توضح هذه المقالة نهجا جراحيا فعالا لإنشاء نقص التروية الحاد في الفئران ذات الشق الصغير. ويمكن تطبيق هذا النهج من قبل معظم مجموعات البحوث دون أي تحسينات مختبرية.
الغرض من هذه الدراسة هو إدخال وتقييم نهج جراحي معدل للحث على نقص التروية الحاد في الفئران التي يمكن تنفيذها في معظم مختبرات الحيوانات. خلافا للنهج التقليدي للربط المزدوج للشريان الفخذي (DLFA) ، تم إجراء شق أصغر على المنطقة الأربية اليمنى لفضح الشريان الفخذي القريب (FA) لأداء DLFA. ثم، باستخدام خياطة 7-0، تم سحب الشق إلى منطقة الركبة لفضح FA البعيدة. تم استخدام التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) على الأطراف الخلفية الثنائية للكشف عن انسداد الاتحاد الإنجليزي بعد الجراحة. في 0, 1, 3, 5, و 7 أيام بعد الجراحة, تم تقييم الانتعاش الوظيفي للأطراف الخلفية بصريا ومتدرج باستخدام مقياس تارلوف. تم إجراء تقييم الهسطولوجيا بعد القتل الرحيم للحيوانات بعد 7 أيام من DLFA. تم تنفيذ الإجراءات بنجاح على الساق اليمنى في عشرة فئران ApoE-/- ، ولم تمت أي فئران أثناء الملاحظة اللاحقة. كانت أحجام الشق في جميع الفئران العشرة أقل من 5 مم (4.2 ± 0.63 مم). وأظهرت نتائج التصوير بالرنين المغناطيسي أن تدفق الدم FA في الجانب الإقفاري كان محظورا بشكل واضح. أظهرت نتائج مقياس Tarlov أن وظيفة الأطراف الخلفية انخفضت بشكل كبير بعد الإجراء وتعافى ببطء على مدى الأيام السبعة التالية. أظهر التقييم النسيجي استجابة التهابية كبيرة على الجانب الإقفاري وانخفاض كثافة الأوعية الدموية الدقيقة في الطرف الخلفي الإقفاري. في الختام، تقدم هذه الدراسة تقنية معدلة باستخدام شق مصغر لإجراء نقص التروية في الأطراف الخلفية (HLI) باستخدام DLFA.
هناك حاجة غير ملباة لنماذج الحيوانات قبل السريرية للبحث في أمراض الأوعية الدموية مثل أمراض الشرايين الطرفية (PAD). على الرغم من التطورات المتقدمة في التشخيص والعلاج ، كان هناك أكثر من 200 مليون مريض يعانون من PAD في عام 20181، وعددهم في تزايد مستمر. علىالرغممن أن العديد من النهج العلاجية الجديدة 2،3،4،5،6،7 قد وصفت ، الترجمة الناجحة لهذه الطرائق العلاجية في التطبيق السريري لا تزال مهمة شاقة. لذلك ، مطلوب نماذج تجريبية موثوقة ووثيقة الصلة في الجسم الحي تحاكي حالة المرض البشري للتحقيق في الآلية المحتملة وكفاءة هذه النهج العلاجية الجديدة لعلاج PAD6،7.
فرط الدهون و تصلب الشرايين (AS) هي عوامل الخطر الرئيسية لتطوير PAD. ApoE-/- الفئران (على نظام غذائي عالي الدهون) عرض التمثيل الغذائي للدهون غير طبيعية وفرط الدهون وتطوير في وقت لاحق لويحات تصلب الشرايين مما يجعل ApoE-/- الفئران كأفضل خيار لمحاكاة PAD ذات الصلة سريريا. يتم إنشاء نماذج HLI قبل السريرية من خلال الربط المزدوج للشريان الفخذي (DLFA) ، وهو النهج الأكثر استخداما في المختبرات في جميع أنحاء العالم8و9و10و 11و12و13و14و15 لمحاكاة نقص التروية الحاد على المزمن. ومع ذلك، يتطلب هذا النهج عادة شق كبير نسبيا والغازية. وعلاوة على ذلك، فإنه يؤدي حتما إلى الحيوانات (وخاصة الفئران) الذين يعانون من زيادة إصابة الألم والالتهاب، مما يؤثر أيضا على النتائج التجريبية اللاحقة5،6،16،17. تصف هذه الورقة نموذج HLI حاد على مزمن في APOE-/- الفئران باستخدام شق صغير جدا.
هذه الدراسة تقارير تعديل, مبسطة, ونهج فعال جراحيا لإنشاء نموذج HLI في ApoE-/- الفئران باستخدام الربط المزدوج في المناطق القريبة والقاصية من الاتحاد الانجليزي من خلال شق 3-4 ملم دون أي ترقيات المختبر المطلوبة. السمة الرئيسية لهذه الطريقة هي أصغر حجم الشق مقارنة مع الدراسات التي سبق الإبلاغ…
The authors have nothing to disclose.
يشكر المؤلفون فيكتوريا سكودي وألكساندر شلوند وفيليكس هورنر على الدعم الفني الممتاز.
10x Phosphate buffer saline | Roth | 9143.1 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
30% H2O2 | Roth | 9681.2 | Used for immunohistochemistry stain |
6-0 absorbable sutures | PROLENE | 8776H | Used for stitching the skin |
6-0 absroable suture | PROLENE | EP8706 | Used in Surgery |
7-0 absorbable sutures | PROLENE | EH8021E | Used for ligating the artery |
7-0 absroable suture | PROLENE | EP8755 | Used in Surgery |
Acetic acid | Roth | 6755.1 | Used for haematoxylin and eosin stain |
Albumin Fraktion V | Roth | 8076.2 | Used for immunohistochemistry stain |
Autoclave | Systec GmbH | Systec VX-150 | Used for the sterilisation of the surgical instruments |
Axio vert A1 microscope | Carl Zeiss | ZEISS Axio Vert.A1 | Used for viewing and taking the pictures from haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Bruker BioSpec 94/20 AVIII | Bruker Biospin MRI GmbH | N/A | Scan the femoral artery blockage |
Buprenovet Sine 0,3mg/ml | Bayer AG | 2542 (WDT) | Used in post operative pain-management. Dose – 0.1 mg/kg body weight every 8 hours for 48 h after operation |
CD31 antibody | Abcam | ab28364 | Used for immunohistochemistry stain |
Eosin Y solution 0.5 % in water | Roth | X883.1 | Used for haematoxylin and eosin stain |
Epitope Retrieval Solution pH 6 | Leica Biosystems | 6046945 | Used for immunohistochemistry stain |
Ethanol ≥ 99,5 % | Roth | 5054.1 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Fentanyl | Cayman Chemical | 437-38-7 | Used for anesthesia |
Fine point forceps | Medixplus | 93-4505S | Used for separating the artery from nerve and vein |
Glass bead sterilisator | Simon Keller | Type 250 | Used for sterilisation of the surgical instruments |
Graefe iris forceps curved | VUBU | VUBU-02-72207 | Used for blunt separation of skin and subcutaneous tissue |
Hair Remover cream, Veet (with aloe vera) | Reckitt Benckiser | 108972 | Remove hair from mice hind limbs |
Heating plate | STÖRK-TRONIC | 7042092 | Keep the satble temperature of mice |
Hematoxylin | Roth | T865.2 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Leica surgical microscope | Leica | M651 | Enlarge the field of view to facilitate the operation |
Liquid DAB+Substrate Chromogen System | Dako | K3468 | Used for immunohistochemistry stain |
Male ApoE-/- mice | Charles River Laboratories | N/A | Used for establish the Peripheral artery disease mice model |
Medetomidine | Cayman Chemical | 128366-50-7 | Used for anesthesia |
Micro Needle Holder | Black & Black Surgical | B3B-18-8 | Holding the needle |
Micro suture tying forceps | Life Saver Surgical Industries | PS-MSF-145 | Used to assist in knotting during surgery |
Microtome | Biobase | Bk-Mt268m | Used for tissue sectioning |
Midazolam | Ratiopharm | 44856.01.00 | Used for anesthesia |
MR-compatible Small Animal Monitoring and Gating System Model 1025 | SA Instruments | N/a | monitoring vital signs of animal during MRI scan |
Octeniderm farblos | Schülke & Mayr GmbH | 180212 | used for disinfection of the skin |
Ointment for the eyes and nose | Bayer AG | 1578675 | Keep the eyes wet under the anesthesia |
Paraformaldehyde | Roth | 0335.1 | Used for fixation of the tissue |
Pentobarbital | Nembutal | 76-74-4 | Used for anesthesia |
Saline | DeltaSelect | 1299.99.99 | Used for anesthesia |
Spring handle scissors with fine, sharp tips | Black & Black Surgical | B66167 | Used for cutting the artery |
SuperCut Scissors | Black & Black Surgical | B55992 | Used for cutting the skin |
Triton X-100 | Roth | 9002-93-1 | Used for immunohistochemistry stain |
Western diet, 1.25% Cholesterol | ssniff Spezialdiäten GmbH | E15723-34 | Diet for the mice |
Xylene | Roth | 4436.3 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |