Un modello di topo ortotopico oncogenico indotto dall'epatocito del cancro epatocellulare in aumento nell'impostazione dell'infiammazione epatica e della fibrosi

Summary

Qui, descriviamo lo sviluppo di un modello murino clinicamente rilevante del cancro al fegato che riassume le caratteristiche immunitarie tipiche del cancro epatocellulare (HCC).

Abstract

L'assenza di un modello animale clinicamente rilevante che affronti le caratteristiche immunitarie tipiche del cancro epatocellulare (HCC) ha ostacolato significativamente la chiarimento dei meccanismi sottostanti e lo sviluppo di strategie immunoterapeutiche innovative. Per sviluppare un modello animale ideale che riassume l'HCC umano, i topi maschi immunocompetenti C57BL/6J ricevono prima un'iniezione di tetracloruro di carbonio (CCl₄₎per indurre la fibrosi epatica, quindi ricevono epatociti oncogenici istogenici-normali dal giovane maschio L'antigene SV40 T (TAg)-mice transgenico (MTD2) per inoculazione intrasplenica (ISPL). Androgeno generato in topi maschi destinataria alla pubertà avvia l'espressione TAg sotto il controllo di un promotore specifico del fegato. Di conseguenza, gli epatociti trasferiti diventano cellule tumorali e formano masse tumorali nell'impostazione della fibrosi epatica/cirrosi. Questo nuovo modello imita l'inizio e la progressione umana dell'HCC nel contesto della fibrosi/cirrosi epatica e riflette le caratteristiche più tipiche dell'HCC umano, inclusa la disfunzione immunitaria.

Introduction

Il cancro epatocellulare (HCC) è il tipo di cancro in più rapido aumento negli Stati Uniti (USA)^1,2,3. Ogni anno, circa 850.000 nuovi casi vengono diagnosticati^4,5 e 700.000 pazienti muoiono per questa malattia letale^6,7,8,9,10 , rendendola la seconda causa più alta di morte legata al cancro al mondo. La gestione dell'HCC comprende resezione chirurgica, tra....

Protocol

NOTA: Tutta la procedura, inclusi i soggetti animali, è stata approvata dall'IACUC presso l'Università del Missouri. Tutti i topi hanno ricevuto cure umane secondo i criteri delineati nella "Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio". La seguente procedura per l'isolamento cellulare e l'inoculazione deve essere eseguita in un cofano. Tutti gli esecutori devono indossare l'attrezzatura protettiva personale standard per la manipolazione dei topi e dei tessuti.

1. Induzione di fibrosi e cirrosi del fegato con iniezione IP di tetracloruro di carbonio (CCl₄)

NOTA: vedere la figura 1.

Results

Gli epatociti oncogeni isolati dai topi transgenici TAg (Figura 2) sono stati seminati nel fegato di topi selvatici mediante iniezione intrasplenica (Figura 3). Gli epatociti trapiantati con successo e in modo affidabile sono cresciuti con successo e in modo affidabile tumori HCC ortotopici (Figura 4) con antigene tumorale specifico SV40 TAg (Figura 5) nell'impostazione di infiammazione epatica e fibrosi ( Figura1).

Discussion

Con questo protocollo, abbiamo stabilito un modello murino affidabile e riproducibile di HCC che imita l'inizio e la progressione umana dell'HCC. Clinicamente, molti fattori di rischio successivamente inducono lesioni epatiche, fibrosi epatica, cirrosi e la fase finale di HCC. Nel nostro protocollo, l'iniezione IP di CCl₄ viene utilizzata per produrre prima fibrosi epatica in topi selvatici, che consente ai successivi epatociti oncogeni di formare i tumori nell'impostazione della fibrosi epatica. Abbiamo scope.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Macchina per anestesia	VETEQUIP	IMPAC6	macchina per anestesia per chirurgia
Ago a farfalla	BD	8122963	Ago utilizzato per la perfusione epatica
C57BL / 6 topi	Jackson Lab	000664	Topi utilizzati nel prototolo
Carprofene	CRESCENT CHEMICAL	20402	carprofene per il rilascio del dolore
Cell Strainer	CORNING	REF 431751	Filtro cellulare, 70µ m, per isolamento di epatociti
Centrifuga	Beckman Coulter	Allegra X-30R	centrifuga per isolamento cellulare
Clips	Teleflex Medical	REF 523700	Clip in Titanio per
Microscopio Milza	Zeiss	Primovert	Microscopio per osservazione cellulare
Topi Mtd2	N/A		Dono del Dr. William A Tenuto presso il Roswell Park Cancer Institute nel 2002, mantenuto nel nostro laboratorio
Ago	BD	REF 305109	Ago BD precisionglide, 27G x 1/2 (0,4 mm x 13 mm)
Sutura	ETHICON	J303H	sutura VICRYL rivestita
SV40 T Ag anticorpo	Abcam	ab16879	anti-SV40 Anti-antigene T per siringa IHC
	BD	REF 309626	Siringa TB da 1 mL per iniezione cellulare
Trypan blue	SIGMA	T 8154	Soluzione di trypan blue per test di vitalità cellulare
Clip per ferite	Reflex	reflex9, Part. No. 201-1000	clip per ferite in acciaio inox per chiusura della ferita