Burada, inulin-FITC testis enjekte edilerek kan-testis bariyer bütünlüğünü değerlendirmek için bir protokol mevcut. Bu genetik ve çevresel öğeleri tarafından tehlikeye girebilir kan-testis bariyer bütünlüğünü incelemek için bir verimli vivo içinde yöntemidir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fare kan-Testis bariyeri bütünlük çalışma için In Vivo yöntemi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Sperma testis seminifer tübüllerin içinde olgun sperm hücreleri içine spermatogonia gelişmedir. Bu işlem Sertoli hücre kavşaklar, memeli vücuttaki dar doku engeldir ve iki bölmeleri, bir bazal ve bir adluminal seminifer epitel diğer kan-testis bariyeri (BTB), tarafından desteklenmektedir. BTB germ hücreleri için benzersiz bir microenvironment mayoz oluşturur ı / II ve sperm ile spermiogenesis içine postmeiotic spermatids gelişimi için. Burada, fare testis içinde vivobütünlüğünü BTB izlemek için güvenilir bir tahlil açıklayın. Sağlam bir BTB FITC Birleşik seminifer tübüllerin apikal bölmesinin inulin bazal üzerinden difüzyon engeller. Bu teknik gen adaylar, virüsler veya BTB işlevi veya kolay bir prosedür ve cerrahi becerileri alternatif yöntemlerine göre en az bir şartı ile bütünlüğü etkileyen çevresel toxicants çalışmak için uygundur.
Giriş
Memeli sperma spermatogonial kendini yenileme ve spermatocytes aracılığıyla hangi dramatik sırasında farklılaşma yolu ile spermiogenesis, mitoz ve mayoz haploit sperm hücreleri içine kapsayan son derece yapılandırılmış bir süreç olarak kabul edilir biyokimyasal ve morfolojik değişiklikler oluşur. Gelişmekte olan germ hücreleri aşamalı olarak lümen doğru Seminifer tübül tabanından taşınmaktadır. Bu işlem germ hücreleri ve Sertoli hücreleri1,2arasında hücre-hücre kişiler tarafından düzenlenmiştir. Bitişik Sertoli hücreleri Seminifer tübül Bankası bulunan BTB oluştururlar. BTB fiziksel olarak bir bazal ve bir adl....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm gerçekleştirilen hayvan deneyleri Nanjing Tıp Üniversitesi Komitesi tarafından onaylanmış olması. Erkek C57BL/6 fare kontrollü photoperiod koşullar altında tutuldu ve yiyecek ve su ile temin edildi.
1. hazırlıkları
-
Mikroenjeksiyon kılcal
- Mikroenjeksiyon kılcal bir dış çap, iç dimeter ve 1.0 mm, 0.8 mm ve 10,0 cm, uzunluğu ile sırasıyla kullanın.
- Cam kılcal kapiller çektirme (Şekil 1A) ile çek. Test ve bağlı olarak kullanılıyor kapiller çektirme makine ayarlarını yapın.
- Pipet ipuçları 50 µm çapı uç kılcal almak için kullanılacak forseps ile bölünürl....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
BTB bütünlük tahlil gerçekleştirmek için deneysel set-up Şekil 1' de gösterilen. Çekin ve mikroenjeksiyon kılcal bir kılcal çektirmenin ve micropipette beveler, sırasıyla keskinleştirmek (Şekil 1A ve 1 C). Termostatik ısıtıcı ve mikroenjeksiyon donatımı Şekil 1B ve 1 Dgösterilmiştir.
Şe.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Sperma seminifer epitel yer alır ve germ hücreleri ve somatik hücreler tarafından yönetilir son derece düzenli ve dinamik bir süreçtir (Örneğin, Sertoli hücreleri)13. Sertoli hücreleri tarafından oluşturulur, BTB yapısı bir bazal ve apikal bir bölme seminifer epitel ayırır. Segregasyonun ve haploit germ hücre gelişimi bir bağışıklık bariyer14oluşturan apikal kompartımanda oluşur.
BTB işlev tarafından toxicants veya hücre kavşakl.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Bu eser ayırt edici genç bilim adamları için (BK20150047), Doğa Bilimleri ulusal anahtar R & D Çin programı (2016YFA0500902), Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (31471228, 31771653), Jiangsu Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir Jiangsu Eyaleti (BK20140897, 14KJA180005) ve Jiangsu Eyaleti K.Z. için yenilikçi ve girişimci Program temeli
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kılcal çektirme | SUTTER INSTRUMENT (ABD) | P-97 | |
| 10x PBS | Hyclone (ABD) | SH30258.01 | 1 ve kez seyreltme; ddH < sub > 2 < / sub >O |
| 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) | Sigma (ABD) | F6057 | |
| Yapışma mikroskobu slaytları | CITOGLAS (Çin) | 80312-3161 | |
| Kadmiyum klorür | Sigma (ABD) | 655198-5G | |
| Konfokal mikroskop | Zeiss (Almanya) | LSM700 | |
| Tozsuz kağıt | Kimberly-Clark (ABD) | 34120 | |
| Inulin-FITC | Sigma (ABD) | F3272 | |
| Mikroenjeksiyon kılcal damarları | Zhengtianyi (Çin) | BJ-40 | 1,0 mm & kez; 0,8 mm & nbsp; & kez; 100 mm |
| Mikropipet beveler | NARISHIGE (JAPONYA) | EG-400 | |
| OCT | SAKURA (JAPONYA) | 4583 | |
| Paraformaldehit | Sigma (ABD) | P6148 | |
| Pentobarbital sodyum | Merck (Almanya) | P11011 | |
| Tıraş makinesi | Yashen (Çin) | ||
| Stereo mikroskop | Nikon (JAPONYA) | SMZ1000 | |
| Sucrose | Sangon Biotech (Çin) | A610498 | |
| Cerrahi aletler | Daha güçlü (Çin) | makas, forseps, iğne tutucu | |
| Şırınga | KDL (Çin) 20163150518 | 0,45 mm ve kez; 0,16 mm RW LB | |
| termostatik ısıtıcı | KELL (Nanjing, Çin) | KEL-2010 | |
| 10x TBS, pH 7.6 | |||
| 0.2 M Tris | Sangon Biotech (Çin) | A600194 | |
| 1.37 M Nacl | Sangon Biotech (Çin) | A610476 |
Kaynaklar
- Mruk, D. D., Cheng, C. Y. Sertoli-Sertoli and Sertoli-germ cell interactions and their significance in germ cell movement in the seminiferous epithelium during spermatogenesis. Endocrine Reviews. 25 (5), 747-806 (2004).
- Wen, Q., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
