В естественных условиях Смешанных изображений и анализ мыши лазерно индуцированным хориоидеи неоваскуляризация модели
Summary
Здесь мы представляем полезность продольных в vivo изображений в прослеживании морфологические изменения лазерно индуцированным хориоидеи неоваскуляризация мышей.
Abstract
Лазерно индуцированным хориоидеи неоваскуляризации (CNV) является устоявшейся модель для имитации влажных форме возрастной макулярной дегенерации (AMD). В этом протоколе мы стремимся руководствоваться читателя не просто через технические соображения генерации лазерно индуцированным поражения вызвать неоваскулярной процессы, но скорее сосредоточиться на мощный информацию, которая может быть получена из смешанных продольной в естественных условиях изображений на протяжении всего последующего периода.
Лазерно индуцированным мыши CNV модель была порождена администрации лазерный диод. Методы визуализации смешанных в естественных условиях были использованы для мониторинга CNV индукции, прогрессирование и регрессии. Во-первых, спектральной области оптическая когерентная томография (SD-Окт) была выполнена сразу после лазерная проверка разрыв мембраны Бруха. Последующие в vivo изображений с помощью fluorescein ангиография (ФА) подтвердил успешные повреждение мембраны Бруха от последовательного изображения, полученные на уровне хориоидеи. Продольные последующей CNV распространения и регрессии на 5, 10 и 14 дни после лазерная выполнялось с помощью SD-OCT и Англии. Простой и надежный классификации Дырявый ЦНВ leasions из Англии изображения представлены. Автоматизированный сегментации для измерения толщины всего сетчатки, в сочетании с применением ручной калибр для измерения толщины сетчатки в ЦНВ сайтов, позволяют беспристрастной оценки наличия отеков. Наконец Гистологическая верификация CNV осуществляется с помощью isolectin GS-IB4 окрашивания на хориоидеи flatmounts. Окрашивание показатели, и isolectin позитивных площадь вычисляется с ImageJ.
Этот протокол является особенно полезным в терапии исследований, требующих высокой пропускной способности, как скрининг CNV патологии, как он позволяет быстро, смешанных и надежной классификации CNV патологии и сетчатки отек. Кроме того высоким разрешением SD-OCT позволяет запись других патологических признаков, как накопление субретинальное или Интраретинальные жидкости. Однако этот метод не предоставляет возможность автоматизировать анализ объема CNV от SD-Окт изображения, которая должна быть выполнена вручную.
Introduction
Первая успешная попытка имитировать патологии человека CNV грызунов было продемонстрировано почти три десятилетия назад с криптона лазерных в Лонг-Эванс крысы1. После этого криптона лазерных был использован сломать мембраны Бруха в самых популярных мыши напрягаться, C57BL/6J2,3,4. Показатель успеха CNV индукции было проверено с FA и гистологической пятна. Быстрое развитие методов неинвазивной визуализации, например OCT, способствовали росту поля грызунов доклинических моделей. Возможность контролировать морфологические изменения в сетчатке глаза в нескольких точках время тот же глаз значительно способствует сокращению использования животных и увеличивает эффективность в ходе экспериментальных исследований. Гистологическая Оценка CNV поражения довольно прост и требует маркировки ненормальныйа рост сосудов вокруг сайт лазерной администрации, загрузки изображений и площадь/объем оценки с использованием программного обеспечения для анализа изображений. Напротив в естественных условиях визуализации формы внедрить более сложные анализы CNV патологии и его толкования.
Здесь мы представляем простой и относительно быстрый способ индукции класс, прогрессии и регрессии CNV с помощью Англии, SD-Октябрь, и метод автоматической сегментации в мыши лазерно индуцированным CNV модель.
Protocol
Representative Results
Discussion
Смешанных изображений предлагает ценные инструменты для оценки CNV патологии. Здесь мы представили изображений протокол, состоящий из Англии, SD-OCT и автоматической сегментации для быстрого, воспроизводимые и надежной оценки CNV патологии. Разрыв мембраны Бруха после лазерной администра?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы поблагодарить Юлия Наумчук (Университет Лойолы) и Агне Žiniauskaitė (Experimentica ООО) за отличную техническую и видеографическая поддержку. Программа исследований доктор Kaja поддерживается Dr. John P. и Тереза E. Малкахи наделены профессуру в офтальмологии в университете Лойолы.
Materials
| Medetomidine (commercial name Domitor) | Orion | Vnr 01 56 02 | Anesthesia |
| Ketamine | Intervet | Vnr 51 14 85 | Anesthesia |
| 0,9% NaCl | B Braun | 357 0340 | Anesthesia |
| Xylazine (commercial name Rompun vet) | Bayer | vnr 14 89 99 | Anesthesia |
| Tropicamide | Santen | Vnr 04 12 36 | Mydriatic agent |
| Viscotears | Alcon | Vnr 44 54 81 | Lubricant |
| Systane | Alcon | - | Lubricant |
| 5% Fluorescein sodium salt | Sigma Aldrich | F6377-100G | Fluoresent agent |
| Atipamezole (commercial name Antisedane) | Orion | Vnr 47 19 53 | Anesthesia |
References
- Dobi, E. T., Puliafito, C. A., Destro, M. A new model of experimental choroidal neovascularization in the rat. Arch. Ophthalmol. Chic. Ill 1960. 107, 264-269 (1989).
- Tobe, T., et al. Evolution of neovascularization in mice with overexpression of vascular endothelial growth factor in photoreceptors. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 180-188 (1998).
- Seo, M. S., et al. Dramatic inhibition of retinal and choroidal neovascularization by oral administration of a kinase inhibitor. Am. J. Pathol. 154, 1743-1753 (1999).
- Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. Animal models of choroidal and retinal neovascularization. Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).
- Shah, R. S., Soetikno, B. T., Lajko, M., Fawzi, A. A. A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization. J Vis Exp. (106), e53502 (2015).
- Giani, A., et al. In vivo evaluation of laser-induced choroidal neovascularization using spectral-domain optical coherence tomography. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3880-3887 (2011).
- Gong, Y., et al. Optimization of an Image-Guided Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model in Mice. PloS One. 10, e0132643 (2015).
- Sheets, K. G., et al. Neuroprotectin D1 attenuates laser-induced choroidal neovascularization in mouse. Mol. Vis. 16, 320-329 (2010).
- Hoerster, R., et al. In-vivo and ex-vivo characterization of laser-induced choroidal neovascularization variability in mice. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 250, 1579-1586 (2012).
- Sulaiman, R. S., et al. A Simple Optical Coherence Tomography Quantification Method for Choroidal Neovascularization. J. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. 31, 447-454 (2015).
