يوضح هذا البروتوكول منهجيات نموذج الماوس لإصابة الدماغ الصادمة في الجمجمة المفتوحة وزرع الخلايا المستزرعة المتعددة القوى في الخلايا الجذعية المتعددة القوى في موقع الإصابة. كما يتم وصف الاختبارات السلوكية والأنسجة لنتائج هذه الإجراءات باختصار.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج تأثير القشرية الخاضعة للرقابة لإصابة الدماغ الماوس مع زرع العلاجية من الخلايا العصبية المستمدة من الخلايا الجذعية المتعددة القوى التي يسببها الإنسان
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
إصابات الدماغ الصادمة (TBI) هي السبب الرئيسي للاعتلال والوفيات في جميع أنحاء العالم. علم الأمراض بسبب TBI يتطور من الإهانة الميكانيكية الأولية لعمليات الإصابة الثانوية، بما في ذلك المبرمج والالتهاب. وقد كان النمذجة الحيوانية قيمة في البحث عن آليات الإصابة وتقييم العلاجات العصبية الوقائية المحتملة. يصف هذا البروتوكول نموذج التأثير القشري الخاضع للرقابة (CCI) لـ TBI البؤري المفتوح الرأس. وعلى وجه التحديد، يتم وصف المعلمات لإنتاج إصابة القشرية من جانب واحد خفيفة. يتم تحليل العواقب السلوكية للغرفة باستخدام اختبار إزالة شريط لاصق من التكامل الحسي الثنائي. فيما يتعلق بالعلاج التجريبي لعلم الأمراض TBI، يوضح هذا البروتوكول أيضا عملية لزرع الخلايا المستزرعة في الدماغ. تم اختيار ثقافات الخلايا العصبية المستمدة من الخلايا الجذعية متعددة القوى التي يسببها الإنسان (hiPSCs) لقدرتها على إظهار استعادة وظيفية متفوقة في المرضى TBI الإنسان. يتم الكشف عن البقاء على قيد الحياة المزمن من hiPSCs في أنسجة الدماغ الماوس المضيف باستخدام عملية المناعة DAB المعدلة.
المقدمة
إصابة الدماغ الصادمة (TBI) هو مصطلح عام للإصابة المكتسبة في الدماغ بسبب إما القوى الميكانيكية غير المباشرة (تسارع الدوران / التباطؤ أو العكس الانقلاب) من ضربات على الرأس أو ضرر مباشر من الأجسام أو موجات الانفجار. وقد قُدِّر أن هذه الظاهرة هي السبب في حوالي 9 في المائة من الوفيات في جميع أنحاء العالم، وقد لوحظت في ما يقدر بنحو 50 مليون حالة في السنة1و2. وقدر تقرير صدر في عام 2017 عن مراكز مكافحة الأمراض والوقاية منها أنه في عام 2013، كان هناك ما مجموعه 2.8 مليون زيارة ووفاة في المستشفيات بسبب TBI في الولايات المتحدة3. ولا يتم الإبلاغ عن العديد من التّبع السل الأكثر اعتدالاً كل عام. TBI خ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد استعرضت لجنة الرعاية والاستخدام الحيوانية التابعة لجامعة الخدمات النظامية جميع التجارب الموصوفة في هذا البروتوكول ووافقت عليها.
1. استئصال الجمجمة وتأثير القشرية الخاضعة للرقابة
- إعداد جهاز التأثير القشري الخاضع للرقابة واللوازم الجراحية.
- تحميل 1 مل زلة طرف حقنة مع 0.5 مل من المالحة المعقمة لري الجرح. إرفاق إبرة 25 G إلى حقنة للسيطرة على الري.
- إعداد محلول مخفف من CsA في DMSO إلى التركيز النهائي من 1 ملغ / مل. قم بتحميل حقنة ثانية بطرف 1 مل مع 0.5 مل من السيكلوسبورين A (CsA) الحل لقمع المناعة. إرفاق إبرة 25 G أو أكبر إلى حقنة CsA.
- قم بإرفاق مكبس الصدمات القشرية الخاضع للرقابة بذراع على إطار مجسم ومج....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تسهل جراحة استئصال الجمجمة إصابة الدماغ التجريبية وزرع الخلايا العلاجية: يتطلب نموذج التأثير القشري الخاضع للرقابة لإصابة الدماغ والعلاج اللاحق لزراعة الخلايا إزالة دقيقة للجمجمة المنضوية. يمكن إجراء استئصال الجمجمة على أي سطح الظهر من الجمجمة للسماح بالتلاعب إلى منطقة الدماغ ذات الاهتمام. يصور الرسم التخطيطي في الشكل 1 مخطط استئصال الجمجمة قطره 5 مم للكشف عن القشريات الحسية الجسدية والحركية الأولية (الشكل1ألف). في 24 ح بعد استئ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
CCI خفيفة كنظام نموذجي لاختبار العلاج التجديدي التجريبي
نموذج CCI هو أداة قيمة للتحقيق في آليات اختلال وظائف الأنسجة بعد الإصابة الميكانيكية في القشرة. قابلية المعلمات الإصابة هي سمة جذابة من هذا النموذج. تغيير عمق Z من التأثير، وسرعة، أو وقت يسكن يمكن أن تزيد أو تقلل من شدة الإصابة على النحو المطلوب من قبل المحقق10،25. نموذج CCI خفيفة من إصابة الدماغ الملتوية, عندما أجريت بشكل صحيح, ينبغي أن يسبب موت الخلايا القشرية متواضعة والحد الأدنى من ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ أي تضارب في المصالح للكشف عنها.
شكر وتقدير
وقد تم دعم هذا العمل بمنحة من مركز علم الأعصاب والطب التجديدي (CNRM، رقم المنحة G170244014). ونحن نقدر مساعدة ماهيما ديوان وكلارا سيلبريد في الدراسات التجريبية إزالة لاصقة. أجرى كريسلين رادومسكي إصابات أولية في الدماغ وعمليات زرع خلايا. قدمت أماندا فو ولورا تاكر من مختبر الدراسات الأساسية للدراسات ما قبل السريرية في جامعة الولايات المتحدة الوطنية للدراسات ما قبل السريرية نصائح قيمة حول العمليات الجراحية الحيوانية واختبار السلوك، على التوالي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1 مل محاقن | بيكتون ديكنسون (BD) | ؛ 309659 | |
| 1.7 مل أنابيب اختبار فليب توب Denville | C2170 | ||
| 10 حقنة ميكرولتر | هاميلتون | 7635-01 | |
| 25G إبر حقنة انزلاقية دقيقة | Becton Dickinson (BD) | ؛ 305122 | |
| 70٪ إيثانول | المنتج المفضل ؛ يختلف حسب المنطقة | ||
| تعليق الأسيتامينوفين عن طريق الفم | تايلينول (للأطفال) | مخفف إلى 1 مجم / مل في | |
| مبخر مخدر | Vetland | 521-11-22 | |
| قماش | شراء من متجر | ||
| Betadine | Purdue Products | NDC-67618-151-32 | |
| الأكسجين | المنتج المفضل ؛ يختلف حسب المنطقة | ||
| سيكلوسبورين A | Sigma-Aldrich | 30024-100mg | |
| DAB طقم تلطيخ | مختبرات ناقلات | SK-4100 | |
| ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) | سيجما ألدريتش | D8418-500 مل | |
| DMEM | Invitrogen (ThermoFisher) | A14430-01 | |
| الحمار المضاد للفأر الجسم المضاد IgG ، HRP المترافق | Jackson ImmunoResearch | 715-035-151 | |
| الشريط الكهربائي | 3M Corporation | الشراء من الملقط | |
| الناعم | متعدد الأقسام أدوات العلوم الدقيقة | 11254-20 | |
| ملقط | أدوات العلوم الدقيقة | 91106-12 | |
| ماصات شعرية زجاجية ، 1 مم OD ، معرف 0.58 مم | أدوات الدقة العالمية | 1B100F-3 | |
| طقم المحركات الدقيقة الدوارة عالية السرعة | Foredom Electric Co. | K.1070 - K.107018 | |
| مجموعة مثالية من 5 | نقاط خلية علمية & nbsp ؛ | 60-1000 | |
| تجسيمي ل CCI & nbsp ؛ | Leica Biosystems | 39463920 | |
| isoflurane | Baxter | NDC-10019-360-60 | |
| مؤقتات مقاعد البدلاء | المختبرية Fisher Scientific | 14-649-17 | |
| مجتذب Micropipette | Instruments، Inc. | PMP-102 | أي مجتذب سوف يكفي |
| زلات غطاء المجهر | Fisherbrand | 12-545-E | |
| المجهر شريحة تركيب متوسط | المنتج من اختيار | ||
| المرآة | شراء من متجر متعدد الأقسام | ||
| الماوس المضاد للإنسان المستضد النووي الأجسام المضادة | Millipore | MAB1281 | |
| الماوس على الماوس حجب كيت | ناقلات مختبرات | BMK-2202 | |
| حامل إبرة hemostat | أدوات العلوم الدقيقة | 12002-12 | |
| مرهم العيون | Falcon Pharmaceuticals | NDC-61314-631-36 | |
| مقص زنبركي للعيون | أدوات العلوم الدقيقة | 15018-10 | |
| صندوق | الشراء من متجر متعدد الأقسام | ||
| اسطوانة | الشراء من متجر متعدد الأقسام | ||
| QSI مضخة حقنة آلية | Stoelting | 53311 | |
| ضغط إبرة قابلة للإزالة | هاميلتون | 55750-01 | |
| إطار تجسيمي صغير للقوارض | Stoelting | 51925 | |
| مقص صغير | أدوات العلوم | الدقيقة 14060-09 | |
| StemPro Accutase | Invitrogen (ThermoFisher) | A1110501 | |
| ضمادات تحضير الكحول المعقمة | Fisherbrand | 06-669-62 | |
| مسحات قطنية معقمة / Kendall Q-tips | Tyco Healthcare | 540500 | |
| Extile | Saline Hospira | NDC-0409-1966-07 | |
| ساعات توقيت (2) | فيشر ساينتفيك | 06-662-56 | |
| شرائح مجهر Superfrost Plus | Gold Fisherbrand | 15-188-48 | |
| خيوط خيوط - 5.0 حرير بإبرة منحنية | Oasis | MV-682 |
المراجع
- Maas, A. I. R., et al. Traumatic brain injury: integrated approaches to improve prevention, clinical care, and research. The Lancet Neurology. 16, 987-1048 (2017).
- Murray, C. J., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
