في فيفو التصوير المتعدد الوسائط، وتحليل للماوس المستحثة بالليزر طراز نيوفاسكولاريزيشن تشورويدال
Summary
نقدم هنا، فائدة التصوير الطولي في فيفو في متابعة التغييرات الشكلية من neovascularization تشورويدال المستحثة بالليزر في الفئران.
Abstract
Neovascularization تشورويدال المستحثة بالليزر (المسيحي) نموذج راسخة لتقليد النموذج الرطب لكبر السن البقعي (AMD). في هذا البروتوكول، ونحن نهدف إلى توجيه القارئ ليس ببساطة من خلال الاعتبارات التقنية لتوليد آفات المستحثة بالليزر لتحريك عمليات نيوفاسكولار، ولكن بدلاً من التركيز على المعلومات القوية التي يمكن الحصول عليها من الطولية النقل المتعدد الوسائط المجراة في التصوير طوال فترة المتابعة.
الماوس المستحثة بالليزر النموذجي الذي تم إنشاؤها بواسطة إقامة ليزر صمام ثنائي. واستخدمت تقنيات التصوير المتعدد الوسائط في فيفو لرصد التعريفي المسيحي والتقدم والتراجع. أولاً، أنجز التصوير المقطعي التماسك الضوئية المجال الطيفي (SD–أكتوبر) فورا بعد اللايزر للتحقق من فاصل غشاء بروخ في. وأكد اللاحقة في فيفو التصوير باستخدام الأوعية فلوريسسين (اتحاد كرة القدم) الضرر ناجحة من غشاء بروخ لمن صور المسلسل المكتسبة على مستوى تشورويدال. متابعة طولية من الانتشار المسيحي والانحدار في أيام 5 و 10 و 14 بعد اللايزر أجرى باستخدام كل من التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر واتحاد كرة القدم. ويرد بسيطة وموثوق بها الدرجات من راشح المسيحي ليسيونس من الصور اتحاد كرة القدم. التجزئة التلقائية لقياس مجموع سمك الشبكية، جنبا إلى جنب مع تطبيق عيار يدوي لقياس سماكة الشبكية في مواقع متعددة، والسماح بتقييم غير متحيز لوجود وذمة. وأخيراً، النسيجي التحقق من الذي تتم باستخدام تلطيخ إيسوليكتين GS-IB4 على فلاتمونتس تشورويدال. تلطيخ ثريشولديد، ومنطقة إيسوليكتين-إيجابيا يحسب مع إيماجيج.
هذا البروتوكول مفيدة بشكل خاص في دراسات المداواة التي تتطلب عالية-الإنتاجية-مثل الفحص الباثولوجي المسيحي أنها تتيح سرعة، متعدد الوسائط، وتصنيف موثوق بها ذمة الشبكية وأمراض متعددة. وبالإضافة إلى ذلك، تمكن عالية الدقة التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر تسجيل بصمات المرضية الأخرى، مثل تراكم السوائل سوبريتينال أو إينتراريتينال. ومع ذلك، هذا الأسلوب لا يوفر إمكانية أتمتة تحليل حجم المسيحي من صور التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر، الذي يجب أن تتم يدوياً.
Introduction
أول محاولة ناجحة لتقليد علم الأمراض البشرية المسيحي في القوارض اتضح منذ ثلاثة عقود تقريبا مع ليزر كريبتون في لونغ-إيفانز الفئران1. وبعد ذلك، استخدمت ليزر كريبتون لكسر غشاء بروخ لسلالة الماوس الأكثر شعبية، C57BL/6J2،،من34. تم التحقق من معدل نجاح الاستقراء متعددة مع اتحاد كرة القدم والبقع النسيجي. تطور سريع لأساليب التصوير موسع، مثل OCT، عزز نمو مجال القوارض نماذج الإكلينيكية. القدرة على رصد التغييرات الشكلية في الشبكية في نقاط زمنية متعددة في العين نفسها إلى حد كبير يسهم في الحد استخدام الحيوانات، وزيادة الكفاءة في الدراسات التجريبية. التقييم النسيجي لآفات متعددة بدلاً من ذلك واضحة، ويتطلب وضع العلامات لنمو الأوعية الدموية غير طبيعي حول الموقع الإدارة الليزر، والحصول على الصور، وتقدير مساحة/وحدة التخزين باستخدام برنامج تحليل صورة. وفي المقابل، يعرض في فيفو طرائق التصوير تحاليل أكثر تعقيداً من أمراض متعددة وتفسيرها.
هنا نقدم طريقة بسيطة وسريعة نسبيا للصف التعريفي، والتدرج، والانحدار الذي استخدام FA، SD–أكتوبر، والأسلوب الآلي تجزئة في الماوس الليزر المستحثة المسيحي النموذجي.
Protocol
Representative Results
Discussion
ويقدم التصوير المتعدد الوسائط أدوات قيمة لتقييم أمراض متعددة. وقد عرضنا هنا بروتوكولا تصوير تتألف من اتحاد كرة القدم، التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر، وتجزئة التلقائي للتقييم السريع واستنساخه، وموثوق بها من أمراض متعددة. فاصل غشاء بروخ في بعد أن أكدت الإدارة الليزر. وباﻹضافة إلى ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
المؤلف يود أن يشكر يوليا ناومتشوك (جامعة لويولا شيكاغو) وأجني Žiniauskaitė (اكسبيريمينتيكا المحدودة) للدعم التقني و videographic ممتازة. برنامج أبحاث الدكتور Kaja معتمد من قبل الدكتور جون ص وتيريز هاء مولكاهي وهبت الأستاذية في طب العيون في “جامعة لويولا شيكاغو”.
Materials
| Medetomidine (commercial name Domitor) | Orion | Vnr 01 56 02 | Anesthesia |
| Ketamine | Intervet | Vnr 51 14 85 | Anesthesia |
| 0,9% NaCl | B Braun | 357 0340 | Anesthesia |
| Xylazine (commercial name Rompun vet) | Bayer | vnr 14 89 99 | Anesthesia |
| Tropicamide | Santen | Vnr 04 12 36 | Mydriatic agent |
| Viscotears | Alcon | Vnr 44 54 81 | Lubricant |
| Systane | Alcon | - | Lubricant |
| 5% Fluorescein sodium salt | Sigma Aldrich | F6377-100G | Fluoresent agent |
| Atipamezole (commercial name Antisedane) | Orion | Vnr 47 19 53 | Anesthesia |
References
- Dobi, E. T., Puliafito, C. A., Destro, M. A new model of experimental choroidal neovascularization in the rat. Arch. Ophthalmol. Chic. Ill 1960. 107, 264-269 (1989).
- Tobe, T., et al. Evolution of neovascularization in mice with overexpression of vascular endothelial growth factor in photoreceptors. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 180-188 (1998).
- Seo, M. S., et al. Dramatic inhibition of retinal and choroidal neovascularization by oral administration of a kinase inhibitor. Am. J. Pathol. 154, 1743-1753 (1999).
- Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. Animal models of choroidal and retinal neovascularization. Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).
- Shah, R. S., Soetikno, B. T., Lajko, M., Fawzi, A. A. A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization. J Vis Exp. (106), e53502 (2015).
- Giani, A., et al. In vivo evaluation of laser-induced choroidal neovascularization using spectral-domain optical coherence tomography. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3880-3887 (2011).
- Gong, Y., et al. Optimization of an Image-Guided Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model in Mice. PloS One. 10, e0132643 (2015).
- Sheets, K. G., et al. Neuroprotectin D1 attenuates laser-induced choroidal neovascularization in mouse. Mol. Vis. 16, 320-329 (2010).
- Hoerster, R., et al. In-vivo and ex-vivo characterization of laser-induced choroidal neovascularization variability in mice. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 250, 1579-1586 (2012).
- Sulaiman, R. S., et al. A Simple Optical Coherence Tomography Quantification Method for Choroidal Neovascularization. J. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. 31, 447-454 (2015).
