ヘアレスマウスの耳たぶにおける生体顕微鏡および血栓誘導

Summary

無毛SKH1時間の^時間のマウスの耳のモデルを調べ、微小血管床における従来の外科的準備なしに微小循環及び光毒性血栓誘導の生体内蛍光顕微鏡検査を可能にします。したがって、ヘアレスマウスの耳は、微小血管血栓形成、血栓の発生、及び血栓溶解の間の複雑な相互作用を研究するためのインビボモデルにおいて優れています。

Abstract

血管疾患の血栓性合併症は、工業国における罹患率および死亡率の1つの主要な原因です。血栓形成の間の細胞および非細胞性血液成分間の複雑な相互作用のために、生理学および血栓症の病態生理の信頼性試験は、in vivoで行うことができます。そこで、この記事では、ヘアレスマウスにおける耳のモデルを提示し、微小循環、血栓形成、および血栓進化のin vivoでの分析に焦点を当てています。生体内蛍光顕微鏡および各蛍光色素の静脈内（IV）アプリケーションを使用して、耳介における微小循環の繰り返し分析を容易に外科的準備を必要とすることなく、行うことができます。さらに、このモデルは、創傷治癒、再灌流障害、または血管新生を含む、さまざまな問題のin vivo試験のために適合させることができます。要約すると、無毛マウスの耳にVIVのための理想的なモデルであります生理学的または病態生理学的条件下で、別の全身または局所治療に対する反応の評価のための皮膚微小循環のOの研究。

Introduction

本資料の目的は、微小循環、血栓形成、および血栓進化の直接観察及び分析のためのヘアレスマウスの耳介に適用される生体顕微鏡の技術を記述することです。千中1の発生率では、静脈血栓症は、まだ罹患率の一般的な原因です。診断、予防戦略、および療法が近年開発されてきたが、静脈血栓症の三分の一は、肺塞栓症¹として現れます。動脈血栓症は、工業国における最も一般的な死亡原因である心血管疾患において重要な役割を果たしています。アテローム性動脈硬化プラークの破裂に基づいて動脈血栓症は、心臓発作、腸間膜梗塞、および脳卒中に関与しています。すべての手術は、血液成分への内皮下の構造を公開して血流の動態を変化させ、患者を固定します。下肢のエンドプロテーゼ手術、臓器Tにransplantationとフラップ手術血栓症は、合併症の頻繁な原因です。特に、微小血管の血栓症は、頻繁に起因する臨床症状の不足のために、不可逆的な損傷を引き起こします。同様に、微小血管血栓症は、とりわけ、血栓性血小板減少性紫斑病、敗血症、播種性血管内凝固、抗リン脂質症候群、および慢性静脈不全、を含むいくつかの疾患において重要なルールを果たしています。

血栓症の治療および予防のためのいくつかの新しい薬が近年開発されたが、抗血小板薬と抗凝固薬はまだ、副作用を持っていないこと拮抗薬、および長時間の効果を備えています。これらの欠陥は、救急医療における問題につながります。このように、より多くの研究はほとんどin vitroでシミュレートすることはできない血栓症、中に発生する複雑なプロセスを解明するために必要とされます。

ヘアレスSKH1時間の^時間のマウスは、ロンドンの動物園で1926年に発見されました。第14染色体上の遺伝子欠損に、動物は、生後一日の後にその毛皮を失う10.これは血管の生体顕微鏡によく血管新生した耳介にアクセスできるようになります。耳の平均厚さは300μmです。それは軟骨で区切られた真皮の2層から構成されています。軟骨の凸状の背側では、3つの維管束は、耳たぶを入力してください。アピカル血管弧と基礎シャントが3つのバンドルを接続します。細静脈は、200μmの（基礎）および10μM（頂端）との間の直径を有します。クローズ噛み合っ毛細血管は、空の毛包^2を囲みます。ヘアレスSKH1-HRの^{時間マウス}の解剖学は、耳介血栓症研究のための強力かつコスト効率の高いモデルになります。

Protocol

全てのin vivo実験（7221.3-1-006 / 15）は、動物の保護及び実験動物の管理と使用に関するNIHガイド（実験動物資源研究所、国立研究評議会）にドイツの法律に従って行いました。 動物の1.一般キーピング 4〜6週齢のオスSKH1時間の時間のマウスを用いた実験を行います。 20〜25 gの体重を有する動物を使用します。 水と食料を自由摂取への安…

Representative Results

血栓形成のカンナビノイドの治療の効果 FITC-デキストランの0.05ミリリットルの注射の際に、光毒性血栓誘導は、内皮病変と頭頂血小板プラグ（ 図2及び3）の形成をもたらします。本研究では、カンナビノイド（5ミリグラム/ kg体重）またはビヒクルの腹腔内注射後に血栓誘導は全て細静脈（ ?…

Discussion

SKH1-HRの^{時間マウス}の耳たぶに成功血栓誘導のためのいくつかの重要なステップがあります。トラブルシューティングのために、プロトコルの各ステップは、括弧内に示されています。

6週間と表皮の低角化と – 検査条件は、4歳で若い動物では理想的です。古い動物では、血管の視覚化の品質は、皮膚表面と標的血管（ステップ1.1）との間のより高い距離に悪い?…

Materials

SKH-1/hr mice	Charles River	477	can be purchased from other vendors
standard laboratory food	ssniff Spezialdiaeten	V1594-0	can be purchased from other vendors
operation stereomicroscope	Leica	M651/M655	can be purchased from other vendors
intravital microscope	Zeiss	Axiotech Vario 100	can be purchased from other vendors
objective (20x/0.95)	Zeiss	20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR	can be purchased from other vendors
objective (63x/0.95)	Zeiss	63x/0,95 W; ACHROPLAN	can be purchased from other vendors
black and white CCD-camera	Pieper	FK 6990 IQ-S	can be purchased from other vendors
DVD-recorder	Panasonic	DMR-EX99V	can be purchased from other vendors
sodium chloride	Braun	5/12612055/1011	can be purchased from other vendors
Ketamine 10%	Bela pharm	F3901-6	can be purchased from other vendors
Xylazine 2%	Bayer	6293841.00.00	can be purchased from other vendors
FITC-dextran 5%	Sigma	46945-100MG-F	can be purchased from other vendors
dexapanthenol 5% eye ointment	Bayer	6029009.00.00	can be purchased from other vendors
formaldehyde 4%	Sigma	HT501128-4L	can be purchased from other vendors
DMSO	Sigma	472301	can be purchased from other vendors
coverslips 5 x 5 x 1 mm	Menzel	L4339	can be purchased from other vendors
plasters	Leukosilk	4683400	can be purchased from other vendors
centrifuge	Beckman Coulter	CLGS 15	can be purchased from other vendors
hematology analyzer	Sysmex	KX-21 A6980	can be purchased from other vendors
EDTA-blood tube	Sarstedt	201,341	can be purchased from other vendors
cotton swabs	Sanyo	604-A-1	can be purchased from other vendors
infrared light	Beurer	5/13855	can be purchased from other vendors
single use synringe	Braun	2020-08	can be purchased from other vendors
insulin syringe	Braun	9161502	can be purchased from other vendors
disposable hypodermic needles	Braun	465 7640	can be purchased from other vendors
end-to-end capillary	Sarstedt	19,447	can be purchased from other vendors
heating plate	Klaus Effenberg	OP-T 185/03	can be purchased from other vendors
scissors 14,5 cm	Aesculap	BC259R	can be purchased from other vendors
needle Holder	Aesculap	BM081R	can be purchased from other vendors
microforceps	Aesculap	BD331R	can be purchased from other vendors
microscissors	Aesculap	OC496R	can be purchased from other vendors
scalpel 21	Dahlhausen	11.000.00.511	can be purchased from other vendors
Prolene 7-0	Ethicon	XNEH7470	can be purchased from other vendors
Prolene 6-0	Ethicon	XN8706.P33	can be purchased from other vendors
electrocautery	Servoprax	H40140	can be purchased from other vendors
acrylglass pad			integrated heating, 0,5 cm high plane