Sonographie in experimentellen reproduktiven Untersuchungen an Ratten
Summary
Dieses Manuskript beschreibt das Dienstprogramm des Ultraschalls an weiblichen Ratten experimentelle Modelle für reproduktive und gynäkologische Untersuchung durchgeführt. Eine Schritt für Schritt Erklärung wie Ultraschalluntersuchungen Bewertung durchzuführen wird angezeigt.
Abstract
Mit der Entwicklung der assistierten Fortpflanzung und die ethischen Grenzen der Forschung am Menschen haben Ratten Tiermodelle in der Reproduktionsmedizin verbreitet. In der Vergangenheit stützt sich die Untersuchung der Entwicklung der Geschlechtsorgane bei Nagetieren auf einmalige histologische Untersuchung der ausgeschnittenen Gewebe. Vor kurzem, kann mit der Entwicklung von hochauflösenden transabdominalen Ultraschall, qualitativ hochwertige Sonographie jetzt durchgeführt werden, um die reproduktiven Organe von Ratten, so dass eine neue Methode zur Untersuchung der Fortpflanzungsorgane zu bewerten. Bilder wurden mit einem hochauflösenden ultrasonographische System erhalten. Gynäkologische Sonographie wurde auf 28 acht-Woche-alten nicht trächtigen Ratten und 5 schwanger Sprague-Dawley Ratten durchgeführt. Wir beschreiben, wie Organe des reproduktiven Systems zu erkennen und damit verbundenen Strukturen in typischen Ansichten in verschiedenen Phasen des Östruszyklus radeln. Farbe fließen Doppler verwendet wurde, uterine Arterie Blutfluss messen und bewerten uterine Blut fließen Muster Änderungen in verschiedenen Phasen der Schwangerschaft. Wir haben gezeigt, dass Ultraschall-Untersuchung eine nützliche Methode ist für die Bewertung von Veränderungen der inneren Geschlechtsorgane. Seine Verwendung wirft die Möglichkeit, zusätzliche Experimente, einschließlich medizinische oder chirurgische Verfahren und bietet die Möglichkeit, sonographische Veränderungen an inneren Organen zu überwachen, ohne Tiere.
Introduction
Ratte Tiermodellen haben in der Reproduktionsmedizin, unter anderem in Embryo und Eierstöcke Transplantation1,2verbreitet. Jedoch in der Vergangenheit die Untersuchung der Entwicklung der Geschlechtsorgane bei Nagetieren stützt sich auf einmalige histologische Untersuchung der ausgeschnittenen Gewebe und die Langzeitstudie des täglichen Fortpflanzungsorgane Änderungen wurde nicht in Ratten3möglich. Ultraschall ist weit verbreitet in assistierten Fortpflanzung beim Menschen seit über 30 Jahren, aber diese wertvolle Technologie wurde nur auf Ratten vor kurzem angewendet.
Unser Ziel war es eine ultrasonographische Ansatz für die Bewertung der Fortpflanzungsorgane Sprague-Dawley Ratten, experimentelle Modelle für Reproduktion und Gynäkologie Untersuchung zu entwerfen und das Verfahren zu demonstrieren, weil wir wissen, Es gibt keine aktuellen visualisierten Publikationen bezüglich dieses Verfahrens. Wir beschreiben die Vorgehensweise der ultrasonographische Untersuchung der Geschlechtsorgane der weiblichen Ratte und vorliegenden ultrasonographische Befunde auf Anatomie und uterine Arterie Durchblutung mittels hoch auflösender Ultraschall. Wir überwacht die Merkmale des Endometriums, Eierstöcke und uterine Arterie Blutfluss bei nicht-schwangeren Tieren in den verschiedenen Phasen des Östrus Zyklus, die signifikanten Unterschiede in Endometrium Dicke, Eierstöcke Morphologie und uterine Durchblutung zu bewerten verschiedenen Phasen des Östrus Zyklus, ähnlich wie bei Frauen. Wir Gebrauchtgeräte qualitativ hochwertige Ultraschall mit einer 70 MHz Frequenz und einer Auflösung von 30 µm. Unsere anderen Ziel war es, Änderungen am Widerstand des uterinen Blutflusses bei trächtigen Ratten zu bewerten. Diese Technik ermöglicht das Studium der täglichen Änderungen in den reproduktiven Organen ohne Tiere.
Es gibt mehrere technische Schwierigkeiten bei der Verwendung von Ultraschall auf Ratten. Diese Schwierigkeiten sind: die Ratte Endometrium ist viel dünner als ein menschliches weibliche4. Schwierigkeiten bei der Bildgebung die Eierstöcke von Ratten hat dickere Haut und Muskulatur der Bauchdecke bei Ratten, die nahezu vollständigen Dämpfung der Ultraschall5führte, zugeschrieben und die uterine Arterie ist viel schwieriger, in nicht-schwangeren finden Ratten. Wir haben viele technische Probleme mit dem Verfahren gelöst, und für die Probleme, die bleiben, zeigen wir, wie sie zu minimieren.
Erfolgreiche Überwachung der sonographischen Veränderungen in der reproduktiven Organe von Ratten ohne die Notwendigkeit, Tiere zu Opfern öffnet sich die Möglichkeit des Aufbaus zukünftigen Tiermodelle der Reproduktionsmedizin und andere chirurgische Eingriffe.
Protocol
Representative Results
Discussion
Aufgrund der Verfahrensänderungen und Fehlerbehebung, die erforderlich war, in dieser Studie, obwohl unser Ziel alles, was die Phasen des Östruszyklus in Ratten mittels Ultraschall, Zyklus zu identifizieren konnten wir keine signifikanten Unterschiede finden. Wir vermuten, dass diese Schwierigkeiten sein können, weil die Brunst-Zyklus nur ein paar Tage bei Ratten, im Gegensatz zu den Zyklus bei Frauen dauert. Wir sind sicher, dass alle Messungen durchgeführt wurden, genau zum richtigen Zeitpunkt Unterschiede feststel…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Forschung wurde von Tier Experimente Abschnitt der Universität Murcia und der Geburtshilfe und Gynäkologie-Abteilung von Murcia Universität unterstützt. Wir bedanken uns bei allen die Techniker arbeiten bei CEIB (experimentelle Centro de Investigaciones Biomédicas), des Abschnitts von Tierversuchen der Universität Murcia, die an diesem Projekt mitgearbeitet haben.
Materials
| Vevo3100 high-resolution in vivo micro-imaging system* | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| Vevo integrated rail system including physiological monitoring unit. | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| MX400 Transducter | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| Vevo Lab Software | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| HSD: Sprague Dawley SD | Envigo, inc. | Rat strain | |
| Lubricating Gel | General Supply | ||
| CIBERTEC CA-EAC20 Anesthesia Trolley System | Cibertec S.A | Anesthesia Machine | |
| Ecogel 100 ultrasound gel | Eco-Med Pharmaceuticals Inc. | ||
| Hair removal lotion (Nair) | General Supply | ||
| Isoflurane | Esteve Veterinaria | Inhalatory anesthesia | |
| * Required software is Vevo software including B-Mode application, pulse wave Doppler application, and vascular strain analysis tools package. |
References
- Hunter, R. K., et al. Adipose-Derived Stromal Vascular Fraction Cell Effects on a Rodent Model of Thin Endometrium. PLoS ONE. 10 (12), e0144823 (2015).
- Wang, H., Dey, S. K. Roadmap to embryo implantation: clues from mouse models. Nat Rev Genet. 7 (3), 185-199 (2006).
- Pistner, A., Belmonte, S., Coulthard, T., Blaxall, B. C. Murine Echocardiography and Ultrasound Imaging. J Vis Exp. (42), (2010).
- Lohmiller, J. J., Swing, S. P. Reproduction and Breeding. The Laboratory Rat. , 147-164 (2006).
- Jaiswal, R. S., Singh, J., Adams, G. P. High-resolution ultrasound biomicroscopy for monitoring ovarian structures in mice. Reprod Biol Endocrinol. 7 (69), (2009).
- Kim, G. H. Murine Fetal Echocardiography. J Vis Exp. (72), (2013).
- Jing, Z., Qiong, Z., Yonggang, W., Yanping, L. Rat bone marrow mesenchymal stem cells improve regeneration of thin endometrium in rat. Fertil Steril. 101 (2), 587-594 (2014).
- Mu, J., Adamson, S. L. Developmental changes in hemodynamics of uterine artery, utero- and umbilicoplacental, and vitelline circulations in mouse throughout gestation. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 291 (3), H1421-H1428 (2006).
- Anderson, C. M., Lopez, F., Zhang, H. Y., Pavlish, K., Benoit, J. N. Reduced uteroplacental perfusion alters uterine arcuate artery function in the pregnant Sprague-Dawley rat. Biol Reprod. 72 (3), 762-766 (2005).
- Hongmei, L., et al. Ultrasound Molecular Imaging of Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 Expression for Endometrial Receptivity Evaluation. Theranostics. 5 (2), 206-217 (2015).
