التنبيب المتكرر للأوتراكشفاء في الفئران
Summary
الهدف من هذه المقالة هو وصف طريقة مكررة من تنبيب فأرالمختبر. هذه الطريقة غير الغازية ، وبالتالي ، مثالية للدراسات التي تتطلب الرصد التسلسلي لوظيفة الجهاز التنفسي و / أو غرس العلاجات في الرئة.
Abstract
يصف الأدب عدة طرق لتنبيب الماوس التي تتطلب إما تصور الجلاوطي من خلال تجويف الفم أو شق في الرقبة البطنية لتأكيد مباشر لوضع قنية في القصبة الهوائية. ويمكن أن تشكل الصعوبة النسبية أو صدمة الأنسجة الناجمة عن هذه الإجراءات عائقاً أمام قدرة المحقق على إجراء دراسات طولية. توضح هذه المقالة تقنية يسمح فيها التلاعب الجسدي للفأرة بعد استخدام مزيل الشعر لإزالة الشعر من الرقبة البطنية بالتصور عبر الجلد للالقصبة الهوائية لتنبيب الأوروتراكفيل بغض النظر عن درجة الجلد تصبغ. هذه الطريقة غير ضارة بالموضوع وتتحقق بسهولة مع فهم محدود لتشريح المورين. يسهل هذا النهج المكرر التنبيب المتكرر ، والذي قد يكون ضروريًا لمراقبة تطور المرض أو غرس العلاجات. قد يؤدي استخدام هذه الطريقة إلى تقليل عدد الحيوانات والمهارة التقنية اللازمة لقياس وظائف الرئة في نماذج الماوس من أمراض الجهاز التنفسي.
Introduction
فأر المختبر هو نموذج الحيوان المشترك لأمراض الجهاز التنفسي البشرية. وهكذا ، هناك العديد من الطرق المنشورة لتنبيب الماوس لغرض غرس العلاجات وقياس ميكانيكا الجهاز التنفسي. معظم الإجراءات الموصوفة تتطلب تصور الجلاوطي من خلال تجويف الفم مع معدات متخصصة مثل منظار الحنجرة أو مصدر ضوء الألياف البصرية1،2، 3،,4،5،6،7.3 ومع ذلك ، يمكن أن يكون هذا صعبًا عندما تكون هناك حاجة إلى قنية كبيرة نسبيًا ، لأنها يمكن أن تحجب وجهة نظر الباحث. وقد عالج ليمجونياوونغ وآخرون8 هذا القلق بطريقة التنبيب التي يتم فيها إجراء شق جلدي صغير على طول خط الوسط في الرقبة البطنية مما يسمح بتصور القصبة الهوائية. بعد الإجراء ، يتم إغلاق الشق بلاصق للأنسجة.
بالنسبة للدراسات التي تتطلب عمليات تنبيب متكررة ، يتطلب التقطيع والإغلاق المتتالي لهذا الموقع إزالة الهوامش الجلدية وصدمة الأنسجة إلى الرقبة البطنية. الغرض من نهج تصور التراشف التراجيدي عبر الجلد للتنبيب عن طريق الفم هو توفير تقنية مكررة وغير باضعة مناسبة خصيصًا لدراسات التنبيب المتكررة وكذلك أحداث تنبيب واحد في الفئران.
Protocol
Representative Results
Discussion
التنبيب باستخدام تقنية التصور تراكل عبر الجلد يقدم نهجا المكرر لطريقة شق الجلد القياسية. مع إيلاء اهتمام خاص لعدة خطوات رئيسية، يمكن أن يتحقق التنبيب بسهولة وبسرعة. يجب وضع الحيوان مباشرة في الردورة الظهرية على منصة التنبيب مع الماوس المضمون في تراجع لطيف. وهذا سوف تمتد الحيوان إلى محاذا?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
يشكر المؤلفون لوسيا روساس ولورين دوليتل وليزا جوزيف وليندسي فيرغسون على مساعدتهم التقنية ومختبر الجامعة للموارد الحيوانية لدعمهم لرعاية الحيوانات. يتم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد القومية للصحة T35OD010977 وR01-HL102469.
Materials
| 18Gx1 1/4" intravenous catheter, Safelet | Fisher Scientific | #14-841-14 | Cannula for intubation |
| 70% ethanol, 10L | Fisher Scientific | 25467025 | Cleaning cannula |
| Abrasive paper (sandpaper) | Porter-Cable | 74001201 | Cannula preparation |
| AnaSed (xylazine sterile solution) injection (100 mg/ml) | Akorn Animal Health | NDC# 59399-111-50 | Anesthesia |
| Blue labeling tape (0.5 in x 14 yds) | Fisher Scientific | 15966 | Restraint on intubation platform |
| Braided silk suture without needle, nonsterile, (3-0) | Henry Schein | Item #1007842 | Intubation platform |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | Mouse thermoregulation and recovery |
| Deltaphase Operating Board | Braintree Scientific | 39OP | Mouse recovery (prior to extubation) |
| Distilled water | ThermoFisher | 15230253 | Cleaning mouse following depilation |
| Eye Scissors, angled, sharp/sharp | Harvard Apparatus | 72-8437 | Cannula preparation |
| FlexiVent (FX Module 2) | Scireq | N/A | Record lung function data (not required to perform procedure, used in this study to validate procedure) |
| Gauze sponges | Fisher scientific | 13-761-52 | Hair removal |
| Heavy-Duty 3" 3-Ring View Binders | Staples | 24690CT | Intubation platform |
| Instat Software | Graphpad | N/A | Statistical analysis software |
| Insulin syringe (0.5 cc, U100) | Fisher Scientific | 329461 | Anesthesia administration |
| Ketamine HCl Injection, USP (100 mg/ml) | Llyod Laoratories | List No. 4871 | Anesthesia |
| Lung inflation bulb | Harvard Apparatus | 72-9083 | Confirm cannula placement |
| Micro Forceps, Curved, Smooth | Harvard Apparatus | 72-0445 | Retract tongue and create tension on neck for cannula visualization |
| Nair (hair removal lotion), 9 oz bottle | Church & Dwight | 42010440 | Hair removal |
| Sterile saline (0.9%), 10 ml | Fisher Scientific | NC9054335 | Anesthesia, cleaning skin following hair removal |
References
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory Animals. 41 (1), 128-135 (2007).
- Rivera, B., Miller, S. R., Brown, E. M., Price, R. E. A Novel Method for Endotracheal Intubation of Mice and Rats Used in Imaging Studies. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (2), 52-55 (2005).
- Sparrowe, J., Jimenez, M., Rullas, J., Martinez, A. E., Ferrer, S. Refined Intratracheal Intubation Technique in the Mouse, Complete Protocol Description for Lower Airway Models. Global Journal of Animal Scientific Research. 3 (2), 363-369 (2015).
- Deyo, D. J., Wei, J. A Novel Method of Intubation and Ventilation in Mice. Anesthesia & Analgesia. 88 (2), 179 (1999).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 8 (3), 103-106 (2004).
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. Journal of Applied Physiology. 87 (6), 2362-2365 (1999).
- Das, S., MacDonald, K., Chang, H. S., Mitzner, W. A Simple Method of Mouse Lung Intubation. Journal of Visualized Experiments. (73), e50318 (2013).
- Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. Journal of Visualized Experiments. (102), e52964 (2015).
- Qin, W., Baran, U., Wang, W. Lymphatic response to depilation-induced inflammation assessed with label-free optical lymphangiography. Lasers in Surgery and Medicine. 47 (8), 669-676 (2015).
- McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique. Journal of Visualized Experiments. (75), e50107 (2013).
