Vivo में Multimodal इमेजिंग और माउस लेजर प्रेरित धमनियां Neovascularization मॉडल का विश्लेषण
Summary
यहाँ, हम चूहों में लेजर प्रेरित धमनियां neovascularization के रूपात्मक परिवर्तन के अनुवर्ती में vivo इमेजिंग में अनुदैर्ध्य की उपयोगिता प्रस्तुत करते हैं ।
Abstract
लेजर प्रेरित धमनियां neovascularization (CNV) उंर से संबंधित धब्बेदार अध (AMD) के गीले फार्म की नकल करने के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित मॉडल है । इस प्रोटोकॉल में, हम neovascular प्रक्रियाओं को ट्रिगर करने के लिए लेजर प्रेरित घावों पैदा करने के तकनीकी विचार के माध्यम से नहीं बस पाठक गाइड करने के लिए लक्ष्य है, बल्कि multimodal अनुदैर्ध्य से प्राप्त किया जा सकता है कि शक्तिशाली जानकारी पर ध्यान केंद्रित है कि अनुवर्ती अवधि के दौरान vivo इमेजिंग में ।
लेजर प्रेरित माउस CNV मॉडल एक डायोड लेजर प्रशासन द्वारा उत्पंन किया गया था । vivo इमेजिंग तकनीक में Multimodal CNV प्रेरण, प्रगति और प्रतिगमन पर नजर रखने के लिए इस्तेमाल किया गया । सबसे पहले, वर्णक्रमीय डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (एसडी-OCT) तुरंत लेजरिंग के बाद Bruch की झिल्ली के एक तोड़ सत्यापित करने के लिए किया गया था । fluorescein एंजियोग्राफी (एफए) का उपयोग कर vivo इमेजिंग में बाद में धमनियां स्तर पर अधिग्रहीत धारावाहिक छवियों से Bruch की झिल्ली की सफल क्षति की पुष्टि की । अनुदैर्ध्य अनुवर्ती CNV प्रसार और प्रतिगमन के 5 दिनों, 10, और 14 के बाद लेजरिंग दोनों एसडी-अक्टूबर और एफए का उपयोग कर प्रदर्शन किया गया था । एफए छवियों से टपका हुआ CNV पट्टे की सरल और विश्वसनीय ग्रेडिंग प्रस्तुत की है । कुल रेटिना मोटाई के माप के लिए स्वचालित विभाजन, CNV साइटों पर रेटिना मोटाई की माप के लिए मैनुअल कैलिबर आवेदन के साथ संयुक्त, शोफ की उपस्थिति के निष्पक्ष मूल्यांकन की अनुमति. अंत में, CNV के ऊतकीय सत्यापन isolectin जीएस-IB4 धमनियां flatmounts पर दाग का उपयोग किया जाता है । धुंधलान थ्रेशोल्ड है, और isolectin-धनात्मक क्षेत्र ImageJ के साथ परिकलित की जाती है ।
यह प्रोटोकॉल विशेष रूप से CNV विकृति विज्ञान के उच्च प्रवाह की तरह स्क्रीनिंग की आवश्यकता के लिए चिकित्सकीय अध्ययन में उपयोगी है, के रूप में यह तेजी से, multimodal, और CNV विकृति और रेटिना शोफ के विश्वसनीय वर्गीकरण की अनुमति देता है । इसके अलावा, उच्च संकल्प एसडी OCT, इस तरह के उपरेटिना या intraretinal द्रव के संचय के रूप में अन्य रोग की पहचान की रिकॉर्डिंग में सक्षम बनाता है । हालांकि, इस विधि के लिए एक संभावना प्रदान नहीं करता है CNV मात्रा विश्लेषण को स्वचालित से एसडी-OCT छवियां, जो मैंयुअल रूप से किया जा करने के लिए है ।
Introduction
पहली सफल करने के लिए कुतर में मानव CNV की विकृति की नकल करने का प्रयास लगभग तीन दशक पहले लंबे समय से इवांस चूहों1में एक क्रीप्टोण लेजर के साथ प्रदर्शन किया गया था । इसके बाद, एक क्रीप्टोण लेजर सबसे लोकप्रिय माउस तनाव, C57BL/6J2,3,4में Bruch की झिल्ली को तोड़ने के लिए इस्तेमाल किया गया था । CNV प्रेरण की सफलता की दर एफए और ऊतकीय दाग के साथ सत्यापित किया गया था । ऐसी OCT के रूप में इनवेसिव इमेजिंग विधियों, के एक तेजी से विकास, कुतर नैदानिक मॉडल के क्षेत्र के विकास को बढ़ावा । एक ही आंख में कई समय बिंदुओं पर रेटिना में रूपात्मक परिवर्तन की निगरानी करने की क्षमता काफी पशु उपयोग की कमी के लिए योगदान देता है, और प्रयोगात्मक अध्ययन में दक्षता बढ़ जाती है. CNV घावों के ऊतकीय मूल्यांकन बल्कि सीधा है, और लेजर प्रशासन, छवि अधिग्रहण की साइट के आसपास असामान्य संवहनी विकास के लेबल की आवश्यकता है, और एक छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग कर क्षेत्र/ इसके विपरीत, vivo में इमेजिंग मोडलों CNV विकृति और इसकी व्याख्या के और अधिक जटिल विश्लेषण परिचय ।
यहां हम ग्रेड प्रेरण, प्रगति के लिए एक सरल और अपेक्षाकृत तेजी से विधि वर्तमान, और CNV के प्रतिगमन एफए का उपयोग कर, एसडी अक्टूबर, और माउस लेजर प्रेरित CNV मॉडल में स्वचालित विभाजन विधि ।
Protocol
Representative Results
Discussion
Multimodal इमेजिंग CNV पैथोलॉजी मूल्यांकन के लिए मूल्यवान उपकरण प्रदान करता है । यहां हम एक इमेजिंग एफए, एसडी-अक्टूबर से मिलकर प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया, और त्वरित, प्रतिलिपि, और CNV विकृति के विश्वसनीय मूल्यांकन ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक उत्कृष्ट तकनीकी और Experimentica समर्थन के लिए Yuliya Naumchuk (लोयोला विश्वविद्यालय शिकागो) और अगने žiniauskaitė (videographic लिमिटेड) का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । डॉ कजा के अनुसंधान कार्यक्रम लोयोला विश्वविद्यालय शिकागो में नेत्र विज्ञान में डॉ जॉन पी और Therese ई. Mulcahy संपंन प्रोफेसर द्वारा समर्थित है ।
Materials
| Medetomidine (commercial name Domitor) | Orion | Vnr 01 56 02 | Anesthesia |
| Ketamine | Intervet | Vnr 51 14 85 | Anesthesia |
| 0,9% NaCl | B Braun | 357 0340 | Anesthesia |
| Xylazine (commercial name Rompun vet) | Bayer | vnr 14 89 99 | Anesthesia |
| Tropicamide | Santen | Vnr 04 12 36 | Mydriatic agent |
| Viscotears | Alcon | Vnr 44 54 81 | Lubricant |
| Systane | Alcon | - | Lubricant |
| 5% Fluorescein sodium salt | Sigma Aldrich | F6377-100G | Fluoresent agent |
| Atipamezole (commercial name Antisedane) | Orion | Vnr 47 19 53 | Anesthesia |
References
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