Caenorhabditis एलिगेंस के विकास और प्रजनन पर रसायनों के प्रभाव को मापने
Summary
एक बुनियादी प्रोटोकॉल एक मॉडल पशु में रसायनों की विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए, Caenorhabditis एलिगेंस, वर्णन किया गया है । विधि सुविधाजनक और फार्मास्यूटिकल्स के विकास के लिए उपयोगी के रूप में अच्छी तरह के रूप में विभिंन पर्यावरणीय प्रदूषकों के जोखिम के आकलन के लिए है ।
Abstract
विषाक्तता मूल्यांकन बुनियादी और एप्लाइड जैविक विज्ञान के क्षेत्रों में रहने वाले जीवों पर रसायनों के प्रभाव को समझने के लिए महत्वपूर्ण है । एक गैर स्तनधारी मिट्टी दौर कीड़ा, Caenorhabditis एलिगेंस, अपनी सुविधा और पशु नैतिकता के मुद्दों की कमी के कारण स्तनधारी पशु प्रणालियों के साथ तुलना में विषविज्ञान अध्ययन के लिए एक मूल्यवान मॉडल जीव है । इस प्रोटोकॉल में, C. एलिगेंस में रसायनों के विषाक्तता मूल्यांकन की एक विस्तृत प्रक्रिया बताई गई है । एक नैदानिक विरोधी दवा, etoposide, जो मानव तोपोइसोमेरसे द्वितीय लक्ष्य और मानव कैंसर कोशिकाओं के डीएनए प्रतिकृति रोकता है, एक मॉडल परीक्षण रासायनिक के रूप में चुना गया था. उंर-सिंक्रनाइज़ सी. एलिगेंस अंडे या तो dimethyl sulfoxide (DMSO) या etoposide, और फिर सी. एलिगेंस के विकास के लिए उजागर किया गया 4 दिनों के लिए हर दिन स्टीरियो माइक्रोस्कोप अवलोकन द्वारा निगरानी की गई । DMSO या etoposide के साथ इलाज करने वाले सी. एलिगेंस से रखी गई अंडों की कुल संख्या भी स्टीरियो माइक्रोस्कोप के इस्तेमाल से गिनी जाती थी. Etoposide उपचार के विकास और सी. एलिगेंसके प्रजनन को काफी प्रभावित करते हैं । रसायनों के विभिन्न उपचार के समय के साथ कीड़े से रखी अंडे की कुल संख्या की तुलना करके, यह तय किया जा सकता है कि C. एलिगेंस प्रजनन पर रसायनों के प्रजनन विषाक्तता प्रतिवर्ती या अपरिवर्तनीय है । इन प्रोटोकॉल विभिंन दवाओं और पर्यावरण विषालु के जोखिम के आकलन के विकास दोनों के लिए उपयोगी हो सकता है ।
Introduction
विषाक्तता मूल्यांकन फार्मास्यूटिकल्स, न्यूट्रास्यूटिकल्स, और cosmeceuticals के विकास के लिए आवश्यक है, साथ ही विभिंन पर्यावरणीय विषाक्त पदार्थों का जोखिम मूल्यांकन । इस विषविज्ञान अध्ययन के लिए vivo प्रयोगात्मक प्रणालियों में सबसे लोकप्रिय कुतर मॉडल में से एक है; वैकल्पिक रूप से, गैर स्तनधारी जीवों जैसे सी. एलिगेंस भी व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है । गैर स्तनधारी विषाक्तता मूल्यांकन मॉडल क्योंकि न केवल पशु नैतिक मुद्दों पर भी अपनी सुविधा और उपयोगिता लागत प्रभावशीलता, बनाए रखने, गति, और reproducibility1,2 पर विचार के लिए लाभकारी हैं ,3,4.
सी. एलिगेंस, एक मिट्टी दौर कीड़ा, विभिंन बुनियादी और एप्लाइड बायोलॉजी और रसायन विज्ञान अनुसंधान में एक मॉडल पशु के रूप में शोषण किया गया है । यह एक 1 मिमी लंबे, पारदर्शी निमेटोड है, जो सिर्फ ठोस या तरल निमेटोड विकास मीडिया (NGM) बैक्टीरियल तनाव ई कोलाई OP50 के साथ खिलाया में बनाए रखा है । c. एलिगेंस एक लघु जीवन चक्र है, और जंगली प्रकार N2 सी एलिगेंस लगभग ३०० अंडे देता है । इसलिए, यह आसानी से प्रायोगिक सामग्री3,4,5के रूप में इस्तेमाल किया जा प्रचारित है । सी. एलिगेंस भी व्यापक रूप से कई दवाओं और पर्यावरण प्रदूषण के विषाक्तता अध्ययन में किया गया है6,7,8,9।
क्योंकि कई विरोधी दवाओं तेजी से कैंसर कोशिकाओं को विभाजित लक्ष्य, वे भी तेजी से इस तरह के अस्थि मज्जा, आंत्र उपकला, और बाल कूप कोशिकाओं के रूप में सामान्य कोशिकाओं को विभाजित नुकसान कर सकते हैं । उदाहरण के लिए, तोपोइसोमेरसे निरोधात्मक विरोधी दवाओं कैंसर कोशिकाओं के डीएनए प्रतिकृति प्रक्रिया को लक्षित; इसलिए, वे भी तेजी से बाधित सामांय कोशिकाओं को विभाजित । हर जीवित जीव topoisomerases है, और इन तोपोइसोमेरसे अवरोधकों सबसे अधिक संभावना प्रभाव पर्यावरण पारिस्थितिकी प्रणालियों6,10,11। इस प्रकार, एक दवा विषाक्तता मूल्यांकन एक मॉडल पशु का उपयोग कर मंच फार्मास्यूटिकल्स और पर्यावरण जोखिम मूल्यांकन के दोनों के विकास के लिए मूल्यवान है ।
इस अनुच्छेद में, हम विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए etoposide की विषाक्तता का परीक्षण, जो एक नैदानिक विरोधी एजेंट है कि लक्ष्य तोपोइसोमेरसे द्वितीय, एक मॉडल के रूप में सी. एलिगेंसमें विषाक्त रासायनिक । इस प्रयोजन के लिए, हम शरीर के आकार की माप विधि और etoposide के साथ इलाज किया ग. एलिगेंस में रखी अंडे की कुल संख्या का वर्णन करेंगे ।
Protocol
नोट: संपूर्ण प्रयोग एक साफ़ पृथक प्रयोगशाला में किया जाना चाहिए जिसमें 20 & #176; C कम धूल के साथ और कीड़ा और बैक्टीरियल हैंडलिंग के दौरान संदूषण के ंयूनतम के साथ । इस प्रयोजन के लिए, प्रयोगों एक शराब दीपक की …
Representative Results
Discussion
इस अनुच्छेद में, हम सी. एलिगेंस, एक मिट्टी निमेटोड में रसायनों के विषाक्तता मूल्यांकन का वर्णन, एक विषैले उदाहरण के रूप में etoposide का उपयोग कर । इस प्रयोजन के लिए, हम दो प्रयोगात्मक शर्तों का इस्तेमाल कि?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस अध्ययन में कोरिया इंस्टीट्यूट ऑफ साइंस एण्ड टेक्नोलॉजी अंदर रिसर्च ग्रांट (2E27513) तथा कृषि, खाद्य एवं ग्रामीण कार्य मंत्रालय (315067-03) द्वारा वित्तपोषित उच्च मूल्य वर्धित खाद्य प्रौद्योगिकी विकास कार्यक्रम (IPET) का समर्थन किया गया ।
Materials
| Agar | Affymetrix, USA | 10906 | |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Cholesterol | Sigma, USA | C3045 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma, USA | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Etoposide | Sigma, USA | E1383 | |
| Image J software (ver 1.4) | Natinoal Institute of Health, USA | https://imagej.nih.gov/ij/ | |
| Microscope camera | Jenopitk, Progress Gryphax, Germany | ||
| Peptone | Merck, USA | 107213 | |
| 35 × 10 mm Petri dish | SPL Life Sciences, South Korea | 10035 | |
| 90 × 15 mm Petri dish | SPL Life Sciences, South Korea | 10090 | |
| Stereo microscope | Nikon, Japan | SMZ800N | |
| Yeast extract | Becton Dickinson, USA | 212750 |
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