other vendors |
| dexapanthenol 5% eye ointment | Bayer | 6029009.00.00 | can be purchased from other vendors |
| formaldehyde 4% | Sigma | HT501128-4L | can be purchased from other vendors |
| DMSO | Sigma | 472301 | can be purchased from other vendors |
| coverslips 5 x 5 x 1 mm | Menzel | L4339 | can be purchased from other vendors |
| plasters | Leukosilk | 4683400 | can be purchased from other vendors |
| centrifuge | Beckman Coulter | CLGS 15 | can be purchased from other vendors |
| hematology analyzer | Sysmex | KX-21 A6980 | can be purchased from other vendors |
| EDTA-blood tube | Sarstedt | 201,341 | can be purchased from other vendors |
| cotton swabs | Sanyo | 604-A-1 | can be purchased from other vendors |
| infrared light | Beurer | 5/13855 | can be purchased from other vendors |
| single use synringe | Braun | 2020-08 | can be purchased from other vendors |
| insulin syringe | Braun | 9161502 | can be purchased from other vendors |
| disposable hypodermic needles | Braun | 465 7640 | can be purchased from other vendors |
| end-to-end capillary | Sarstedt | 19,447 | can be purchased from other vendors |
| heating plate | Klaus Effenberg | OP-T 185/03 | can be purchased from other vendors |
| scissors 14,5 cm | Aesculap | BC259R | can be purchased from other vendors |
| needle Holder | Aesculap | BM081R | can be purchased from other vendors |
| microforceps | Aesculap | BD331R | can be purchased from other vendors |
| microscissors | Aesculap | OC496R | can be purchased from other vendors |
| scalpel 21 | Dahlhausen | 11.000.00.511 | can be purchased from other vendors |
| Prolene 7-0 | Ethicon | XNEH7470 | can be purchased from other vendors |
| Prolene 6-0 | Ethicon | XN8706.P33 | can be purchased from other vendors |
| electrocautery | Servoprax | H40140 | can be purchased from other vendors |
| acrylglass pad | integrated heating, 0,5 cm high plane |
References
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