卵巣の老化雌マウスで寿命と健康影響を調査するため同所性卵巣移植手順
Summary
ここで説明した、受信者のマウスの生理学的卵巣の影響を修正するための卵巣移植プロトコルです同所性同種。この手術は、メスのマウス卵巣の影響の様々 なタイプの公開に使用し、heterochronic 移植と様々 な前のヴィヴォトリートメントを受けた卵巣の移植があります。
Abstract
卵巣移植は 1963 年にユタ州立大学に初めて実施されました。最近の作品で哺乳類卵巣の heterochronic 移植を若い女性で若い卵巣の健康保護効果を調査するため使用されています。現在のプロシージャでは、卵巣嚢の元の位置に戻って同種卵巣を移植するところ、同所性同種移植法を採用しています。これは、皮下や腎被膜下卵巣・卵巣組織のより一般的に使用される異所性移植とは対照的です。すべての 3 つの場所は、移植された組織の効率的な血行再建術を提供します。しかし、同所性同種移植は、最も自然な信号環境に卵巣を提供し、術後自然を再現する動物のための機会を提供する唯一の手順です。1 つは卵巣摘出のプロシージャの間にすべての内因性卵巣組織を除去する世話をしなければなりません。内因性の任意の組織が残っている場合、または 1 つの卵巣が削除された場合にのみ、既存の組織には老齢になるまで移植された組織は休眠残ります。臓器移植レシピエントがかなりの政権が、移植に関連するシグナル伝達、新しい視床下部/下垂体・性腺・副腎 (HPG/A) 軸に適応する時間を取ることができる移植卵巣の血行再建術は非常に迅速に行われている間組織。通常マウスに約 100 日かかります。したがって、移植実験はこの適応期間に合わせて設計する必要があります。典型的な卵巣移植により受信者の暦年齢ではなく移植卵巣の年齢を反映する受信者の健康の変更が含まれます。
Introduction
生殖の健康と寿命に及ぼす影響はしばしば誤ってとして生殖能力を取囲む期間だけに限定されると考えます。一方、ライフ スタイルや寿命の生殖能力の段階に関連付けられている表現型は前後 postreproductive の段階から簡単に区別、生殖状態寿命のすべてのフェーズを通じて健康に影響します。生殖能力の期間は、時系列の寿命と違い生殖の寿命としても呼ばれます。この用語は、現実に 2 つの寿命指定の人工分離にそれ自身を貸す、両方がイベントで互いに密接に結ばれた影響を与える 1 つは、多くの場合、他にも影響を与えます。
過去 10 年間の証拠では、個々 の生殖の状態が慢性の健康条件1を開発のリスクの増加に関連付けられていることを示します。1 つの研究では、男性2のコホートの短い寿命のスパンと繁殖障害間の関連付けを記載されています。協会は、女性にももっと印象的です。心血管疾患は閉経前の女性3、まれであるが、卵巣障害更年期障害4で鋭く、早発閉経5若年成人女性の心血管疾患が増加します。インスリン抵抗6骨損失更年期障害7増加、ほぼ 3 分の 2 のアメリカ人のアルツハイマー病の女性8。卵巣シグナル伝達の明確な変化は、閉経前、耐病性の状態から閉経後、疾病負担の状態への移行をマークします。この安定した移行では、老化で病気リスクを加速するメカニズムを識別するために機会を示します。
最近では、凍結保存した卵巣組織の移植は、生殖細胞、化学療法などを危険にさらす可能性があります医療を受ける女性の出生率を復元する使用されています。卵巣のティッシュの移植は、トランスジェニック マウス9を含む非卵巣のベース不妊症動物の実行可能な子孫を生成する使用できます。卵巣移植、生殖機能や日付順エージング自体から生殖加齢の影響を分離する効率的な方法です。
女性の健康の多くの面で卵巣ホルモンの支持の役割を確立は、積極的に更年期障害で増加病リスクの主要な原因として生殖細胞を自転車からのホルモンの生産の損失を関係づけます。女性健康で卵巣ホルモンの値は疑わしいが、更年期と閉経後の女性でこれらのホルモンの交換されている若い卵巣で若い女性によって楽しんだ健康上の利点の復元で信頼性の高い。これらの健康上の利点は、heterochronic postreproductive の雌マウス10、11,12,13,14に若い卵巣移植による確実に復元されます。
ドナーとレシピエントの両方のマウスの生殖の状態前に、移植や卵巣摘出手術の手順の後決定してください。看板を生後 12 ヶ月で手術前に性腺の入力の推定の postreproductive マウスは、これらの実験から除外されます。生殖腺の入力は、膣細胞診によって決定されます。膣細胞診上のデータは、少なくとも 10 日間連続受信者マウスで postreproductive 状態とドナー マウスの卵巣を積極的にサイクリングできるように手術前の収集されます。日から期間が上皮細胞を核として、発情のサイクルが定義されている 1 つが最初に表示されます (すなわちproestrus) 漢方薬の期間があること、前日核上皮細胞は膣塗抹標本の次の外観に間で (すなわち発情) の存在。発情は、大規模な扁平上皮細胞、核の有無の存在によって決定されます。マウスを表示しない周期的活動前に 10 日間の期間または期間の生殖腺の入力がないように手術が決定された後。マウスは前に 10 日間でおよび/または生殖腺入力する当該期間の手術が決定された後、少なくとも 1 つの完全発情周期を表示します。雌マウスは雄マウスの存在下で収容またはサイクルを誘発する刺激に一貫性のある露出を確保するため男性のケージから汚れた寝具にさらされる必要があります。
移植手順は、二つの外科医が同時にドナーと受信者のマウス作業で最も効率的に行われます。ただし、手順は簡単に、受信者のマウスの卵巣摘出手術の手順を開始する前にほとんどの場合回復ドナー卵巣 1 つの外科医によって実行されます。このプロトコルでは、単一の外科医のための手順について説明します。通常、取り外しと卵巣の交換は顕微鏡下で行われるに対し、生殖管の露出とサイトの閉鎖を顕微鏡なし行われます。あらゆる手術の方法を学習、切開サイトが大きい場合があり、手術が最初にプロシージャを学びながら長い時間がかかるし、一般的に経験と低下します。
Protocol
Representative Results
Discussion
卵巣摘出とそのままで、生殖細胞枯渇卵巣の移植は、21 日から生後 18 カ月までマウスで行われています。実行すると、卵巣摘出卵巣の嚢をそのまま維持することが望ましいが、ファブリキウス嚢の組織を切開するときに注意する必要があります。マウスは生後 6 か月よりも古い、滑液包の多くなる脂肪のパッドは、アクセスに使用できる領域を制限がかぶせてありました。これらのケースで…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この出版物で報告された研究は、国立老化研究所、高齢者の齧歯動物のコロニー (ナンシー ネイドン) から 14 ヶ月歳雌 CBA マウスの気前のいい贈り物とユタ州立大学獣医学校、動物、酪農サポートされています。・獣医科学。
Materials
| Dissecting microscope | Any dissecting scope with an adjustable working distance. | ||
| Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field. | Stryker/Gaymar | TP700 | Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields. |
| Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure. | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Suture material for abdominal wall | eSutures | G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18" HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED | |
| Suture material for ovarian bursa | eSutures | 2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 TAPER | 10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field. |
| Absorbable gelatin sponge | PFIZER. | Gelfoam- PFIZER 09-0315-08. | cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions. |
| Staples for skin closure | Becton Dickinson | MikRon Autoclip 9mm (BD 427631) | |
| Eye ointment. | MWI Veterinary Supply Co. | Puralube sterile opthalmic ointment | |
| Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine | MWI Veterinary Supply Co. | BD 305536 | 27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml |
| Syringes for saline. | MWI Veterinary Supply Co. | BD 309657. | 3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle |
| Clippers/blade | Andis | Super AGR+™ Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge® #40 blade. | Any clippers with a fine blade. |
| Ethanol | University chemical supply | dilute to 70% for use. | |
| Betadine solution | MWI Veterinary Supply Co. | 003233 | |
| 2×2 gauze pads | MWI Veterinary Supply Co. | 003073 | autoclaved with surgery packs |
| Borosilicate glass beads | Sigma-Aldrich Co. | Z273619 | Autoclave in sintilation vials |
| 4-vinylcyclohexene diepoxide | Sigma-Aldrich Co. | 94956 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich Co. | S3547 |
References
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