Summary
Målet med denne artikel er at beskrive en raffineret metode til intubation af laboratoriemusen. Metoden er noninvasive og derfor ideel til undersøgelser, der kræver seriel overvågning af respiratorisk funktion og/ eller inddrypning af behandlinger i lungerne.
Abstract
Litteraturen beskriver flere metoder til museintubation, der enten kræver visualisering af glottis gennem mundhulen eller indsnit i ventralhalsen for direkte bekræftelse af kanyle placering i luftrøret. Den relative vanskelighed eller væv traumer induceret til emnet ved sådanne procedurer kan være en hindring for en investigators evne til at udføre langsgående undersøgelser. Denne artikel illustrerer en teknik, hvor fysisk manipulation af musen efter brug af en hårfjerning til at fjerne hår fra ventrale hals tillader transkutan visualisering af luftrøret for orotracheal intubation uanset grad af hud Pigmentering. Denne metode er uskadelig for emnet og let opnås med en begrænset forståelse af murine anatomi. Denne raffinerede fremgangsmåde letter gentagen intubation, som kan være nødvendig for at overvåge udviklingen af sygdom eller inddrypning af behandlinger. Ved hjælp af denne metode kan resultere i en reduktion af antallet af dyr og tekniske færdigheder, der kræves for at måle lungefunktion i musemodeller af luftvejssygdomme.
Introduction
Laboratoriemusen er en almindelig dyremodel for luftvejssygdomme hos mennesker. Således er der flere offentliggjorte metoder til museintubation med henblik på både inddrypning af behandlinger og måling af respiratoriske mekanik. De fleste af de beskrevne procedurer kræver visualisering af glottis gennem mundhulen med specialiseret udstyr såsom laryngoscope eller fiberoptisk lyskilde1,2,3,4,5,6,7. Dette kan dog være svært, når en relativt stor kanyle er påkrævet, da det kan skjule forskerens opfattelse. Limjunyawong et al.8 har behandlet denne bekymring med en metode til intubation, hvor en lille kutan snit er lavet langs midterlinjen af ventrale hals giver mulighed for visualisering af luftrøret. Efter proceduren lukkes snittet med vævsklæbemiddel.
For undersøgelser, der kræver hyppige gentagne intubationer, successive indsnit og lukning af dette websted kræver debridering af hudens margener og væv traumer til ventrale hals. Formålet med den transkutane trakeal visualisering tilgang til oral intubation er at give en raffineret, noninvasive teknik specielt egnet til gentagne intubation undersøgelser samt enkelt intubation begivenheder hos mus.
Protocol
Representative Results
Discussion
Intubation ved hjælp af den transkutane trakeal visualisering teknik tilbyder en raffineret tilgang til standard hud indsnit metode. Med særlig vægt på flere vigtige trin, kan intubation nemt og hurtigt opnås. Dyret skal placeres helt og holdent i rygrecumbency på intubationsplatformen med musen fastgjort i skånsom tilbagetrækning. Dette vil udvide dyret i lodret justering og korrekt positionering til intubation. Desuden bør hårfjerningscremen ikke forblive i kontakt med dyrets hud i længere tid end 30−45 se…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne takker Lucia Rosas, Lauren Doolittle, Lisa Joseph og Lindsey Ferguson for deres tekniske bistand og University Laboratory Animal Resources for deres dyrepleje støtte. Dette arbejde er finansieret af NIH T35OD010977 og R01-HL102469.
Materials
| 18Gx1 1/4" intravenous catheter, Safelet | Fisher Scientific | #14-841-14 | Cannula for intubation |
| 70% ethanol, 10L | Fisher Scientific | 25467025 | Cleaning cannula |
| Abrasive paper (sandpaper) | Porter-Cable | 74001201 | Cannula preparation |
| AnaSed (xylazine sterile solution) injection (100 mg/ml) | Akorn Animal Health | NDC# 59399-111-50 | Anesthesia |
| Blue labeling tape (0.5 in x 14 yds) | Fisher Scientific | 15966 | Restraint on intubation platform |
| Braided silk suture without needle, nonsterile, (3-0) | Henry Schein | Item #1007842 | Intubation platform |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | Mouse thermoregulation and recovery |
| Deltaphase Operating Board | Braintree Scientific | 39OP | Mouse recovery (prior to extubation) |
| Distilled water | ThermoFisher | 15230253 | Cleaning mouse following depilation |
| Eye Scissors, angled, sharp/sharp | Harvard Apparatus | 72-8437 | Cannula preparation |
| FlexiVent (FX Module 2) | Scireq | N/A | Record lung function data (not required to perform procedure, used in this study to validate procedure) |
| Gauze sponges | Fisher scientific | 13-761-52 | Hair removal |
| Heavy-Duty 3" 3-Ring View Binders | Staples | 24690CT | Intubation platform |
| Instat Software | Graphpad | N/A | Statistical analysis software |
| Insulin syringe (0.5 cc, U100) | Fisher Scientific | 329461 | Anesthesia administration |
| Ketamine HCl Injection, USP (100 mg/ml) | Llyod Laoratories | List No. 4871 | Anesthesia |
| Lung inflation bulb | Harvard Apparatus | 72-9083 | Confirm cannula placement |
| Micro Forceps, Curved, Smooth | Harvard Apparatus | 72-0445 | Retract tongue and create tension on neck for cannula visualization |
| Nair (hair removal lotion), 9 oz bottle | Church & Dwight | 42010440 | Hair removal |
| Sterile saline (0.9%), 10 ml | Fisher Scientific | NC9054335 | Anesthesia, cleaning skin following hair removal |
References
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory Animals. 41 (1), 128-135 (2007).
- Rivera, B., Miller, S. R., Brown, E. M., Price, R. E. A Novel Method for Endotracheal Intubation of Mice and Rats Used in Imaging Studies. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (2), 52-55 (2005).
- Sparrowe, J., Jimenez, M., Rullas, J., Martinez, A. E., Ferrer, S. Refined Intratracheal Intubation Technique in the Mouse, Complete Protocol Description for Lower Airway Models. Global Journal of Animal Scientific Research. 3 (2), 363-369 (2015).
- Deyo, D. J., Wei, J. A Novel Method of Intubation and Ventilation in Mice. Anesthesia & Analgesia. 88 (2), 179 (1999).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 8 (3), 103-106 (2004).
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. Journal of Applied Physiology. 87 (6), 2362-2365 (1999).
- Das, S., MacDonald, K., Chang, H. S., Mitzner, W. A Simple Method of Mouse Lung Intubation. Journal of Visualized Experiments. (73), e50318 (2013).
- Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. Journal of Visualized Experiments. (102), e52964 (2015).
- Qin, W., Baran, U., Wang, W. Lymphatic response to depilation-induced inflammation assessed with label-free optical lymphangiography. Lasers in Surgery and Medicine. 47 (8), 669-676 (2015).
- McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique. Journal of Visualized Experiments. (75), e50107 (2013).
