Summary
Syftet med denna artikel är att tillhandahålla en primer för utveckling och användning av VX2 carcinoma kanin modell för levercancer.
Abstract
Kanin VX2 tumören är en djurmodell som ofta används för translationell forskning angående Hepatocellulär cancer (HCC) i fältet för interventionell radiologi. Denna modell sysselsätter en Anaplastisk skivepitelcancer som är enkelt och pålitligt förökas i skelettmuskulaturen givare kaniner för eventuell skörd och transplantatavstötning implantering i levern av naiva mottagare. Denna tumör transplantat växer snabbt inom levern av mottagarens kaniner till en angiographically identifierbar tumör kännetecknas av en nekrotisk kärna omgiven av en livskraftig hypervascular kapsel. Den fysiska storleken på kanin anatomi är tillräcklig för att underlätta vaskulär instrumentation möjliggör tillämpningen och testning av olika interventionell tekniker. Trots dessa fördelar finns det en brist på tekniska resurser för att fungera som en konkret hänvisning till forskare som arbetar med modellen. Häri, presenterar vi en omfattande visuella utkast till de tekniska aspekterna av utveckling, tillväxt, spridning och angiografiska utnyttjande av kanin VX2 tumör modellen användas av nybörjare och erfarna forskare både.
Introduction
Kanin VX2 tumör modellen har spelat en roll i experimentell onkologi sedan dess utveckling i 19351,2. Denna tumör är en virus-inducerad anaplastiskt skivepitelcancer kännetecknas av hypervascularity, snabb tillväxt och lätt förökning i skelettmuskulaturen3,4. Medan kanin VX2 tumör modellen har använts för att undersöka en mängd cancerformer5,6,7,8. Denna uppsats fokuserar levercancer9.
Syftet med metoden är att presentera en modell för primär levercancer, eller Hepatocellulär cancer (HCC), som kan användas av interventionella radiologer för translationell forskning. Det kan användas för farmakokinetiska studier, terapeutiska undersökningar och ablativ metod testar10,11,12,13,14,15.
Den metod som beskrivs häri ger flera fördelar jämfört med andra modeller inom samma område såsom gnagare modeller som råttor, möss, och woodchucks eller större modeller som primater16. En av de främsta fördelarna är den snabba och tillförlitliga tumörtillväxt som tillåter forskare att etablera en aktiv tumör linje inom en månad efter första bakbenen förökning17. Dessutom har denna tumör okomplicerad sonographic synlighet och en hypervascular periferi som möjliggör både transarterial lokoregional behandlingar och ablativ behandlingar. Slutligen, och viktigast av allt, tillåter storleken på den kanin vaskulatur genomförbart och tekniskt enkelt utnyttjande av vaskulär instrumentation18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Följande protokoll följer alla krav och riktlinjer på uppdrag av University of Illinois - Chicago. Det var granskats och godkänts av lokalen institutionella djur vård och användning kommittén före utförandet.
1. VX2 bakbenen tumörutveckling
- Upphandla den VX2 tumör cellinje från National Cancer Institute Division av behandling cancerdiagnostik och behandling tumör/Cell linje Repository.
Obs: Vid denna tid, beställa katalogen kan hittas på följande länk: https://dtp.cancer.gov/repositories/. - För att förbereda cellsuspensionen injektionsvätska, placera det frysta VX2 prov och metylcellulosa mediet i ljummet vatten tills de har tinat.
- Sug upp 0.5\u20121 mL tinade cellsuspensionen och en lika stor volym av tinade metylcellulosa medium i en 5 mL spruta.
Obs: Kan det hjälpa för att använda en 21 eller 22 G nål att aspirera cellsuspensionen och en större gauge nål att aspirera metylcellulosa medium. Placera sprutorna på is.
- Sug upp 0.5\u20121 mL tinade cellsuspensionen och en lika stor volym av tinade metylcellulosa medium i en 5 mL spruta.
- Förbereda bakbenen tumör givaren kanin för inokulering av cellsuspensionen, börjar med sedering med 1 mg/kg Acepromazin och 0,02 mg/kg buprenorfin ges intramuskulärt. Raka inokuleringsstället (bakbenen) med clippers och rena den rakade är med en alkohol - eller jod-based agent.
Obs: Meloxikam kan ges med en dos på 0,2 mg/kg subkutant för analgesi. Kaninpäls är svårt att raka. Det rekommenderas att forskaren utföra flera passerar, först fokusera på clearing en huvuddelen av päls och sedan trycka clippers mot huden och gå mot strömmen. - Fäst en 16 G nål på 5 mL sprutan innehållande cellsuspensionen och injicera 1 mL av suspensionen i magen på bakbenen muskeln givare kaninen, ungefär 1 cm djup. Var noga med att vakta ischiasnerven körs inom en påtaglig groove längs femur.
Obs: Färska VX2 infektionsstadierna framgångsrikt 88% av försökspersonerna medan frysta och upptinade VX2 är bara framgångsrika 33% av tiden19.
FÖRSIKTIGHET: VX2 tumören att växa snabbt. Biverkningar som kan noteras som en tumör fortskrider är: ökad andningsfrekvens, slöhet, nedsatt vakenhet eller beteendeförändringar (t.ex., ovanliga aggressivitet). Rekommendationer är därför att noga övervaka djuren och planera för tumör skörd inom två veckor efter inympningen.
2. VX2 bakbenen tumörtillväxt och skörd
Obs: Förutsatt att framgångsrika Inympning, bör det finnas en påtaglig (3\u20124 cm) tumör knöl vid injektionsstället inom 2 veckor. Vanligtvis blir denna knöl påtaglig cirka 1 vecka; dock är det bättre att låta tumören växa att möjliggöra tillräcklig vävnad samling. Denna knöl kommer vanligtvis vara fast, förhårdnade och upphöjd över nivån av muskeln. Om
- Palpera inokulerade området på 2 veckor från inympning. Om ingen tumörtillväxt upptäcks på 2 veckor, utför steg 1 igen. Se figur 1.
Obs: Förekomst av tumör kan också bedömas via ultraljud. Medan det har inga studier för att bedöma skillnaden i tumör tillväxt mätvärden när sprids från fryst lager jämfört med färska lager, det har varit vår erfarenhet som fryst lager tumören växer något långsammare och kommer att kunna upptäckas efter sitt färska lager kampen mot del. Oavsett, bör endera metoden ge en skördas tumör av 2 veckor. - Förbereda bakbenen tumör givaren för tumor skörd. Söva kaninen med 45 mg/kg ketamin och 5 mg/kg xylazin. Eutanasi med en intravenös (IV) dos av natrium pentobarbital överstiger 390 mg/kg.
- När kaninen har varit euthanized, börja skörda tumören genom att ta bort den kutana och subkutan vävnad överliggande tumör knutan med en skalpell med oavsett vilken storlek blad forskaren finner lämpligt. Se figur 2.
- När tumören knutan har identifierats inom bakbenen muskeln, ta bort den tumör i klump med bred krökt marginaler. För detta skär tendinous fastsättning i proximala och distala ändarna av den av muskel och sedan spåra skalpell bladet längs det underliggande benet. Tudela explanterad preparatet utsätta tumören kapseln och nekrotisk kärna. Se figur 3.
Obs: VX2 tumören har en mycket nekrotisk kärna. Var noga med att använda korrekt ögonskydd och annan personlig skyddsutrustning när skörden tumören, eftersom skador till tumör kapseln kan resultera i högtryck utmatning av nekrotisk skräp. - Försiktigt skrapa nekrotisk kärna med ett trubbigt föremål (t.ex. pincetter, Peanger) för att rengöra tumören. Detta bör möjliggöra för bättre visualisering av tumör kapseln och övergångspunkten mellan kapseln och omgivande muskler. Se figur 4.
- Från detta prov, skörda flera bitar av tumören cirka 1\u20122 mm3 och omedelbart lagra dem i en kopp som innehåller rumstemperatur steril koksaltlösning.
Obs: Dessa tumörprover kommer att användas för efterföljande intrahepatisk implantation. - Placera den kvarvarande tumören i en steril petriskål och bada det med Dulbeccos modifierade örnens Medium (DMEM). Om detta exemplar förvaras kallt på is, kan det bevaras för hantering upp till 2\u20123 h senare.
3. levertumör Implantation via laparotomi
- Förbereda mottagande kaninen för laparotomi. Söva mottagarens kanin med 45 mg/kg ketamin och 5 mg/kg xylazin för induktion följt av intubation och underhåll med 1% - 3% isofluran som behövs. När kaninen är sövda, raka operationsområdet använder hårklippningsmaskiner. Rengör området snitt med tre exemplar tvätta med betadine buskmarker, 70% etanol lösningen och betadine lösning och drapera buken i en steril kirurgiska mode.
- Med hjälp av en #15-blad, initiera laparotomi genom att göra ett litet nedåtriktad vertikal mittlinjen snitt genom kaninens hud börjar från xiphoid process. Detta bör vara lätt palperas och tenderar att vara ungefär storleken av en amerikansk penny. Se figur 5.
- Återspeglar huden och identifiera den linea alba. Detta bör vara ett reflekterande vitt band av vävnad resor inferiorly i mittlinjen. Använda trubbig dissektion för att passera den linea alba och exponera bukhinnan. Se figur 6.
Obs: Bukhinnan är lätt identifieras eftersom det kommer att direkt överliggande tarmen, vilket kan ses i rörelse med respiration.
FÖRSIKTIGHET: Bukhinnan tenderar att vara anhängare till underliggande tarmen på grund av ytspänningen. Använda trubbigt trauma för att dissekera de linea alba hjälper till att skingra risken för perforering underliggande tarmen. - När bukhinnan är utsatt, noggrant dissekera genom att ange i bukhålan. Levern kan nu identifieras. För att bättre navigera buk utrymmet, utvidga den mittlinje snitt 1\u20122 cm inferiorly genom hud, muskler och bukhinnan.
Obs: Att utvidga mittlinjen snitt kan enkelt och säkert göras genom noggrant att infoga en böjd hemostat i peritoneal utrymme med böjda spetsen vänd ytligt mot bukhinnan. Sedan öppna hemostat något och Använd ett blad till söt vävnaden mellan de två grenarna av hemostat. - Identifiera den vänstra LOB i levern för att välja en plats för tumör implantation. Den vänstra loben är infero-lateralt på mediala LOB som sitter i mittlinjen.
- Innan du försöker dra levern ur peritoneal rymden, placera en torr bit gasbinda på sämre aspekt av snittet.
Obs: Gasväv kommer att ge en vidhäftande yta att lägga levern att förhindra tillbakadragningen tillbaka in i buken. - Använder antingen atraumatiska pincett eller en bit våt kompress över fingrarna, försiktigt dra den vänstra LOB i levern av buken genom snittet och lägga den på torr gasväv placerade tidigare. Se figur 7.
FÖRSIKTIGHET: Levern kapseln är känslig och kan lätt bristning. Det är viktigt att vara varsam när du hanterar detta organ för att förhindra kapsulära blöda, lever blåmärken eller eventuell hemoperitoneum.
Obs: Vanligt, levern kommer att förklara sig visuellt vid inträdet i peritoneal utrymme; dock om kaninens mage är utspänd, kan levern skjutas cranially utom synhåll. Om så är fallet, lyft försiktigt den buk-väggen med en trubbig sond. I det här fallet levern tenderar att följa den ventrala aspekten av membranet på grund av ytspänningen så omsorgsfullt separat levern med hjälp av en trubbig sond och det bör ta bort. Sedan använda atraumatiska pincett för att dra levern ut. - Vid denna punkt, förbereda tumörvävnad för implantation och placera en bit våt kompress över levern för att skydda den.
- Välj en 1\u20122 mm3 bit av tumörvävnad som genererades under steg 2,6 för implantation i levern. Se figur 8.
- Med hjälp av en #11-blad, punkteras levern vävnad i 45° vinkel att göra en 0,5 cm djup ficka, utan för att penetrera den dorsala delen av levern kapseln. Lämna bladet på plats efter att göra punkteringen. Se figur 9.
- Lyft försiktigt upp bladet i en ventral riktning för att skapa en liten ficka i levern sängen. Ta den tumören bit med pincett, placera tumör pjäsen i denna ficka och ta sedan bort bladet.
Obs: Bladet kan tas bort innan du sätter tumören bit, dock levern kommer att blöda och detta kan dölja injektionsstället vilket gör det svårt att identifiera.
Varning: Tänk på att minimera kontakt av tumören med några andra strukturer för att förhindra oavsiktlig tumör sådd. Detta kan också undvikas med att avsätta några verktyg som används för att bistå med implantation efteråt. - Vid denna punkt, placera en bit av hemostatiska agent, till exempel gel skum, över tumören fickan att främja hemostas och förhindra utmatning av tumören bit.
- Tillbaka i levern till buken, när hemostas är bekräftad.
- Stäng den buk-väggen med 3-0 Polydioxanon suturen på en konisk nål använder en enkel kontinuerlig sy och nära huden med 4-0 polyglactin 910 suturer på en skärande nål med fortlöpande resorberbar stygn.
Varning: När du stänger den buk-väggen, ta hand inte kommer för att skada omentum eller andra tarm strukturer i en sutur kasta.
Obs: Medan denna tumör kommer att ta minst 2 veckor vara slutgiltigt Röntgenologiskt identifierbar, det når en storlek på 1.5\u20122 cm diameter på 3 veckors tillväxt. Var noga med att inte tillåta nedsatt tumören att växa förbi 3.5\u20124 veckor eftersom tumören bildar en exophytic massa och aggressivt sprids lokalt.
4. VX2 Tumör Suspension förberedelse
- Placera en 40 µm SIL i munnen på en 50 mL konisk propen tube. Med hjälp av tumören från steg 2,7, Använd ett #15-blade för att skrapa tumör ytan för att samla livskraftig tumör och placera dessa avskrapningen i Silen.
- Tvätta de livskraftiga tumör avskrapningen genom en sil med DMEM och sedan Centrifugera propen röret vid 1600 rpm i 8 min.
- Efter centrifugen är komplett, avlägsna supernatanten och kassera den. Lägg sedan till metylcellulosa till återstående cell block på volymetriska förhållandet 1:1.
- Injicera denna suspension i bakbenen givare kanin efter steg 1.3\u20121.4. Placera de återstående suspensionen i 1 mL alikvoter i kryogena rör och frysa dem i flytande kväve för senare användning.
5. angiografiska utnyttjande av VX2 levertumör
- Förbereda kaninen som beskrivs i steg 3.1.
- Palpera femorala spåret i ljumsken. När spåret har identifierats, gör en 2\u20123 cm linjär snitt längs spåret. Se figur 10.
- Med trubbig dissektion, leta upp och isolera den femorala bunt som innehåller den femoral ven och artär nerv. Se figur 11.
- Igen, använda trubbig dissektion att separera femoralartären från resten av strukturerna i bunten och isolera artären ovanpå en skalpell handtag. Se figur 12.
- Med ett 3-franska introduktören kit, utnyttja den Seldinger-tekniken för att få åtkomst med en nål. Infoga en ledaren och nålen för att avancera den 3-franska slidan in i kärlet. Se figur 13.
FÖRSIKTIGHET: Undvik överdriven kraft framåt 3-franska manteln, eftersom detta kan resultera i transection av femoralartären. - Markera under fluoroskopisk vägledning och hjälp av en kateter, ledaren och Johexol kontrastmedel för den celiaki stammen — vanligtvis ligger på nivån T12 — och sedan fram katetern i vänster nedsatt artär via vanliga nedsatt och korrekt nedsatt.
- Vid denna punkt, administrera medlet av val genom katetern. När agenten administreras, ta bort katetern.
- Med 3-0 silk sutur, ligera femoralartären proximalt och distalt till insättningspunkten om slida. Glöm inte att dra åt Knut proximalt slida som den dras för att förhindra blödning.
- Stäng ljumske snitt med 4-0 polyglactin 910 suturer på en skärande nål använder en resorberbar söm.
- Upprätthålla standard postoperativ vård och övervaka djurens återhämtning. Utföra eutanasi och Obduktionsresultat som behövs med standardtekniker.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
När du tittar på bild 1, är det uppenbart att quadricep av kaninen är förstorad. Dessutom är flera små diskreta noduli, vanligtvis korrelera med tumörtillväxt genom fascian, synliga. Vid palpation, bör den injicerade extremiteten visas än icke-injicerade extremiteten. Om en forskare kräver mer definitiva kvalitetssäkring av tumör närvaro, kan ultraljudsundersökningar användas för att identifiera tumören inbäddade i muskeln. Om en tumör inte upptäcks bör av bakbenen åter injicerade med en tumör cellsuspension.
För att bekräfta lyckad kärlaccessen, observeras blod tillbaka in i skidan på aspiration som kan ses i figur 13D. Om kärlaccessen var misslyckat, kommer försök aspiration ge luft i slidan eller presentera med betydande motstånd när man drar kolven i sprutan.
För lever tumörtillväxt, det finns två sätt att bekräfta framgångsrik förökning: angiographically och på obduktion. På angiografi, kan identifiering av tumören uppstå omedelbart som är fallet i figur 14A där tumören drar blod leverans direkt från den gemensamma levern artären. Det kan också ta lite tid i de fall där tumören är laterala som är fallet i figur 14D. Om tumören inte är synlig efter injektion av kontrast i den gemensamma levern artären, bör forskaren försöka injicera vänster och höger nedsatt artärer kontrast för att förbättra chanserna att belysa tumören. Det kan också hjälpa för att titta för avvikande artärer resor sidled mot den distala kanten i levern som kan ses i figur 14C. På obduktion bör tumören väl synlig som kan ses i figur 15B (jämför med figur 15A).
Figur 1: kanin bakbenen. Rakad kanin bakbenen med massa vägledande av tumörtillväxt. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: utsatt bakbenen. Samma lemmen som visas bild1 med överliggande hud återspeglas avslöjar ett stort område av hypervascularity och missfärgning skiljer sig från den omgivande muskler som representerar platsen för tumören (vit streckad linje). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: Tumören bort klump och genomskärs. (A) tumör och omgivande muskler bort klump. (B) tumör har varit genomskärs för att avslöja dess kapsulära vägg (pilspetsar) och nekrotisk kärna. Tumör process kan ses i både halvor samt vissa nekrotisk skräp. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: tumör kapsel. Pilspetsar betecknar en bit av tumör (T), som avgränsas från intilliggande muskel (M) av tumör kapseln (vit streckad linje). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5: utsatt xiphoid process. Hud och underliggande muskler har avspeglats som möjliggör visualisering av xiphoid process (svart pil) och tarmen (vit pil). Den vita stjärnan betecknar kranial riktning. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 6: Linea alba. Överliggande hud och fascia har avspeglats som möjliggör visualisering av den linea alba (svart pil) körs i en kranial till stjärtfenan riktning. Detta område är avaskulär och ger för blodförlust fri tillgång av peritoneal utrymme. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 7: LOB i levern utanför bukhinnan. Denna bild visar en LOB i levern som var försiktigt utvinns från peritoneal rymden och placeras på en bit gasbinda. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 8: efterbehandlade tumören bit för implantation. En bit av tumören behandlas till lämplig storlek för implantation placeras bredvid spetsen av ett #11-blad för skala. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 9: skapa en ficka i levern för tumör implantation. En #11-bladet infogas till lämpligt djup i den extraherade LOB i levern. Detta kommer att skapa en lämplig storlek pocked för implantation av tumören bit från figur 8. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 10: den femorala spåret och inledande snitt. (A) Palpation av bakbenen möjliggör visualisering av femorala spåret (vit streckad linje). (B) inledande snitt i den bakbenen som gjort längs femorala spåret. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 11: identifiering av femorala bunten. Trubbig dissektion av ursprungliga snittet avslöjar femoral ven (svart pil). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 12: dissekering av femorala bundle och isolering av femoralartären. (A) dissektion av femorala bunt ger oss möjlighet att individuellt skilja (från vänster till höger) den femoral ven (FV), lårbensartären (FA) och femoralisblockad (FN). (B) den femoralisartären isolerad på en skalpell handtag. Observera kolumnen blod möjliggör åtskillnad från femoralisblockad. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 13: kärlaccessen. (A) en ledaren (G) är avancerade in femoralartären (FA) genom tillgång till nålen (N) som infördes tidigare i femoralartären. (B) en slida (S) och dilatator (D) är avancerade under ledaren (G) till femoralartären (FA). (C) slida (S) och dilatator är avancerade fullt in i femoralisartären (FA) upp till navet slida. (D) slida är säkrad med silke efter att dilator och ledaren har tagits bort. Aspiration ger blod (svart pil) i skidan. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 14: angiografiska avbildning av nedsatt tumör. (A) kateterspetsen (vit pil) leverera kontrast direkt i artär utfodring tumören (vit stjärna). (B) kateterspetsen (vit pil) leverera kontrast i distala vänster nedsatt artär och måttlig kontrast upptag av laterala tumör (vit stjärna). (C) ytterligare kontrast injektion i tumör från B visar en avvikande artär (vit linje) som reser från katetern (vit pil) till tumören (vit stjärna). (D) tumören från B efter ytterligare kontrast upptag. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 15: kanin lever. (A) en frisk kanin lever visar den vänstra mediala lob (vit stjärna) överliggande den vänstra laterala loben (svart stjärna). (B) en kanin lever med en fullt utvecklad leverfunktion tumör (vit pil). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ett första viktigt steg i metoden VX2 tumör är framgångsrik förökning av en tumör i det bakre ledet i en givare kanin. Hänvisa till första stycket i avsnittet ”representativa resultat” för mer information om det här steget.
Nästa viktiga steg är att säkerställa att livskraftiga tumör kapseln identifieras korrekt. Inte bara kommer detta vara nödvändigt för tumör suspension förberedelser, men det är också viktigt för att välja och generera tumör bitar för nedsatt implantation. Avgränsningen mellan livskraftig tumör och omgivande muskelvävnad är kommenterad i figur 4. Om den felaktiga vävnadsprov är skrapade under suspension beredning, misslyckas efterföljande bakbenen förökning. Om detta inträffar under nedsatt implantation kommer att tumörtillväxt i levern inte inträffa. Detta blir inte uppenbara förrän angiografi.
Under implantationsprocessen nedsatt bör vara försiktig när man närmar sig den vänstra LOB i levern. Ofta, om levern är uppenbart när du anger bukhinnan, är det faktiskt den mediala LOB i levern som operatörer observerar. Implantation i den mediala LOB i levern presenterar en handfull frågor för angiografiska användning. Först är den mediala lobes anatomiska relation med ryggraden. En medial LOB tumör kan ofta vara förvrängd av ryggraden på fluoroskopi försvårar bekräftelse och behandling av tumören. Den gastrointestinala artären är dessutom oftare förknippat med den blodkärlen som försörjer den mediala loben. Detta ökar risken för icke-målorganismer embolisering av tarmen och kan potentiellt leda till tarm ischemi/infarkt och möjlig död av djuret. Som nämnts tidigare, räknas detta inte som ett misslyckande; däremot garanterar det mer vård under visualisering och behandling.
Det sista kritiska steget är framgångsrika och stabila lårbensartären tillgång. Som kan ses i figur 12, isoleras femoralartären ovanpå en skalpell blad handtag. Medan detta görs oftast för att tillåta forskaren som mer exakt utföra Seldinger teknik20, bör den bibehållas under hela förfarandet. Detta beror på att ta bort skalpell handtaget när skidan har införts kan orsaka oavsiktlig rörelse om slida inom den blodkärlen som leder till slida ocklusion och eventuella skador av kärlsystemet och omgivande strukturer. Om skidan blir lossnar under förfarandet, applicera tryck i femorala spåret proximala access-sidan för att stoppa blödningen och artären kan sedan vara sammanskrivna. Försök inte att återinföra slidan. Forskaren kan försöka få åtkomst från den kontralaterala femoralisartären.
VX2 plattformen är en robust modell i nuvarande användning för translationell forskning angående HCC, har det relevanta brister. Primära svagheten i denna modell är att dess sjukdomstillstånd inte härma det av en mänsklig HCC. Tumören inducerad är inte sjukligt liknar mänskliga HCC är inte heller den icke-cirrotiska lever parenkymal mikromiljö. Dessutom visar VX2 tumören betydande interna nekros, som utesluter denna modell från användning för behandling effektstudier. Några alternativa modeller inkluderar gnagare modeller såsom möss, råttor, och woodchucks eller större djurmodeller som svin och primater. 16 , 21 dessa alternativ som alla ger olika fördelar och nackdelar; dock anser författarna, angiografiska utnyttjande och kostnad effekt, fortfarande VX2 kaninen dominerande.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Det arbete som skildras i denna rapport stöddes av forskningsbidrag från Guerbet LLC.
Acknowledgments
Vi skulle vilja erkänna den veterinära personalen vid University of Illinois - Chicagos biologiska resurser laboratorium.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MethoCult (Methycellulose) | Stemcell Technologies | M3134 | |
| VX2 Cell Line | NCI | VX-2 | |
| 5 mL Syringe | BD | 309646 | |
| 16 G Needle | BD | 305197 | |
| 22 G Needle | BD | 305155 | |
| Hair Clippers | Wahl | 41870-0438 | |
| Foam Insulated Box | Mr. Box Online | 10 x 10 x 4 | |
| Acepromazine | Henry Schein | 003845 | |
| Buprenorphine | Par | 42023-179-05 | |
| Meloxicam | Henry Schein | 049755 | |
| Alcohol Pads | Covidien | 5033 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Xylazine | Akorn | 59399-110-20 | |
| Pentobarbital (Fatal-Plus) | Vortech | 9373 | |
| Sterile Petri Dish | Thermo Fisher | 172931 | |
| DMEM | Gibco | 11965092 | |
| Saline | Baxter | 2F7124 | |
| 15-Blade | Steris | 02-050-015 | |
| Scalpel Handle x 2 | Steris | 22-2381 | |
| Curved Hemostat | WPI | 501288 | |
| Atraumatic Forceps | Sklar | 52-5077 | |
| Gauze | Medline | NON21430LF | |
| 11-Blade | Steris | 02-050-011 | |
| Surgicel | Ethicon | 1951 | |
| 3-0 PDS / Taper | Ethicon | Z305H | |
| 4 - 0 Vicryl / Cutting | Ethicon | J392H | |
| 40 μm strainer | BD | 352340 | |
| 50 mL conical tube | Thermo Fisher | 339652 | |
| plastic pipette | Thomas Scientific | HS206371B | |
| Centrifuge | Sorvall | 75004240 | |
| 1.40 mL Tubes (Internal Thread) | Micronic | MP32131-Z20 | |
| 3-F VSI Micro-HV Introducer Kit | Vascular Solutions | Custom Order (P15180391) | |
| .018 45° angle glidewire | Terumo | RG*GA1818SA | |
| Direxion bern-shape microcatheter | Boston Scientific | M001195230 | |
| Omnipaque | GE | Y510 |
References
- Rous, P., Beard, J. W. The Progression To Carcinoma of Virus-Induced Rabbit Papillomas (Shope). The Journal of Experimental Medicine. 62 (4), 523-548 (1935).
- Kidd, J. G., Rous, P. A transplantable rabbit carcinoma originating in a virus-induced papilloma and containing the virus in masked or altered form. The Journal of Experimental Medicine. 71 (6), 813-838 (1940).
- Galasko, C. S. B., Muckle, D. S.
- Maruyama, H., et al. Sonographic shift of hypervascular liver tumor on blood pool harmonic images with definity: Time-related changes of contrast-enhanced appearance in rabbit VX2 tumor under extra-low acoustic power. European Journal of Radiology. 56 (1), 60-65 (2005).
- Horkan, C., et al. Radiofrequency Ablation: Effect of Pharmacologic Modulation of Hepatic and Renal Blood Flow on Coagulation Diameter in a VX2 Tumor Model. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 15 (3), 269-274 (2004).
- Bimonte, S., et al. Induction of VX2 para-renal carcinoma in rabbits: generation of animal model for loco-regional treatments of solid tumors. Infectious Agents and Cancer. 11 (1), 1-8 (2016).
- Goldberg, S. N., Gazelle, G. S., Compton, C. C., Mueller, P. R., McLoud, T. C. Radio-frequency tissue ablation of VX2 tumor nodules in the rabbit lung. Academic Radiology. 3 (11), 929-935 (1996).
- Rhee, T. K., et al. Rabbit VX2 Tumors as an Animal Model of Uterine Fibroids and for Uterine Artery Embolization. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 18 (3), 411-418 (2007).
- Parvinian, A., Casadaban, L. C., Gaba, R. C. Development, growth, propagation, and angiographic utilization of the rabbit VX2 model of liver cancer: A pictorial primer and "how to" guide. Diagnostic and Interventional Radiology. 20 (4), 335-340 (2014).
- Xia, X., et al. Intra-arterial interleukin-12 gene delivery combined with chemoembolization: Anti-tumor effect in a rabbit hepatocellular carcinoma (HCC) model. Acta Radiologica. 54 (6), 684-689 (2013).
- Gaba, R. C., et al. Ethiodized oil uptake does not predict doxorubicin drug delivery after chemoembolization in VX2 liver tumors. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 23 (2), 265-273 (2012).
- Choi, Y. H., et al. Novel Intraarterial Therapy for Liver Cancer Using Ethylbromopyruvate Dissolved in an Iodized Oil. Academic Radiology. 18 (4), 471-478 (2011).
- Ma, H. L., Xu, Y. F., Qi, X. R., Maitani, Y., Nagai, T. Superparamagnetic iron oxide nanoparticles stabilized by alginate: Pharmacokinetics, tissue distribution, and applications in detecting liver cancers. International Journal of Pharmaceutics. 354 (1-2), 217-226 (2008).
- Wang, D., et al. Liver tumors: Monitoring embolization in rabbits with VX2 tumors -Transcatheter intraarterial first-pass perfusion MR imaging. Radiology. 245 (1), 130-139 (2007).
- Bimonte, S., et al. Radio-frequency ablation-based studies on VX2rabbit models for HCC treatment. Infectious Agents and Cancer. 11 (1), (2016).
- Gaba, R., Obeid, M., Khabbaz, R., Garcia, K., Schachtschneider, K. Translational Animal Models for Liver Cancer. American Journal of Interventional Radiology. 2 (2), 1-8 (2018).
- Kuszyk, B. S., et al. Local tumor recurrence following hepatic cryoablation: radiologic-histopathologic correlation in a rabbit model. Radiology. 217 (2), 477-486 (2000).
- Geschwind, J., et al. Chemoembolization of Liver Tumor in a Rabbit Model Assessment of Tumor Cell Death with Diffusion-Weighted MR Imaging and Histologic Analysis. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 11 (10), 1245-1255 (2000).
- Virmani, S., et al. Comparison of Two Different Methods for Inoculating VX2 Tumors in Rabbit Livers and Hind Limbs. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 19 (6), 931-936 (2008).
- Seldinger, S. I. Catheter replacement of the needle in percutaneous arteriography: A new technique. Acta Radiologica. 49 (SUPPL 434), 47-52 (2008).
- Schook, L. B., et al. A genetic porcine model of cancer. PLoS One. 10 (7), e0128864 (2015).
