Procédures d’ovaire Transplantation orthotopique pour étudier l’Influence de la durée de vie et de santé de la sénescence ovarienne chez les souris femelles
Summary
Orthotopique de protocoles ovaire transplantation pour modifier ovarien influence sur la physiologie de la souris bénéficiaire, sont décrites ici. Cette intervention chirurgicale est utilisée pour exposer des souris femelles à divers types d’influence ovarienne et peut-être inclure hétérochronique transplantations d’organes et la transplantation des ovaires qui ont fait l’objet de divers traitements ex vivo .
Abstract
Transplantation d’ovaire a tout d’abord procédée à Utah State University en 1963. Dans des travaux plus récents, hétérochronique transplantation d’ovaires chez les mammifères est utilisée pour étudier les effets de la protection de la santé des jeunes ovaires chez les femmes jeunes. Les procédures actuelles d’emploient une méthode de transplantation orthotopique, où les ovaires allogènes sont transplantés à leur position d’origine dans la bourse ovarienne. Cette méthode diffère la plus couramment utilisée transplantation transplantation de tissu ovarien/ovaires par voie sous-cutanée ou sous la capsule rénale. Tous les trois endroits fournissent une revascularisation efficace des tissus transplantés. Toutefois, une transplantation orthotopique fournit l’ovaire avec l’environnement de signalisation plus naturel et est la seule procédure qui prévoit la possibilité pour l’animal à se reproduire naturellement après l’opération. On doit veiller à enlever tous les tissus ovariens endogène au cours de la procédure de l’ovariectomie. Si n’importe quel tissu endogène reste ou si seulement un seul ovaire est enlevé, le tissu greffé restera inactif jusqu’à ce que le tissu existant devient sénescent. Alors que la revascularisation des ovaires transplantés se produit très rapidement, le bénéficiaire de la greffe peut prendre énormément de temps pour s’adapter au nouvel axe hypothalamus/hypophyse/gonadiques/surrénales (HPG/A) signalisation régime associé à la transplantation tissus. Cela prend normalement environ 100 jours chez la souris. Par conséquent, des expériences de transplantation devraient être conçus pour accueillir cette période d’adaptation. Résultats typiques avec ovaire transplantation comprendra les modifications apportées à la santé du receveur qui reflètent l’âge de l’ovaire transplanté, plutôt que l’âge chronologique du destinataire.
Introduction
L’influence de reproduction sur la santé et de la durée de vie est souvent à tort pensé aussi restreint qu’à la période entourant la compétence reproduction. Tandis que le mode de vie et les phénotypes associés à la phase sexuellement compétente de la durée de vie sont facilement différenciés des phases préalables- et reproduction, statut reproductif influence santé pendant toutes les phases de la durée de vie. La période de reproduction compétence est souvent dénommée la durée de vie reproductive, se différencie de la durée de vie chronologique. Cette terminologie se prête à une séparation artificielle des deux désignations de durée de vie alors qu’en réalité, les deux sont étroitement liés entre eux avec des événements ayant une incidence sur celui, plus souvent qu’autrement, touchant aussi bien l’autre.
Preuves ces dix dernières années indiquent que le statut reproductif de l’individu est associée à un risque accru de développer des conditions de santé chroniques1. Une étude documentée une association entre les durées de vie plus courtes et échec de la reproduction pour une cohorte d’hommes2. L’association est encore plus frappante chez les femmes. Maladies cardiovasculaires sont rare chez les femmes préménopausées3, mais l’insuffisance ovarienne augmente les maladies cardiovasculaires nettement à la ménopause4 et chez les jeunes femmes avec une insuffisance ovarienne prématurée5. L’insuline résistance6 et la perte osseuse augmentent à la ménopause7 et presque deux-tiers des américains avec la maladie d’Alzheimer sont des femmes,8. Des changements bien définis dans les ovaires de signalisation marquent la transition d’un état de préménopause, résistant aux maladies, à un état après la ménopause, accablés de maladie. Cette transition stable, offre une occasion d’identifier les mécanismes qui permettent d’accélérer les risques de maladie au cours du vieillissement.
Récemment, la transplantation de tissu ovarien cryopréservé a été utilisée pour restaurer la fertilité des femmes qui subissent des procédures médicales qui peuvent mettre en danger les cellules germinales, tels que la chimiothérapie. Transplantation de tissu ovarien peut également être utilisée pour produire une descendance viable chez les animaux non-ovarien infertilité basés, y compris des souris transgéniques9. Transplantation d’ovaire est une méthode efficace pour séparer l’influence de la fonction de reproduction ou reproduction vieillissement du vieillissement chronologique en soi.
Le rôle de soutien bien établi pour les hormones ovariennes dans de nombreux aspects de la santé féminine implique la perte de production d’hormones du cyclisme activement les cellules germinales, comme la principale cause des risques accrus de maladie à la ménopause. Alors que la valeur des hormones ovariennes dans santé féminine est incontestable, remplaçant ces hormones en péri – et les femmes ménopausées a été peu fiable dans la restauration des avantages dont bénéficie les jeunes femmes avec jeunes ovaires. Ces bienfaits sont fiable restaurés par transplantation hétérochronique de jeunes ovaires de souris femelles reproduction10,11,12,13,14.
Statut reproductif des souris donneur et du receveur doit être déterminée avant et après la transplantation ou procédures de l’ovariectomie. Souris de reproduction présomptives qui affichent des signes de gonades d’entrée avant l’intervention chirurgicale à l’âge de 12 mois sont exclus de ces expériences. Gonadique est déterminée par la cytologie vaginale. Données sur la cytologie vaginale sont prélevées avant l’intervention afin d’assurer un état de reproduction chez les souris destinataires et activement-recyclage des ovaires chez les souris de donateurs au moins 10 jours consécutifs. Un cycle oestral est défini comme la période de la journée nucléées cellules épithéliales apparaissent d’abord (c.-à-d., pro-oestrus) à la veille de la prochaine comparution de cellules épithéliales nucléées dans le frottis vaginal, s’il y a une période de leucocytaire présence (c.-à-d., dioestrus) entre les deux. Oestrus est déterminée par la présence de cellules épithéliales grands, squameuses, avec ou sans noyaux. Souris qui n’affichent aucune activité cyclique pour une période de 10 jours avant ou après la chirurgie sont déterminés à n’avoir aucune entrée gonadique pour ladite période. Souris qui affichent au moins un cycle oestral complet dans un délai de 10 jours avant ou après la chirurgie sont déterminés d’avoir entrée gonadique pour ladite période. Des souris femelles doivent être logés en présence de souris mâles ou exposés à la litière souillée de la cage du mâle pour assurer une exposition uniforme aux stimulations inductrices de cycle.
Ces procédures de transplantation sont mieux réalisées avec deux chirurgiens travaillant simultanément sur les donateurs et les bénéficiaires souris. Toutefois, les procédures sont facilement réalisées par un chirurgien, avec les ovaires de donateurs plus souvent récupérés avant de commencer la procédure de l’ovariectomie sur la souris destinataire. Ce protocole décrit la procédure pour le seul chirurgien. Exposition de l’appareil reproducteur et la fermeture du site se faites normalement sans microscope, tandis que l’enlèvement et le remplacement des ovaires se fait sous un microscope. Comme avec l’apprentissage de toute intervention chirurgicale, les sites d’incision peuvent être plus grands et chirurgies peuvent prendre plus de temps tout en premier apprentissage de la procédure et sera généralement diminuer avec l’expérience.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ovariectomie et transplantation des ovaires intacts et appauvri en cellules germinales ont été menées chez des souris allant de 21 jours à l’âge de 18 mois. Lorsque vous effectuez une ovariectomie où il est souhaitable de maintenir la bourse ovarienne intact, il faut quand Inciser le tissu bursite. Chez les souris âgées de six mois d’âge, une grande partie de la bourse devient superposée avec le coussin de graisse, qui limite les domaines qui peuvent être utilisés pour l’accès. Dans ces cas, il est sou…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Recherche rapporté dans cette publication a été financée par un don généreux de souris CBA femelles de 14 mois du National Institute on Aging, colonie de rongeurs âgés (Nancy Nadon) et Utah State University, School of Veterinary Medicine, Department of Animal, produits laitiers et Sciences vétérinaires.
Materials
| Dissecting microscope | Any dissecting scope with an adjustable working distance. | ||
| Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field. | Stryker/Gaymar | TP700 | Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields. |
| Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure. | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Suture material for abdominal wall | eSutures | G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18" HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED | |
| Suture material for ovarian bursa | eSutures | 2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 TAPER | 10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field. |
| Absorbable gelatin sponge | PFIZER. | Gelfoam- PFIZER 09-0315-08. | cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions. |
| Staples for skin closure | Becton Dickinson | MikRon Autoclip 9mm (BD 427631) | |
| Eye ointment. | MWI Veterinary Supply Co. | Puralube sterile opthalmic ointment | |
| Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine | MWI Veterinary Supply Co. | BD 305536 | 27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml |
| Syringes for saline. | MWI Veterinary Supply Co. | BD 309657. | 3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle |
| Clippers/blade | Andis | Super AGR+™ Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge® #40 blade. | Any clippers with a fine blade. |
| Ethanol | University chemical supply | dilute to 70% for use. | |
| Betadine solution | MWI Veterinary Supply Co. | 003233 | |
| 2×2 gauze pads | MWI Veterinary Supply Co. | 003073 | autoclaved with surgery packs |
| Borosilicate glass beads | Sigma-Aldrich Co. | Z273619 | Autoclave in sintilation vials |
| 4-vinylcyclohexene diepoxide | Sigma-Aldrich Co. | 94956 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich Co. | S3547 |
References
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