Un modèle in vivo de souris d'insuffisance d'oestrogène pour le criblage des traitements exogènes exogènes de la dysfonction cardio-vasculaire après ménopause
Summary
Cliniquement, l’insuffisance d’oestrogène dans les femmes ménopausiques peut aggraver l’incidence de la perturbation de lipide et de l’athérosclérose. Nous avons établi un modèle in vivo d’insuffisance d’oestrogène par ovariectomy bilatéral par l’intermédiaire d’une double incision dorsal-latérale dans apoE-/- souris. Le modèle de souris est applicable pour le dépistage des traitements exogènes exogènes de dysfonctionnement cardio-vasculaire après la ménopause.
Abstract
Les femmes ménopausées sont plus à risque de développer des maladies cardiovasculaires que les femmes préménopausées. Les souris femelles ovariectomized (OVX) à l’affichage de soudure ont augmenté des lésions athérosclérotiques dans l’aorte comparées aux souris femelles avec la fonction ovarienne intacte. Cependant, les modèles de laboratoire impliquant des souris oestrogène-déficientes avec l’état athérosclérose-enclin font défaut. Ce déficit est crucial parce que l’insuffisance clinique d’oestrogène dans les femmes ménopausées peut aggraver l’incidence de la perturbation préexistante ou continue de lipide et de l’athérosclérose. Dans cette étude, nous établissons un modèle in vivo de souris oestrogène-déficient par ovariectomy bilatéral par l’intermédiaire d’une double incision dorsal-latérale dans l’apolipoprotein E (apoE)-/- souris. Nous comparons ensuite les effets de la propagation de la tartine de noisette et de la pseudoprotodioscine (PPD) (un phytoestrogène) administrés peroraux par tartinade aux noisettes. Nous constatons que bien que PPD exerce un certain effet sur la réduction du poids corporel final et du plasma TG chez les souris OVX apoE-/- il a des capacités anti-atherosclérotiques et cardiaques-protectrices comparables à son homologue de 17 ans et plus. PPD est un phytoestrogène qui a été rapporté pour exercer des propriétés anti-tumorales. Ainsi, la méthode proposée est applicable pour le dépistage des phytoestrogènes par l’administration perorale pour remplacer l’hormonothérapie substitutive traditionnelle chez les femmes ménopausées, qui a été rapportée pour avoir potentiellement délétère tumorigenetic capacité. L’administration perorale par l’intermédiaire de la propagation de noisette est non envahissante, la rendant largement applicable à beaucoup de patients. Cet article contient des démonstrations étape par étape de l’ovariectomy bilatéral par l’intermédiaire de l’incision dorsal-latérale double dans apoE-/- souris et peroral 17-estradiol ou remplacement d’hormone de phytoestrogen par la propagation de noisette. Les analyses de lipide et de fonction cardio-vasculaire de plasma utilisant l’échocardiographie suivent.
Introduction
Des études épidémiologiques et cliniques ont montré que les femmes ménopausées sont considérablement plus à risque de maladie cardiovasculaire que les femmes préménopausées1,2. L’hormonothérapie substitutive (THS) peut réduire le risque relatif de maladie cardiovasculaire à 0,37-0,793. Parmi d’autres complications, l’athérosclérose causée par les maladies cardiovasculaires est la principale cause de décès dans le monde4. Cependant, les modèles de laboratoire impliquant des souris oestrogène-déficientes présentant le statut enclin d’athérosclérose manquent. Ce protocole fournit un modèle in vivo de souris d’insuffisance d’oestrogène pour le criblage des traitements exogènes d’oestrogène de la dysfonction cardio-vasculaire après ménopause.
Des études antérieures montrent que l’application d’OVX chez les rongeurs athérosclérotiques nourris avec un régime riche en cholestérol peut imiter les femmes ménopausées souffrant d’athérosclérose5,6,7,8. Un modèle animal reproductible et commode ressemblant à l’état athérosclérotique dans les femmes ménopausées est la base de la recherche exogène d’oestrogène. Ici, une double incision dorsal-latérale de l’ovariectomy bilatéral a été appliquée dans l’athérosclérose-encline E knock-out (apoE-/-) souris9,10. Comparé e à l’incision abdominale moyenne ou dorsal, l’incision double dorsal-latérale est une méthode plus facile et moins longue qui peut éviter l’adhérence et l’inflammation abdominales graves de cavité. L’administration perorale par propagation de noisette (voir tableau des matériaux) est non invasive et pratique, la rendant largement applicable en tant que mode d’administration à long terme11. L’implantation de granulés à libération lente est également populaire6. Cependant, les implants peuvent aggraver l’incidence de l’infection en particulier chez les souris soumises à OVX. D’autres modes d’administration non invasifs, tels que le gavage oral et l’administration de l’eau, ont également de nombreux inconvénients. Le gavage oral stresse généralement les souris et peut causer des lésions oesophagiennes. L’administration de l’hormone par l’intermédiaire de l’eau potable est très bénéfique; cependant, l’ajout de DMSO comme émulsifiant est inévitable car les oestrogènes exogènes sont insolubles dans l’eau. Ici, nous avons choisi le remplacement peroral d’hormone de 17 ou de phytoestrogen par l’écart de noisette pour l’administration à long terme.
Récemment, l’effet bénéfique de HRT sur le système cardio-vasculaire des femmes postmenopausal a été contesté dans les essais d’initiative de santé des femmes (WHI)12. D’une part, l’oestrogène exogène seul exerce un effet bénéfique sur le système cardio-vasculaire ; d’autre part, il peut combiner avec l’acétate de metohydroxyprogestérone pour augmenter le risque d’événements cardio-vasculaires. Plus sérieusement, HRT peut mener à la progression de tumeur de sein et utérin, et cet effet a nettement limité son utilisation13,14. Plus d’intérêt a été porté sur les effets cardio-protecteurs des oestrogènes exogènes manquant d’activité mitotique dans les cellules tumorales15,16,17. De multiples études chez l’homme et les animaux suggèrent que les phytoestrogènes avec des structures similaires à celle des oestrogènes peuvent jouer un rôle bénéfique dans la protection cardiovasculaire15,18.
Ainsi, les buts du travail actuel sont (i) de construire un modèle in vivo de souris d’insuffisance d’oestrogène par ovaricectomie bilatérale par l’intermédiaire d’une incision dorsal-latérale double dans apoE-/- souris et (ii) pour comparer les effets protecteurs cardio-vasculaires de perorally administré 17′-estradiol et pseudoprotodioscine (PPD), par l’intermédiaire de la propagation de noisette. 17-estradiol est un genre d’oestrogène exogène qui appartient aux hormones sexuelles féminines6,11,19. PPD, une saponine stéroïde et phytoestrogène des usines de Dioscorea, a été précédemment rapporté pour exercer des propriétés anti-tumorales20.
Protocol
Representative Results
Discussion
La méthodologie décrite ici est un modèle de souris ressemblant à la perturbation de lipide et à l’athérosclérose vu dans les femmes ménopausées. Il est bien documenté que l’insuffisance d’oestrogène dans les femmes postmenopausal peut aggraver l’incidence de l’hypercholestérolémie préexistante ou continue avec les lésions atherosclérostic progressivement complexes et répandues1. Pour imiter le statut athérosclérose-enclin dans la clinique, les souris apoE-déficientes, une sour…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par la National Natural Science Foundation of China (81202526 à J.X.), la National Natural Science Foundation of China (81302769 à B.S.), la Beijing Municipal Natural Science Foundation (47144226 à B.S.), le Science Foundation (20110490325 à J.X.), et la Ph.D. Programs Foundation of Ministry of Education of China (20121106120031 à B.S.).
Materials
| 17β-estradiol, >98% | Sigma-Aldrich | E8875-250MG | Estrogen |
| Disposable syringes (with 25G needles) | Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd | 0.5*19TWLB | Cardiac bleeding |
| High-cholesterol mouse diet | Huafukang Bio-Technology | N/A | 1.25% cholesterol, 0% cholate |
| High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System | VisualSonics | Vevo®770 | Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction |
| 2-Methyl-2-butanol | Sigma-Aldrich | 152463-250ML | Preparation of avertin |
| Micro Dissecting forceps, Curved 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Micro Dissecting forceps, Straight 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Monofilament suture 4-0 1/2 5*12 19mm | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd | R413 | Suture and ligation of the tissues |
| Nut cream (Nutella) | Ferrero | N/A | Medium for peroral 17β-estradiol or PPD |
| OptiVisor optical glass binocular magnifier | Dohegan Optical Company Inc. | N/A | Assistant of identifying the tissues during ovariectomy |
| Phosphate-buffered saline at pH 7.4 | SIGMA | P3813 | Preparing 1 L saline |
| Pro MultiLabel Microplate Reader | Tecan | Infinite M1000 | Plasma TC and TG determination |
| Pseudoprotodioscin | Shanghai Winherb Medical S & T Development | W-0427 | CAS registry no. 102115-79-7 |
| Rimadyl, 50 mg/mL | Pfizer Pharma GmbH | 462986 | Postoperative analgesia after ovariectomy |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547-1L | Dissolving the 17β-estradiol or PPD |
| Solcoseryl Eye-Gel | Menarini, Solco Basle Ltd. | Eye protection during anesthesia | |
| Stereo microscope | MCALON | MCL-6STV | Image of the intimal region of aorta |
| Table model high speed centrifuge | SIGMA | 1-14K | Preparation of plasma |
| Scissors, slight Curve (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Scissors, straight Flat (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Tissue forceps, serrated, slight Curve (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Tissue forceps, serrated, straight Flat (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Tribromoethanol | Sigma-Aldrich | T48402-5G | Preparation of avertin |
| Triglycerides (TG) assay kit | Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering | A110-1 | Plasma TG determination |
| Total cholesterols (TC) assay kit | Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering | A111-1 | Plasma TC determination |
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