폐경 후 심장 혈관 기능 장애의 외인성 에스트로겐 치료를 선별하기위한 생체 내 에스트로겐 결핍 마우스 모델
Summary
임상적으로, 갱년기 여성의 에스트로겐 결핍은 지질 장애및 동맥 경화증의 발생률을 악화시킬 수 있습니다. 우리는 apoE-/- 마우스에 있는 이중 등측 절개를 통해 양측 난소 절제술에 의하여 생체 내 에스트로겐 부족 모형을 설치했습니다. 마우스 모델은 폐경 후 심혈관 기능 장애의 외인성 에스트로겐 치료를 스크리닝하는 데 적용가능하다.
Abstract
폐경 후 여성은 폐경 전 여성보다 심혈관 질환이 발생할 위험이 더 큽입니다. 여성 마우스 난소 (OVX) 위닝 디스플레이에서 그대로 난소 기능을 가진 여성 마우스에 비해 대동맥에서 죽상 경화성 병변을 증가시켰다. 그러나, 동맥 경화 경향이 상태 와 에스트로겐 결핍 마우스를 포함 하는 실험실 모델 부족. 이 적자는 갱년기 여성의 임상 에스트로겐 결핍이 기존 또는 지속적인 지질 장애 및 동맥 경화증의 발생률을 악화시킬 수 있기 때문에 매우 중요합니다. 이 연구에서, 우리는 apolipoprotein E (apoE)-/- 마우스에 있는 이중 등쪽 측삭 절개를 통해 양측 난소 절제술에 의하여 생체 내 에스트로겐 결핍 마우스 모형을 설치합니다. 그런 다음 헤이즐넛 스프레드를 통해 perorally 투여된 17β-estradiol 및 슈도프로토디오신(PPD) (식물성 에스트로겐)의 효과를 비교합니다. 우리는 PPD가 OVX apoE-/- 마우스에서 최종 체중 과 혈장 TG를 감소시키는 데 약간의 영향을 미치지만, 17β-estradiol 대응과 비교할 수 있는 항 동맥 경화 및 심장 보호 능력을 가지고 있음을 발견했습니다. PPD는 항 종양 특성을 발휘 하는 보고 된 식물 에스트로겐. 따라서, 제안된 방법은 폐경 후 여성의 전통적인 호르몬 대체 요법을 대체하기 위해 페랄라 투여를 통한 식물성 에스트로겐 스크리닝에 적용되며, 이는 잠재적으로 해로운 종양유전학을 가지고 있는 것으로 보고되었다. 용량. 헤이즐넛 퍼짐을 통한 페랄랄 투여는 비침습적이며, 많은 환자에게 널리 적용가능하다. 이 문서는 apoE-/- 마우스와 페랄 17β-estradiol 또는 헤이즐넛 확산을 통해 식물 에스트로겐 호르몬 교체에 이중 등쪽 측면 절개를 통해 양측 난소 절제술의 단계별 데모를 포함. 심초음파를 이용한 혈장 지질 및 심혈관 기능 분석은 다음과 같습니다.
Introduction
역학 및 임상 연구에 따르면 폐경 후 여성은 폐경 전 여성1,2보다심혈관 질환의 위험이 상당히 더 큽에 있는 것으로 나타났습니다. 호르몬 대체 요법 (HRT)는 심혈 관 질환의 상대적 위험을0.37-0.79 3으로 줄일 수 있습니다. 다른 합병증 중, 심혈 관 질환에 의해 발생 하는동맥 경화 는 전세계 사망의 주요 원인 4. 그러나, 에스트로겐 결핍 마우스 를 제시 하는 동맥 경화 경향이 상태를 포함 하는 실험실 모델 부족. 이 프로토콜은 폐경 후 심혈관 기능 장애의 외인성 에스트로겐 치료를 스크리닝하기 위한 생체 내 에스트로겐 결핍 마우스 모델을 제공한다.
이전 연구는 높은 콜레스테롤 식단을 공급 죽상 경화성 설치류에 OVX의 적용이 동맥 경화증으로 고통받는 폐경후 여성을 모방 할 수 있음을 보여 5,6,7,8. 갱년기 여성의 죽상 경화성 상태를 닮은 재현 가능하고 편리한 동물 모델은 외인성 에스트로겐 연구의 기초입니다. 여기서, 양측 난소 절제술의 이중 등쪽-측각절개는 동맥경화-경향이 있는 아포리포프로테인 E 녹아웃(apoE-/-) 마우스9,10에적용하였다. 중간 복부 또는 등측 절개에 비해, 이중 등측 절개는 심한 복강 접착 및 염증을 피할 수있는 쉽고 적은 시간 소모적 인 방법입니다. 헤이즐넛 스프레드를 통한 항포랄 투여(재료 표참조)는 비침습적이고 편리하며, 장기 투여모드(11)로서널리 적용가능하다. 느린 방출 펠릿 이식도인기 6. 그러나, 임플란트는 OVX를 행한 마우스에서 특히 감염의 부각을 악화시킬 수 있습니다. 다른 비침습적 투여 모드, 예: 경구 관장 및 물 관리, 또한 많은 단점이 있다. 경구 관자는 전형적으로 마우스를 강조하고 식도 상해를 일으키는 원인이 될 수 있습니다. 마시는 물을 통해 호르몬을 관리 하는 것은 매우 도움이; 그러나 외인성 에스트로겐이 물에 불용성이기 때문에 유화제로서 DMSO를 첨가하는 것은 불가피합니다. 여기에서, 우리는 장기 적인 관리를 위한 헤이즐넛 퍼짐을 통해 peroral 17β-estradiol 또는 식물성 에스트로겐 호르몬 보충을 선택했습니다.
최근, 폐경 후 여성의 심혈관 시스템에 대한 HRT의 유익한 효과는 여성 건강 이니셔티브(WHI) 시험12에서논란이 되고 있다. 한편으로는 외인성 에스트로겐만으로도 심혈관 시스템에 유익한 효과를 발휘합니다. 다른 한편으로는, 그것은 심혈 관 이벤트의 위험을 증가 하는 metohydroxyproge스테론 아세테이트와 결합 할 수 있습니다. 더 심각하게, HRT는 유방과 자궁 종양 진행으로 이끌어 낼 수 있고, 이 효력은 그것의 사용13,14를현저하게 제한했습니다. 종양 세포 에서 유사 분열 활성이 결여된 외인성 에스트로겐의 심혈관 보호 효과에 더 많은 관심이 집중되고있다 15,16,17. 인간과 동물에 있는 다중 연구 결과는 에스트로겐과 유사한 구조물을 가진 식물성 에스트로겐이 심장 혈관 보호에 있는 유익한 역할을 할 수 있다는 것을 건의합니다15,18.
따라서, 본 작업의 목적은 (i) 양자 간 난소 절제에 의한 생체 내 에스트로겐 결핍 마우스 모델을 apoE-/- 마우스에서 이중 등측 절개를 통해 구축하고 (ii) 심혈관 보호 효과를 perorally비교하는 것이다. 헤이즐넛 스프레드를 통해 17β-estradiol 및 슈도 프로토 디오신 (PPD)을 투여. 17β-estradiol은 여성 성 호르몬6,11,19에속하는 외인성 에스트로겐의 한 종류이다. DIOSCOREA 식물에서 스테로이드 사포닌 및 식물에스트로겐인 PPD는, 이전에 항종양 성질을 발휘하기 위해 보고되었다20.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기에서 기술된 방법론은 갱년기 여자에서 보인 지질 중단 및 동맥 경화증을 닮은 마우스 모형입니다. 그것은 잘 문서화 된 폐 경 후 여성에서 에스트로겐 결핍 점진적으로 복잡 하 고 광범위 한 동맥 경화 병 변기존의 또는 지속적인콜레스테롤 혈 증의 발생률을 악화 시킬 수 있습니다 1. 클리닉에서 동맥경화증이 발생하기 쉬운 상태를 모방하기 위해, 아포에결핍 마우스, 아테…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 중국 국립 자연 과학 재단 (81202526 에 J.X.), 중국 국립 자연 과학 재단 (81302769 – B.S.), 베이징 시 자연 과학 재단 (47144226 – B.S.), 중국 박사 학위에 의해 지원되었습니다. 과학재단(20110490325 ~ J.X.), 중국교육부 박사과정 재단(2011106120031 ~B.S.)
Materials
| 17β-estradiol, >98% | Sigma-Aldrich | E8875-250MG | Estrogen |
| Disposable syringes (with 25G needles) | Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd | 0.5*19TWLB | Cardiac bleeding |
| High-cholesterol mouse diet | Huafukang Bio-Technology | N/A | 1.25% cholesterol, 0% cholate |
| High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System | VisualSonics | Vevo®770 | Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction |
| 2-Methyl-2-butanol | Sigma-Aldrich | 152463-250ML | Preparation of avertin |
| Micro Dissecting forceps, Curved 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Micro Dissecting forceps, Straight 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Monofilament suture 4-0 1/2 5*12 19mm | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd | R413 | Suture and ligation of the tissues |
| Nut cream (Nutella) | Ferrero | N/A | Medium for peroral 17β-estradiol or PPD |
| OptiVisor optical glass binocular magnifier | Dohegan Optical Company Inc. | N/A | Assistant of identifying the tissues during ovariectomy |
| Phosphate-buffered saline at pH 7.4 | SIGMA | P3813 | Preparing 1 L saline |
| Pro MultiLabel Microplate Reader | Tecan | Infinite M1000 | Plasma TC and TG determination |
| Pseudoprotodioscin | Shanghai Winherb Medical S & T Development | W-0427 | CAS registry no. 102115-79-7 |
| Rimadyl, 50 mg/mL | Pfizer Pharma GmbH | 462986 | Postoperative analgesia after ovariectomy |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547-1L | Dissolving the 17β-estradiol or PPD |
| Solcoseryl Eye-Gel | Menarini, Solco Basle Ltd. | Eye protection during anesthesia | |
| Stereo microscope | MCALON | MCL-6STV | Image of the intimal region of aorta |
| Table model high speed centrifuge | SIGMA | 1-14K | Preparation of plasma |
| Scissors, slight Curve (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Scissors, straight Flat (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Tissue forceps, serrated, slight Curve (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Tissue forceps, serrated, straight Flat (14cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Tribromoethanol | Sigma-Aldrich | T48402-5G | Preparation of avertin |
| Triglycerides (TG) assay kit | Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering | A110-1 | Plasma TG determination |
| Total cholesterols (TC) assay kit | Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering | A111-1 | Plasma TC determination |
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