Upprepad Orotracheal Intubation hos möss
Summary
Målet med denna artikel är att beskriva en raffinerad metod för intubation av laboratoriemusen. Metoden är noninvasive och därför idealisk för studier som kräver seriell övervakning av andningsfunktion och/eller instillation av behandlingar i lungan.
Abstract
Litteraturen beskriver flera metoder för mus intubation som antingen kräver visualisering av glottis genom munhålan eller snitt i ventrala halsen för direkt bekräftelse av kanyl placering i luftstrupen. Den relativa svårigheten eller vävnadstrauma som orsakas av sådana förfaranden kan vara ett hinder för en prövares förmåga att utföra longitudinella studier. Denna artikel illustrerar en teknik där fysisk manipulering av musen efter användning av en hårborttagning för att ta bort hår från den ventrala halsen tillåter transkutan visualisering av luftstrupen för orotracheal intubation oavsett grad av hud Pigmentering. Denna metod är ofarlig för ämnet och lätt uppnås med en begränsad förståelse av murine anatomi. Detta förfinade tillvägagångssätt underlättar upprepad intubation, vilket kan vara nödvändigt för att övervaka sjukdomsprogression eller instillation av behandlingar. Med hjälp av denna metod kan resultera i en minskning av antalet djur och teknisk skicklighet som krävs för att mäta lungfunktion i musmodeller av luftvägssjukdom.
Introduction
Laboratoriemusen är en vanlig djurmodell för sjukdomar i människans luftvägssjukdom. Således finns det flera publicerade metoder för mus intubation för både instillation av behandlingar och mätning av andningsmekanik. De flesta av de beskrivna förfarandena kräver visualisering av glottis genom munhålan med specialiserad utrustning såsom laryngoskop eller fiberoptisk ljuskälla1,2,3,4,5,6,7. Detta kan dock vara svårt när en relativt stor kanyl krävs, eftersom det kan skymma forskarens syn. Limjunyawong et al.8 har tagit upp denna oro med en metod för intubation där en liten testning snitt görs längs mittlinjen av ventrala halsen möjliggör visualisering av luftstrupen. Efter proceduren är snittet stängt med vävnadslim.
För studier som kräver frekventa upprepade intubations, kräver successiv inkubation och stängning av denna webbplats debridement av hudmarginalerna och vävnadstrauma till ventrala halsen. Syftet med den transkutana trakeal visualiseringsmetoden för oral intubation är att tillhandahålla en raffinerad, noninvasive teknik som är särskilt lämplig för upprepade intubationsstudier samt enskilda intubationshändelser hos möss.
Protocol
Representative Results
Discussion
Intubation med hjälp av transkutan trakeal visualisering teknik erbjuder en raffinerad inställning till standard hud snitt metod. Med särskild uppmärksamhet på flera viktiga steg kan intubation enkelt och snabbt uppnås. Djuret måste placeras rakt i dorsala recumbency på intubation plattform med musen säkrad i mild upprullning. Detta kommer att utvidga djuret i vertikal anpassning och korrekt placering för intubation. Dessutom bör hårborttagningskrämen inte vara i kontakt med djurets hud längre än 30−45 s…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Författarna tackar Lucia Rosas, Lauren Doolittle, Lisa Joseph och Lindsey Ferguson för deras tekniska hjälp och University Laboratory Animal Resources för deras stöd för djurvård. Detta arbete finansieras av NIH T35OD010977 och R01-HL102469.
Materials
| 18Gx1 1/4" intravenous catheter, Safelet | Fisher Scientific | #14-841-14 | Cannula for intubation |
| 70% ethanol, 10L | Fisher Scientific | 25467025 | Cleaning cannula |
| Abrasive paper (sandpaper) | Porter-Cable | 74001201 | Cannula preparation |
| AnaSed (xylazine sterile solution) injection (100 mg/ml) | Akorn Animal Health | NDC# 59399-111-50 | Anesthesia |
| Blue labeling tape (0.5 in x 14 yds) | Fisher Scientific | 15966 | Restraint on intubation platform |
| Braided silk suture without needle, nonsterile, (3-0) | Henry Schein | Item #1007842 | Intubation platform |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | Mouse thermoregulation and recovery |
| Deltaphase Operating Board | Braintree Scientific | 39OP | Mouse recovery (prior to extubation) |
| Distilled water | ThermoFisher | 15230253 | Cleaning mouse following depilation |
| Eye Scissors, angled, sharp/sharp | Harvard Apparatus | 72-8437 | Cannula preparation |
| FlexiVent (FX Module 2) | Scireq | N/A | Record lung function data (not required to perform procedure, used in this study to validate procedure) |
| Gauze sponges | Fisher scientific | 13-761-52 | Hair removal |
| Heavy-Duty 3" 3-Ring View Binders | Staples | 24690CT | Intubation platform |
| Instat Software | Graphpad | N/A | Statistical analysis software |
| Insulin syringe (0.5 cc, U100) | Fisher Scientific | 329461 | Anesthesia administration |
| Ketamine HCl Injection, USP (100 mg/ml) | Llyod Laoratories | List No. 4871 | Anesthesia |
| Lung inflation bulb | Harvard Apparatus | 72-9083 | Confirm cannula placement |
| Micro Forceps, Curved, Smooth | Harvard Apparatus | 72-0445 | Retract tongue and create tension on neck for cannula visualization |
| Nair (hair removal lotion), 9 oz bottle | Church & Dwight | 42010440 | Hair removal |
| Sterile saline (0.9%), 10 ml | Fisher Scientific | NC9054335 | Anesthesia, cleaning skin following hair removal |
References
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory Animals. 41 (1), 128-135 (2007).
- Rivera, B., Miller, S. R., Brown, E. M., Price, R. E. A Novel Method for Endotracheal Intubation of Mice and Rats Used in Imaging Studies. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (2), 52-55 (2005).
- Sparrowe, J., Jimenez, M., Rullas, J., Martinez, A. E., Ferrer, S. Refined Intratracheal Intubation Technique in the Mouse, Complete Protocol Description for Lower Airway Models. Global Journal of Animal Scientific Research. 3 (2), 363-369 (2015).
- Deyo, D. J., Wei, J. A Novel Method of Intubation and Ventilation in Mice. Anesthesia & Analgesia. 88 (2), 179 (1999).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 8 (3), 103-106 (2004).
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. Journal of Applied Physiology. 87 (6), 2362-2365 (1999).
- Das, S., MacDonald, K., Chang, H. S., Mitzner, W. A Simple Method of Mouse Lung Intubation. Journal of Visualized Experiments. (73), e50318 (2013).
- Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. Journal of Visualized Experiments. (102), e52964 (2015).
- Qin, W., Baran, U., Wang, W. Lymphatic response to depilation-induced inflammation assessed with label-free optical lymphangiography. Lasers in Surgery and Medicine. 47 (8), 669-676 (2015).
- McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique. Journal of Visualized Experiments. (75), e50107 (2013).
