Ultrasonography i eksperimentell reproduktive undersøkelser på rotter
Summary
Dette manuskriptet beskriver nytten av ultralyd utføres på kvinner rotter å utvikle eksperimentelle modeller for reproduktiv og gynekologisk undersøkelse. En trinnvis forklaring på hvordan du utfører ultrasonographic evaluering vises.
Abstract
Med utviklingen av Assistert befruktning og etiske begrensningene for forskning på mennesker, har rotte dyr modeller vært mye brukt i reproduktiv medisin. Tidligere har studier av reproduksjonssystemet utvikling i Red vært basert på engangs histologiske undersøkelse av forbrukeravgift vev. Nylig, med utviklingen av høy oppløsning transabdominal ultralyd, høykvalitets sonography kan nå utføres for å evaluere de reproduktive organene rotter, slik at en ny metode for å studere reproduksjonssystemet. Bildene ble oppnådd ved å bruke en høy oppløsning ultrasonographic. Gynekologisk ultrasonography ble utført på 28 åtte uke gamle ikke-gravid rotter og 5 gravid Sprague-Dawley rotter. Beskriver vi hvordan gjenkjenne reproduksjonssystemet organer og tilhørende strukturer i typisk visninger under ulike faser av estrus syklus. Farge flyt Doppler ble brukt til å måle livmor arterien blodstrøm og evaluere livmor blood flow mønster endringer under ulike stadier av svangerskapet. Vi har vist at ultralyd undersøkelse er en nyttig metode for å vurdere endringer i interne reproduktive organer. Bruk øker muligheten for å gjennomføre flere eksperimenter, inkludert medisinsk eller kirurgisk prosedyrer, og gir deg muligheten til å overvåke sonographic endringer til indre organer uten å ofre dyr.
Introduction
Rotte dyr modeller har vært mye brukt i reproduktiv medisin, inkludert i fosteret og eggstokkene transplantasjon1,2. Men tidligere studier av reproduksjonssystemet utvikling i Red har vært basert på engangs histologiske undersøkelse av forbrukeravgift vev, og longitudinelle studier av daglige reproduktive organ endringer er ikke mulig i rotter3. Ultralyd har vært mye brukt i Assistert befruktning hos mennesker i over 30 år, men denne verdifulle teknologien er bare brukt på rotter nylig.
Målet vårt var å etablere en ultrasonographic tilnærming for å vurdere de reproduktive organene Sprague-Dawley rotter å utforme eksperimentelle modeller for reproduksjon og gynekologi etterforskning og å vise prosedyren fordi vi vet, Det finnes ingen gjeldende visualisert publikasjoner om denne prosedyren. Vi beskriver prosedyren for ultrasonographic undersøkelse av kvinnelige rottas reproduktive system og ultrasonographic resultatene på anatomi og livmor arterien blodstrøm bruker HD-ultralyd. Vi overvåket endometrium, eggstokkene og livmor arterien blodstrøm i ikke-gravide dyr på ulike stadier av estrus syklus å evaluere de betydelige forskjellene i endometrial tykkelse, ovarian morfologi og livmor blodstrømmen i ulike stadier av estrus syklusen, ligner på kvinner. Vi brukte høykvalitets ultralyd utstyr med en 70 MHz frekvens og en oppløsning på 30 µm. Målet vårt var å vurdere endringer i motstanden av livmor blodstrømmen i gravid rotter. Denne teknikken tillater for studier av daglige endringer i den reproduktive organer uten å ofre dyr.
Det er flere tekniske problemer i å utnytte ultralyd på rotter. Disse vanskelighetene inkluderer: rotte endometrium er mye tynnere enn en menneskelig kvinne4. Problemer med imaging eggstokkene rotter er blitt tilskrevet tykkere hud og bukveggen muskulaturen i rotter, som resulterte i nesten fullstendig demping av ultralyd5, og livmor arterien er mye vanskeligere å finne i ikke-gravid rotter. Vi har løst mange tekniske problemer med prosedyren, og for disse problemene som gjenstår, viser vi hvordan å minimere dem.
Vellykket overvåking av sonographic endringer i de reproduktive organene rotter uten å ofre dyr, åpnes muligheten for fremtidige dyremodeller reproduktiv medisin og andre kirurgiske prosedyrer.
Protocol
Representative Results
Discussion
Fremgangsmåter for endringer og feilsøking som var nødvendig i denne studien, til tross for vårt mål med å identifisere alle faser av estrus syklus i rotter ved hjelp av ultralyd, kunne vi ikke finne noen betydelige forskjeller. Vi hypothesize at disse vanskelighetene kan være fordi estrus syklusen varer bare et par dager i rotter, i motsetning til syklusen hos kvinner. Vi er sikker på at alle mål ble gjort på nøyaktig riktig tidspunkt å avgjøre noen forskjeller. Derfor vi omgrupperte estrus syklus faser i t…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Denne forskningen ble støttet av dyr eksperimentering delen av Murcia University og obstetrikk og gynekologi avdeling i Murcia University. Vi takker alle teknikere arbeider på CEIB (Centro eksperimentelle en Investigaciones Biomédicas), delen av dyr eksperimentering av universitetet i Murcia, som har samarbeidet på dette prosjektet.
Materials
| Vevo3100 high-resolution in vivo micro-imaging system* | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| Vevo integrated rail system including physiological monitoring unit. | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| MX400 Transducter | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| Vevo Lab Software | Visual Sonics, inc. | www.visualsonics.com/products | |
| HSD: Sprague Dawley SD | Envigo, inc. | Rat strain | |
| Lubricating Gel | General Supply | ||
| CIBERTEC CA-EAC20 Anesthesia Trolley System | Cibertec S.A | Anesthesia Machine | |
| Ecogel 100 ultrasound gel | Eco-Med Pharmaceuticals Inc. | ||
| Hair removal lotion (Nair) | General Supply | ||
| Isoflurane | Esteve Veterinaria | Inhalatory anesthesia | |
| * Required software is Vevo software including B-Mode application, pulse wave Doppler application, and vascular strain analysis tools package. |
References
- Hunter, R. K., et al. Adipose-Derived Stromal Vascular Fraction Cell Effects on a Rodent Model of Thin Endometrium. PLoS ONE. 10 (12), e0144823 (2015).
- Wang, H., Dey, S. K. Roadmap to embryo implantation: clues from mouse models. Nat Rev Genet. 7 (3), 185-199 (2006).
- Pistner, A., Belmonte, S., Coulthard, T., Blaxall, B. C. Murine Echocardiography and Ultrasound Imaging. J Vis Exp. (42), (2010).
- Lohmiller, J. J., Swing, S. P. Reproduction and Breeding. The Laboratory Rat. , 147-164 (2006).
- Jaiswal, R. S., Singh, J., Adams, G. P. High-resolution ultrasound biomicroscopy for monitoring ovarian structures in mice. Reprod Biol Endocrinol. 7 (69), (2009).
- Kim, G. H. Murine Fetal Echocardiography. J Vis Exp. (72), (2013).
- Jing, Z., Qiong, Z., Yonggang, W., Yanping, L. Rat bone marrow mesenchymal stem cells improve regeneration of thin endometrium in rat. Fertil Steril. 101 (2), 587-594 (2014).
- Mu, J., Adamson, S. L. Developmental changes in hemodynamics of uterine artery, utero- and umbilicoplacental, and vitelline circulations in mouse throughout gestation. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 291 (3), H1421-H1428 (2006).
- Anderson, C. M., Lopez, F., Zhang, H. Y., Pavlish, K., Benoit, J. N. Reduced uteroplacental perfusion alters uterine arcuate artery function in the pregnant Sprague-Dawley rat. Biol Reprod. 72 (3), 762-766 (2005).
- Hongmei, L., et al. Ultrasound Molecular Imaging of Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 Expression for Endometrial Receptivity Evaluation. Theranostics. 5 (2), 206-217 (2015).
