この記事は、小さな切開を有するマウスにおける急性虚血を確立するための効率的な外科的アプローチを示す。このアプローチは、ほとんどの研究グループが、実験室でのアップグレードなしで適用できます。
本研究の目的は、ほとんどの動物実験で実施できるマウスに急性虚血を誘導する改変外科的アプローチを導入し、評価することにある。大腿動脈(DLFA)の二重結紮に対する従来のアプローチとは対照的に、右のインギナル領域に小さな切開部が、DLFAを行うために近位大腿動脈(FA)を露出するようになされた。次いで、7-0縫合を用いて、切開を膝領域に引きずり込んで遠位FAを露出させ、手術後にFA閉塞を検出するために両側後肢に磁気共鳴画像(MRI)を使用した。手術後0、1、3、5、および7日目に、後肢の機能的回復を目視で評価し、Tarlovスケールを用いて採点した。組織学的評価は、DLFAの7日後に動物を安楽死させた後に行った。この処置は10匹のApoE-/- マウスで右足で正常に行われ、その後の観察中に死亡したマウスはなかった。全10匹のマウスの切開サイズは5mm(4.2±0.63mm)未満であった。MRIの結果は虚血側のFA血流が明確に遮断されたことを示した。Tarlovスケールの結果は、後肢の機能が処置後に有意に低下し、次の7日間にわたってゆっくりと回復することを示した。組織学的評価は虚血性側に顕著な炎症反応を示し、虚血後肢の微小血管密度を低下させた。結論として、この研究は、DLFAを使用して後肢虚血(HLI)を行うためにミニチュア切開を使用して変更された技術を導入する。
末梢動脈疾患(PAD)などの血管疾患の研究のための前臨床動物モデルのための満たされていないニーズがあります。診断と治療の発展にもかかわらず、2018年1年にはPAD患者数が2億人以上で、その数は絶えず増加しています。いくつかの新しい治療アプローチ2、3、4、5、6、7が記載されているが、臨床応用へのこれらの治療様式の翻訳の成功は困難な作業のままである。従って、ヒト疾患状態をシミュレートする生体内の実験モデルにおいて信頼性が高く、関連するが、PAD6,7を治療するためのこれらの新しい治療アプローチの潜在的なメカニズムおよび効率を調べる必要がある。
高脂血症およびアテローム性動脈硬化症(AS)は、PADの開発のための主な危険因子である。ApoE-/-マウス(高脂肪食)は異常な脂肪代謝と高脂血症を示し、その後、臨床的に関連するPADをシミュレートするための最良の選択としてApoE-/-マウスをレンダリングするアテローム硬化性プラークを開発する。前臨床HLI動物モデルは、世界中の実験室で最も広く使用されている大腿動脈(DLFA)の二重結紮によって生成される8、9、10、11、12、13、14、15急性慢性虚血をシミュレートする。しかし、このアプローチは通常、比較的大きく侵襲的な切開を必要とする。さらに、必然的に、痛み傷害や炎症の増加に苦しむ動物(特にマウス)につながり、その後の実験結果5、6、16、17にも影響を与える。この論文では、APOE-/- マウスにおける急性慢性HLIモデルについて、非常に小さな切開を用いて説明する。
この研究は、必要な実験室のアップグレードなしに3〜4mmの切開を介してFAの近位および遠位領域で二重結紮を使用してApoE-/-マウスにHLIモデルを確立するための修正され、簡素化され、外科的に効率的なアプローチを報告する。この方法の主な特徴は、マウスHLIモデル8、9、10、11、12、15、20、22、23、24…
The authors have nothing to disclose.
著者はヴィクトリア・スクデ、アレクサンダー・シュルンド、フェリックス・ヘルナーに優れた技術サポートをしてくれたことに感謝しています。
10x Phosphate buffer saline | Roth | 9143.1 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
30% H2O2 | Roth | 9681.2 | Used for immunohistochemistry stain |
6-0 absorbable sutures | PROLENE | 8776H | Used for stitching the skin |
6-0 absroable suture | PROLENE | EP8706 | Used in Surgery |
7-0 absorbable sutures | PROLENE | EH8021E | Used for ligating the artery |
7-0 absroable suture | PROLENE | EP8755 | Used in Surgery |
Acetic acid | Roth | 6755.1 | Used for haematoxylin and eosin stain |
Albumin Fraktion V | Roth | 8076.2 | Used for immunohistochemistry stain |
Autoclave | Systec GmbH | Systec VX-150 | Used for the sterilisation of the surgical instruments |
Axio vert A1 microscope | Carl Zeiss | ZEISS Axio Vert.A1 | Used for viewing and taking the pictures from haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Bruker BioSpec 94/20 AVIII | Bruker Biospin MRI GmbH | N/A | Scan the femoral artery blockage |
Buprenovet Sine 0,3mg/ml | Bayer AG | 2542 (WDT) | Used in post operative pain-management. Dose – 0.1 mg/kg body weight every 8 hours for 48 h after operation |
CD31 antibody | Abcam | ab28364 | Used for immunohistochemistry stain |
Eosin Y solution 0.5 % in water | Roth | X883.1 | Used for haematoxylin and eosin stain |
Epitope Retrieval Solution pH 6 | Leica Biosystems | 6046945 | Used for immunohistochemistry stain |
Ethanol ≥ 99,5 % | Roth | 5054.1 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Fentanyl | Cayman Chemical | 437-38-7 | Used for anesthesia |
Fine point forceps | Medixplus | 93-4505S | Used for separating the artery from nerve and vein |
Glass bead sterilisator | Simon Keller | Type 250 | Used for sterilisation of the surgical instruments |
Graefe iris forceps curved | VUBU | VUBU-02-72207 | Used for blunt separation of skin and subcutaneous tissue |
Hair Remover cream, Veet (with aloe vera) | Reckitt Benckiser | 108972 | Remove hair from mice hind limbs |
Heating plate | STÖRK-TRONIC | 7042092 | Keep the satble temperature of mice |
Hematoxylin | Roth | T865.2 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |
Leica surgical microscope | Leica | M651 | Enlarge the field of view to facilitate the operation |
Liquid DAB+Substrate Chromogen System | Dako | K3468 | Used for immunohistochemistry stain |
Male ApoE-/- mice | Charles River Laboratories | N/A | Used for establish the Peripheral artery disease mice model |
Medetomidine | Cayman Chemical | 128366-50-7 | Used for anesthesia |
Micro Needle Holder | Black & Black Surgical | B3B-18-8 | Holding the needle |
Micro suture tying forceps | Life Saver Surgical Industries | PS-MSF-145 | Used to assist in knotting during surgery |
Microtome | Biobase | Bk-Mt268m | Used for tissue sectioning |
Midazolam | Ratiopharm | 44856.01.00 | Used for anesthesia |
MR-compatible Small Animal Monitoring and Gating System Model 1025 | SA Instruments | N/a | monitoring vital signs of animal during MRI scan |
Octeniderm farblos | Schülke & Mayr GmbH | 180212 | used for disinfection of the skin |
Ointment for the eyes and nose | Bayer AG | 1578675 | Keep the eyes wet under the anesthesia |
Paraformaldehyde | Roth | 0335.1 | Used for fixation of the tissue |
Pentobarbital | Nembutal | 76-74-4 | Used for anesthesia |
Saline | DeltaSelect | 1299.99.99 | Used for anesthesia |
Spring handle scissors with fine, sharp tips | Black & Black Surgical | B66167 | Used for cutting the artery |
SuperCut Scissors | Black & Black Surgical | B55992 | Used for cutting the skin |
Triton X-100 | Roth | 9002-93-1 | Used for immunohistochemistry stain |
Western diet, 1.25% Cholesterol | ssniff Spezialdiäten GmbH | E15723-34 | Diet for the mice |
Xylene | Roth | 4436.3 | Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain |