이 프로토콜의 목표 경도 평가 vivo에 는 반자동된 microcomputed 단층 기반 정량적 구조 분석을 사용 하 여 될 수 있는 누드 쥐 척추 압축 골다공증 관련 골절 모델을 생성 하는 것입니다.
골다공증 관련 척추 압축 골절 (OVCFs)는 세계 인구 나가로 보급 증가 함께 일반적이 고 임상 unmet 필요. 동물 OVCF 모델 변환 조직 엔지니어링 전략의 전 임상 개발에 필수적입니다. 다양 한 모델은 현재 존재 하는 동안 단일 누드 쥐에서 여러 높은 재현성 척추 결함을 유도 하는 최적화 된 방법을이 프로토콜에 설명 합니다. 소설 경도 반자동된 microcomputed 단층 촬영 (µCT)-척추 결함의 정량적 구조 분석을 기반으로 또한 선발. 간단히, 쥐 여러 시간 포인트 수술에 몇 군데 있었다. 1 일 검사 표준 위치로 방향도 고 관심의 표준 볼륨 정의 되었다. 각 쥐의 후속 µCT 스캔 했다 동일한 볼륨의 다음 새로운 뼈 형성에 대 한 평가 분석 그래서 하루 1 스캔을 자동으로 등록 됩니다. 이 다재 다능 한 접근 어디 경도 영상 기반 분석 정확한 3 차원 반자동된 정렬에서 혜택을 수 있는 다른 모델의 다양 한 적응 될 수 있다. 함께 찍은,이 프로토콜에서는 골다공증 및 뼈 연구를 위한 쉽게 정량 하 고 쉽게 재현 가능한 시스템을 설명 합니다. 제안 된 프로토콜은 4 개월 누드 ovariectomized 쥐 및 생성, 이미지, 조직 크기와 장비에 따라 두 개의 척추 결함 분석을 2.7 그리고 4 h 사이 골다공증을 유발 합니다.
200 백만 이상의 사람들이 전세계 골다공증1에서 고통. 기본 병 적인 감소 뼈 미네랄 밀도 (BMD)에 하 고 변경 된 뼈 마이크로아키텍처 뼈 취약성 및, 따라서, 골절2의 상대 위험 증가. 골다공증은 너무 유행 하 고는 WHO가 정의 그것은 중요 한 공중 위생 관심사는 건강에 해로운. 또한, 세계의 인구는 예상 대로 나이에, 골다공증 되 더 일반적으로 예상 된다.
골다공증성 척추 압축 골절은 가장 일반적인 취약성 골절, 미국에서 1 년 이상 750000 추정. 그들은 많은 중요 한 병 적 상태와 관련 된 9 배 높은 사망률 평가3입니다. 임상 시험에서 현재 사용할 수 외과 개입, vertebroplasty, kyphoplasty, 등 가짜 치료4,5,이 환자에 게 통증 관리만 사용할 수를 떠나 보다 더 더 효과적인 것을 발견 했다. 현재 OVCF 치료 제한 때문에, 장애6,,78을 복제할 수는 동물 모델을 개발 하는 것이 필수적입니다. 현재 치료 방법의 조사와 임상 연습으로 번역할 것 이다 새로운 치료법의 개발에 수 같은 동물 모델을 용이 하 게. 골다공증 유발 되 고 ovariectomy1,,910,11, 와 함께에서 낮은 칼슘 식단 (LCD)의 관리를 통해 모델 동물에서 입은 12 , 13 , 14 , 15. 추가 모델 OVCFs와 관련 된 뼈 손실, 척추 뼈 결함 골다공증성 immunocompetent 쥐 16,17,,1819에 설치 되었다 20,,2122,,2324. 이 작품에서 모델 골다공증 immunocompromised 쥐의 척추 결함 모델 제공 됩니다. 이 새로운 모델은 다양 한 소스와 OVCFs 같은 어려운 골절의 복구에 대 한 종에서 파생 된 줄기 세포 관련 세포 기반 요법 평가 하 사용할 수 있습니다.
뼈 이미징 골절 및 뼈 질병의 평가의 중요 한 부분 이다. 고급 이미징 방법 뼈 구조 변경 및 재생 전략25의 정확한 평가 위해 개발 되었다. 그 중 µCT 이미징 고해상도 3D 이미지를 제공 하는 비-침략 적, 쉬운–사용, 그리고 저렴 한 방법으로 떠오르고 있다. 고해상도 3D 마이크로아키텍처26 다음 양적 분석 수 있는 뼈 제공 µCT 이미징 골다공증 환자 평가에 다른 modalities에 몇몇 이점이 있다. 후자는 다음 사용할 수 있습니다 제안 된 치료의 치료 효과 비교. 실제로, µCT 이미징 vivo에서 척추 결함 재생1,,1627모니터링에 대 한 황금 표준입니다. 그러나, 몇 가지 간행물28,29,,3031 고용 사용자 종속성, 보간 편견, 및 µCT의 정밀도 오류를 최소화 하기 위해 자동화 등록 도구 이미징 기반 분석입니다. 최근에, 우리는이 프로토콜32 에 설명 된 대로, 표준화 된 뼈에서 뼈 재생의 분석을 개선 하기 위해 등록 절차를 사용 하는 첫번째 했다.
여기 설명 하는 방법을 OVCFs에 대 한 새로운 세포 치료의 효과 연구 하는 데 사용 될 수, 방해 받지 않는 호스트에 의해 T 세포 응답을 xenogeneic 또는 수용자 세포를 거부할 수 있습니다. 골다공증은 젊은 쥐 ovariectomy (OVX) 통해과 LCD의 4 개월에에서 유도 된다. OVX 쥐, LCD와 결합의 젊은 나이 있었습니다, 돌이킬 수 없는 뼈 손실을 선도 하 여 폐 경 후 골다공증을 흉내 낸 낮은 피크 뼈 질량에 도달. 이 사실은, LCD 중 리 모델링을 모델링 하는 뼈에서 쥐 전환 나이의 3 달 주변에 상 추33, 위에 골다공증을 유지의 가능성을 증가에 의해 분할 설명 될 수 있다 시간입니다. 젊은 동물을 사용 하 여 게이 모델 보다 비용 효과적인, 그들은 적은 비용으로. 그럼에도 불구 하 고, 그것은 본질적으로 하지 노화 동물의 생물 학적 변화에 대 한 회계에 의해 제한 됩니다.
골다공증은 척추 압축 골절은 척추와 척추 체의 붕괴에서 그 결과에 로드가 증가 의해 발생의 가장 널리 퍼진 원인. 그러나, 그것은 실질적으로 진정한 비슷한 척추 붕괴를 복제 하는 설치류에서 상해를 생성할 수입니다. 대신, 연구원은 OVCFs16,17,18,19,20,,<sup c…
The authors have nothing to disclose.
연구에 대 한 재생 의학 (CIRM) (TR2 01780) 캘리포니아 연구소에서 교부 금에 의해 지원 되었다.
Isoflurane | MWI Animal Health, Pasadena, CA | 501017 | |
BetadineSolution | MWI Animal Health, Pasadena, CA | 4677 | |
Chlorhexidine Gluconate2%scrub | MWI Animal Health, Pasadena, CA | 510083 | |
Isopropyl Alcohol 70%-quart | MWI Animal Health, Pasadena, CA | 501044 | |
Carprofen | MWI Animal Health, Pasadena, CA | 26357 | |
Buprenorphine0.3mg/mL | MWI Animal Health, Pasadena, CA | 56163 | |
Ovariectomized Athymic nude rats | Harlan Laboratories, Indianapolis, IN | Hsd:RH-Foxn1 rnu | |
Low calcium food | Newco Distributors, Inc., CA | 1814948 (5AV8 AIN-93M w/low calcium) | |
Phosphate Buffered Saline | Life Technologies Corporation | 14190250 | |
Dermabond | J AND J ETHICON | DHVM12 | |
Anesthesia machine | Patterson Scientific | TEC 3EX | |
Slide Top Induction Chambers | Patterson Scientific | 78917833 | |
ProStation Heated Workstation | Patterson Scientific | 78914731 | |
Surgical drape | HALYARD HEALTH INC | 89101 | |
Magnetic fixator retraction system | Fine Science Tools, Inc., CA | 18200-50 | |
Dissecting Scissors, 10cm, Curved, SS | World Precision Instruments, FL | 14394 | |
Iris Scissors, 11.5cm, 45°Angle, Serrated, Sharp/Sharp | World Precision Instruments, FL | 503225 | |
Forceps, no. 5 | World Precision Instruments, FL | 555048FT | |
Micro Mosquito Hemostatic Forceps | World Precision Instruments, FL | 503360 | |
Sterile cotton gauze | Medtronic, MINNEAPOLIS, MN | 9024 | |
Absorption Spears – Mounted/Sterile | Fine Science Tools, CA | 18105-01 | |
Syringe, 1 ml | TERUMO TERUMO MED | SS-01T | |
Needle, 25gauge | BD MED SYS INJECTION SYS | 305127 | |
Laminar flow hood | Baker | SterilGARD e3-Class II Type A2 Biosafety Cabinet | |
Thermal Cautery Unit | World Precision Instruments, FL | 501292 | |
Micro-Drill OmniDrill115/230V | World Precision Instruments, FL | 503598 | |
Trephines for Micro Drill, 2mm diameter | Fine Science Tools, CA | 18004-20 | |
3-0 Vicryl undyed 27” SH taper | J AND J ETHICON | 1663G | |
4-0 Ethilon black 18” PC3 conventional cutting | J AND J ETHICON | 1954G | |
Conebeam in vivo microCT (vivaCT 40) | Scanco Medical | vivaCT 40 | |
SCANCO Medical microCT systems software suite | Scanco Medical | vivaCT 40 | |
Analyze software | Biomedical Imaging, Mayo Clinic, Rochester, MN | Analyze 12 | Image analysis software |
Veterenery eye ointment |