Örat modell av den hårlösa SKH1-Hr hr mus möjliggör intravital fluorescensmikroskopi av mikrocirkulationen och fototoxisk tromb induktion utan föregående kirurgisk beredning i den undersökta mikrovaskulära bädden. Därför är örat av den hårlösa musen ett utmärkt in vivo-modell för att studera de komplexa interaktioner under mikrovaskulär trombbildning, tromb evolution och trombolys.
Trombotiska komplikationer av kärlsjukdomar är en ledande orsak till sjuklighet och dödlighet i industriländerna. På grund av att de komplexa interaktionerna mellan cellulära och icke-cellulära blodkomponenter under trombbildning, kan tillförlitliga studier av fysiologi och patofysiologi av trombos endast utföras in vivo. Därför denna artikel presenteras en öronmodell hårlösa möss och fokuserar på analys av mikrocirkulationen, blodproppsbildning och tromb evolution in vivo. Genom användning av intravital fluorescensmikroskopi och intravenös (iv) applicering av respektive fluorescerande färgämnen, kan lätt utföras en repetitiv analys av mikrocirkulationen i hjärtörat, utan behov av kirurgisk beredning. Dessutom kan denna modell anpassas för in vivo-studier av olika frågor, inklusive sårläkning, reperfusionsskada, eller angiogenes. Sammanfattningsvis är örat av hårlösa möss en idealmodell för in vivo studie av hud mikrocirkulation i fysiologiska eller patofysiologiska tillstånd och för utvärdering av dess reaktion på olika systemiska eller utvärtes behandlingar.
Syftet med denna artikel är att beskriva den teknik för intravital mikroskopi appliceras på hjärtörat av den hårlösa musen för direkt observation och analys av mikrocirkulationen, trombbildning, och tromb evolution. Med en incidensen av en i 1000, är venös trombos fortfarande en vanlig orsak till sjuklighet. Även diagnostik, förebyggande strategier och behandlingar har utvecklats under de senaste åren, en tredjedel av ventrombos manifesterar som en lungemboli 1. Arteriell trombos spelar en avgörande roll i hjärt- och kärlsjukdomar, som är den vanligaste dödsorsaken i industriländerna. Arteriell trombos baseras på bristning av aterosklerotiska plack är involverad i hjärtinfarkt, mesenteriska infarkter och slaganfall. Varje operation exponerar subendoteliala strukturer till blodkomponenter, ändrar dynamiken i blodflödet, och immobiliserar patienten. I endoprotesanordning kirurgi av den nedre extremiteten, organ transplantation och flikkirurgi trombos är vanliga orsaker till komplikationer. Mikrovaskulär trombos i synnerhet orsakar ofta obotliga skador på grund av bristen på kliniska symptom. Likaså spelar mikrovaskulär trombos en avgörande regel i flera sjukdomar, inklusive trombotisk trombocytopen purpura, sepsis, disseminerad intravaskulär koagulation, antifosfolipidsyndrom och kronisk venös insufficiens, bland annat.
Flera nya läkemedel för behandling och förebyggande av blodpropp har utvecklats under de senaste åren, men trombocythämmande läkemedel och antikoagulantia har fortfarande biverkningar, brist antagonister och har långvariga effekter. Dessa brister leder till problem i akut medicinsk vård. Sålunda behövs mer forskning för att avslöja de komplexa processer som sker under trombos, vilket knappast kan simuleras in vitro.
Den hårlösa SKH1-Hr HR mus upptäcktes 1926 i en djurpark i London.På grund av en gendefekt på kromosom 14, förlorar djuret pälsen efter postnatal dag 10. Detta gör den väl vaskulariserad ytteröra tillgänglig för intravital mikroskopi av kärlen. Den genomsnittliga tjockleken av örat är 300 um. Det består av två skikt av dermis, som skiljs åt av brosk. På den konvexa dorsala sidan av brosket, 3 kärlknippena in i örsnibben. Apikala kärl bågar och basala shuntar ansluta tre buntar. De venoler har diametrar mellan 200 ^ m (basal) och 10 | j, m (apikala). Finmaskigt kapillärer omger tomma hårsäckar 2. Anatomi hårlösa SKH1-Hr HR musen gör öronmusslan ett kraftfullt och kostnadseffektivt modell för trombos forskning.
Det finns flera viktiga steg för en framgångsrik tromb induktion i örsnibben av SKH1-hr hr möss. För felsökning är de respektive stegen i protokollet indikeras i parentes.
Examination förhållandena är idealiska i unga djur vid en ålder av 4 – 6 veckor och med låg förhorning av epidermis. I äldre djur, är kvaliteten på visualisering av kärlen värre och mindre jämförbar grund av den högre avståndet mellan hudytan och målsekärlen (steg 1,1).
<p class="jove…The authors have nothing to disclose.
Författarna har inga bekräftelser.
SKH-1/hr mice | Charles River | 477 | can be purchased from other vendors |
standard laboratory food | ssniff Spezialdiaeten | V1594-0 | can be purchased from other vendors |
operation stereomicroscope | Leica | M651/M655 | can be purchased from other vendors |
intravital microscope | Zeiss | Axiotech Vario 100 | can be purchased from other vendors |
objective (20x/0.95) | Zeiss | 20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR | can be purchased from other vendors |
objective (63x/0.95) | Zeiss | 63x/0,95 W; ACHROPLAN | can be purchased from other vendors |
black and white CCD-camera | Pieper | FK 6990 IQ-S | can be purchased from other vendors |
DVD-recorder | Panasonic | DMR-EX99V | can be purchased from other vendors |
sodium chloride | Braun | 5/12612055/1011 | can be purchased from other vendors |
Ketamine 10% | Bela pharm | F3901-6 | can be purchased from other vendors |
Xylazine 2% | Bayer | 6293841.00.00 | can be purchased from other vendors |
FITC-dextran 5% | Sigma | 46945-100MG-F | can be purchased from other vendors |
dexapanthenol 5% eye ointment | Bayer | 6029009.00.00 | can be purchased from other vendors |
formaldehyde 4% | Sigma | HT501128-4L | can be purchased from other vendors |
DMSO | Sigma | 472301 | can be purchased from other vendors |
coverslips 5 x 5 x 1 mm | Menzel | L4339 | can be purchased from other vendors |
plasters | Leukosilk | 4683400 | can be purchased from other vendors |
centrifuge | Beckman Coulter | CLGS 15 | can be purchased from other vendors |
hematology analyzer | Sysmex | KX-21 A6980 | can be purchased from other vendors |
EDTA-blood tube | Sarstedt | 201,341 | can be purchased from other vendors |
cotton swabs | Sanyo | 604-A-1 | can be purchased from other vendors |
infrared light | Beurer | 5/13855 | can be purchased from other vendors |
single use synringe | Braun | 2020-08 | can be purchased from other vendors |
insulin syringe | Braun | 9161502 | can be purchased from other vendors |
disposable hypodermic needles | Braun | 465 7640 | can be purchased from other vendors |
end-to-end capillary | Sarstedt | 19,447 | can be purchased from other vendors |
heating plate | Klaus Effenberg | OP-T 185/03 | can be purchased from other vendors |
scissors 14,5 cm | Aesculap | BC259R | can be purchased from other vendors |
needle Holder | Aesculap | BM081R | can be purchased from other vendors |
microforceps | Aesculap | BD331R | can be purchased from other vendors |
microscissors | Aesculap | OC496R | can be purchased from other vendors |
scalpel 21 | Dahlhausen | 11.000.00.511 | can be purchased from other vendors |
Prolene 7-0 | Ethicon | XNEH7470 | can be purchased from other vendors |
Prolene 6-0 | Ethicon | XN8706.P33 | can be purchased from other vendors |
electrocautery | Servoprax | H40140 | can be purchased from other vendors |
acrylglass pad | integrated heating, 0,5 cm high plane |