Intubación orotraqueal repetida en ratones
Summary
El objetivo de este artículo es describir un método refinado de intubación del ratón de laboratorio. El método no es invasivo y, por lo tanto, ideal para estudios que requieren monitorización en serie de la función respiratoria y/o inscripción de tratamientos en el pulmón.
Abstract
La literatura describe varios métodos para la intubación del ratón que requieren la visualización de la glotis a través de la cavidad oral o la incisión en el cuello ventral para la confirmación directa de la colocación de cánulas en la tráquea. La dificultad relativa o el trauma tisular inducido al sujeto por tales procedimientos puede ser un impedimento para la capacidad de un investigador para realizar estudios longitudinales. Este artículo ilustra una técnica en la que la manipulación física del ratón después del uso de un depilatorio para eliminar el vello del cuello ventral permite la visualización transcutánea de la tráquea para la intubación orotraqueal independientemente del grado de piel Pigmentación. Este método es inocuo para el sujeto y se logra fácilmente con una comprensión limitada de la anatomía murina. Este enfoque refinado facilita la intubación repetida, que puede ser necesaria para controlar la progresión de la enfermedad o la instilación de los tratamientos. El uso de este método puede resultar en una reducción del número de animales y la habilidad técnica necesaria para medir la función pulmonar en modelos de ratón de enfermedad respiratoria.
Introduction
El ratón de laboratorio es un modelo animal común para las enfermedades respiratorias humanas. Por lo tanto, existen varios métodos publicados para la intubación de ratones con el fin tanto de instanición de tratamientos y medición de la mecánica respiratoria. La mayoría de los procedimientos descritos requieren la visualización de la glotis a través de la cavidad oral con equipos especializados como un laringoscopio o fuente de luz de fibra óptica1,2,3,4,5,6,7. Sin embargo, esto puede ser difícil cuando se requiere una cánula relativamente grande, ya que puede oscurecer la visión del investigador. 8 han abordado esta preocupación con un método de intubación en el que se realiza una pequeña incisión cutánea a lo largo de la línea media del cuello ventral que permite la visualización de la tráquea. Después del procedimiento, la incisión se cierra con adhesivo tisular.
Para los estudios que requieren intubaciones repetidas frecuentes, la incisación sucesiva y el cierre de este sitio requiere el desbridamiento de los márgenes de la piel y traumatismos tisulares en el cuello ventral. El propósito del enfoque de visualización traqueal transcutánea a la intubación oral es proporcionar una técnica refinada y no invasiva específicamente adecuada para estudios de intubación repetida, así como eventos de intubación individual en ratones.
Protocol
Representative Results
Discussion
La intubación mediante la técnica de visualización traqueal transcutánea ofrece un enfoque refinado al método de incisión cutánea estándar. Con especial atención a varios pasos clave, la intubación se puede lograr fácil y rápidamente. El animal debe colocarse directamente en la reclinación dorsal en la plataforma de intubación con el ratón asegurado en una suave retracción. Esto extenderá al animal en la alineación vertical y el posicionamiento adecuado para la intubación. Además, la crema depilatoria…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores agradecen a Lucia Rosas, Lauren Doolittle, Lisa Joseph y Lindsey Ferguson por su asistencia técnica y el Laboratorio Universitario de Recursos Animales por su apoyo al cuidado animal. Este trabajo está financiado por NIH T35OD010977 y R01-HL102469.
Materials
| 18Gx1 1/4" intravenous catheter, Safelet | Fisher Scientific | #14-841-14 | Cannula for intubation |
| 70% ethanol, 10L | Fisher Scientific | 25467025 | Cleaning cannula |
| Abrasive paper (sandpaper) | Porter-Cable | 74001201 | Cannula preparation |
| AnaSed (xylazine sterile solution) injection (100 mg/ml) | Akorn Animal Health | NDC# 59399-111-50 | Anesthesia |
| Blue labeling tape (0.5 in x 14 yds) | Fisher Scientific | 15966 | Restraint on intubation platform |
| Braided silk suture without needle, nonsterile, (3-0) | Henry Schein | Item #1007842 | Intubation platform |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | Mouse thermoregulation and recovery |
| Deltaphase Operating Board | Braintree Scientific | 39OP | Mouse recovery (prior to extubation) |
| Distilled water | ThermoFisher | 15230253 | Cleaning mouse following depilation |
| Eye Scissors, angled, sharp/sharp | Harvard Apparatus | 72-8437 | Cannula preparation |
| FlexiVent (FX Module 2) | Scireq | N/A | Record lung function data (not required to perform procedure, used in this study to validate procedure) |
| Gauze sponges | Fisher scientific | 13-761-52 | Hair removal |
| Heavy-Duty 3" 3-Ring View Binders | Staples | 24690CT | Intubation platform |
| Instat Software | Graphpad | N/A | Statistical analysis software |
| Insulin syringe (0.5 cc, U100) | Fisher Scientific | 329461 | Anesthesia administration |
| Ketamine HCl Injection, USP (100 mg/ml) | Llyod Laoratories | List No. 4871 | Anesthesia |
| Lung inflation bulb | Harvard Apparatus | 72-9083 | Confirm cannula placement |
| Micro Forceps, Curved, Smooth | Harvard Apparatus | 72-0445 | Retract tongue and create tension on neck for cannula visualization |
| Nair (hair removal lotion), 9 oz bottle | Church & Dwight | 42010440 | Hair removal |
| Sterile saline (0.9%), 10 ml | Fisher Scientific | NC9054335 | Anesthesia, cleaning skin following hair removal |
References
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