À Ovo Injection intravasculaire dans des embryons de poulet
Summary
L’objectif global de cet article est de décrire comment effectuer une injection intracellulaire ovo de matériaux exogènes dans des embryons de poulet. Cette approche est très utile pour étudier la biologie du développement des embryons de poulet.
Abstract
En tant que système modèle classique de biologie embryonnaire, l’embryon de poulet a été utilisé pour étudier le développement embryonnaire et la différenciation. L’administration de matériaux exogènes dans des embryons de poulet présente un grand avantage pour l’étude de la fonction des gènes, de la reproduction transgénique et de la préparation de chimères pendant le développement embryonnaire. Nous montrons ici la méthode d’injection intravasculaire inovo par laquelle des matériaux exogènes tels que des vecteurs plasmidiques ou des cellules germinales primordiales modifiées (PGC) peuvent être transférés dans des embryons de poulet donneurs à des stades précoces de développement. Les résultats montrent que l’injection intravasculaire à travers l’aorte dorsale et la tête permet aux matériaux injectés de diffuser dans l’embryon entier à travers le système circulatoire sanguin. Dans le protocole présenté, l’efficacité de l’introduction de plasmides exogènes et de vecteurs lentiviraux, ainsi que la colonisation des PGC exogènes injectés dans la gonade receveuse, ont été déterminées en observant la fluorescence dans les embryons. Cet article décrit les procédures détaillées de cette méthode, fournissant ainsi une excellente approche pour étudier la fonction des gènes, la biologie embryonnaire et du développement, et la production de poulet gonade-chimérique. En conclusion, cet article permettra aux chercheurs d’effectuer en injection ovo-intravasculaire de matériaux exogènes dans des embryons de poulet avec beaucoup de succès et de reproductibilité.
Introduction
Les embryons de poulet sont largement utilisés depuis des siècles dans des applications développementales, immunologiques, pathologiques et biologiques 1,2,3. Ils présentent de nombreux avantages inhérents par rapport aux autres modèles animaux dans l’étude de la toxicologie et de la biologie cellulaire4. Les embryons de poulet sont facilement accessibles et peuvent être manipulés in vitro et directement observés à n’importe quel stade de développement, ce qui fournit un système pratique de modèle de recherche sur les embryons.
En général, les méthodes actuelles d’administration d’embryons de poulet telles que l’électrotransfection et l’injection de cavité sous-germinale ont des limites telles que l’exigence d’un équipement spécialisé et d’un programme conçu, et l’inefficacité due à la présence de jaune et d’albumine 5,6,7. Nous montrons ici une méthode de manipulation simple et efficace pour délivrer des matériaux exogènes dans des embryons de poulet. Cela peut être un outil puissant utilisé dans l’étude de la biologie du développement. Les matières injectées se propagent à l’embryon entier par circulation sanguine. Au cours du développement précoce des embryons de poulet, les PGC pourraient migrer dans le sang, coloniser la crête génitale, puis se développer en gamètes, ce qui constitue un moyen précieux de délivrer des matériaux exogènes8. Maintenant, cette méthode a été largement utilisée dans l’étude de la fonction des gènes, de la biologie embryonnaire et du développement, et de la production de poulet chimérique et transgénique 9,10,11.
L’injection intravasculaire inovo dans des embryons de poulet est une méthode bien établie et couramment utilisée 12,13,14. Dans cet article, nous montrons une description complète de ce protocole, y compris les matériaux d’injection, les sites, la posologie et les résultats représentatifs.
Protocol
Representative Results
Discussion
La méthode d’injection inovo-intravasculaire d’embryons de poulet est optimisée pour que des matériaux exogènes (vecteurs, viraux ou PGC) soient transférés dans l’embryon. Sur la base de cette méthode, nous avons construit des modèles d’embryons de poulet avec une surexpression ou une interférence génétique stable (SpinZ, JUN, UBE2I, etc.) 17,18,19. Ces modèles bien établis prouvent la faisabilité…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (31972547). Nous apprécions la révision de Jing Wang et la voix off de Malik Donlic à la Washington State University, aux États-Unis.
Materials
| Fluorescence macro-microscope | OLYMPUS | MVX10 | |
| Glass Capillaries | Narishige | G1 | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 12566014 | liposome |
| pEGFP-N1 vector | Clontech | #6085-1 | |
| PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Kit | Sigma | PKH26GL | |
| pLVX-EGFP lentivirus vector | Addgene | 128652 | |
| Pneumatic Microinjector | Narishige | IM-11-2 | |
| Puller | Narishige | PC-100 | |
| Trypan Blue Stain | Gibco | 15250061 |
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