نموذج الفئران للتلف البريتوني الناجم عن الكلورهيكسيدين غلوكونات
Summary
ينشئ البروتوكول الحالي نموذجا لفأر غسيل الكلى البريتوني (PD) للتليف البريتوني الناجم عن الكلورهيكسيدين غلوكونات (CG). النموذج الحالي بسيط وسهل الاستخدام مقارنة بالنماذج الحيوانية PD الأخرى.
Abstract
التليف البريتوني هو أحد المضاعفات الهامة لغسيل الكلى البريتوني (PD). للتحقيق في هذه المشكلة ومعالجتها ، يلزم وجود نموذج حيواني مناسب لمرض باركنسون. ينشئ البروتوكول الحالي نموذج التليف البريتوني الناجم عن الكلورهيكسيدين غلوكونات (CG) الذي يحاكي حالة المريض المصاب بمرض باركنسون. تم إحداث التليف البريتوني عن طريق الحقن داخل الصفاق بنسبة 0.1٪ من CG في 15٪ من الإيثانول لمدة 3 أسابيع (تدار كل يومين) ، ليصبح المجموع تسع مرات في ذكور الفئران C57BL / 6. ثم تم إجراء الاختبارات الوظيفية البريتونية في اليوم 22. بعد التضحية بالفئران ، تم حصاد الصفاق الجداري لجدار البطن والصفاق الحشوي للكبد. كانت أكثر سمكا وأكثر تليفا عند تحليلها مجهريا بعد تلطيخ ماسون ثلاثي الألوان. انخفض معدل الترشيح الفائق ، وأشار نقل كتلة الجلوكوز إلى زيادة في نفاذية البريتوني التي يسببها CG. قد يكون لنموذج PD الذي تم إنشاؤه على هذا النحو تطبيقات في تحسين تقنية PD وفعالية غسيل الكلى وإطالة بقاء المريض.
Introduction
غسيل الكلى البريتوني (PD) هو نوع من العلاج ببدائل الكلى. ومع ذلك ، فإن PD لديه مشاكل لا يمكن حلها. على سبيل المثال ، يمكن أن يتسبب علاج PD طويل الأمد في تلف الصفاق ، مما يؤدي في النهاية إلى فشل الترشيح الفائق وسحب العلاج1،2،3،4،5،6. التليف البريتوني هو واحد من أخطر المضاعفات 7,8. يتميز التليف البريتوني بترسب وتراكم المصفوفة خارج الخلية داخل الخلالي ، وتكوين الأوعية الدموية الجديدة والاعتلال الوعائي في الصفاق9،10.
الأسباب الرئيسية لهذه التغيرات البريتونية هي التهاب الصفاق المتكرر وعدم التوافق الحيوي للديالة ، وهي فرط التناضح ، وارتفاع الجلوكوز ، وانخفاض درجة الحموضة ، وتراكم منتج تحلل الجلوكوز11,12. لذلك ، يمكن أن تساعد النماذج التجريبية الحيوانية المناسبة الباحثين على دراسة التغيرات الفسيولوجية والمرضية للبريتوني بشكل أفضل أثناء علاج PD. لذلك ، يعد إنشاء نموذج PD حيواني أمرا مهما لتحسين تقنية PD وفعالية غسيل الكلى وإطالة بقاء المريض. تهدف هذه الدراسة إلى إنشاء نموذج فأر PD عن طريق الحقن داخل الصفاق (i.p.) من غلوكونات الكلورهيكسيدين (CG) ، كما هو موضح سابقا13،14. نموذج الماوس PD هذا بسيط وسهل الاستخدام وممكن مقارنة بنماذج PD الأخرى.
Protocol
Representative Results
Discussion
في هذه الدراسة ، تم تقديم نموذج PD للفأر عن طريق حقن i.p. من CG ، وأظهرت النتائج التليف البريتوني والتدهور الوظيفي في هذا النموذج ، والذي يحاكي حالة مريض PD.
هناك العديد من الخطوات الحاسمة في البروتوكول. أولا ، لإجراء حقن i.p. من CG أو NS ، يجب التقاط جلد جدار البطن للفأر باستخدام ملقط …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر بصدق شين هان تسنغ على المناقشة النقدية والتنفيذ الجزئي للدراسة. تم دعم هذه الدراسة من قبل EDAHP110003 و NCKUEDA110002 من مؤسسة أبحاث مستشفى E-DA وجامعة تشنغ كونغ الوطنية ، تايوان.
Materials
| 0.9% Normal Saline | Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwan | – | |
| 10% neutral buffered formalin | Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan | 00002A | |
| Automatic biochemical analyzer | Hitachi Ltd., Tokyo, Japan | Labospect Series 008 | for determining glucose concentration |
| Chlorhexidine digluconate solution, 20% in H2O | Sigma-Aldrich, MO, USA | C9394 | diluted to 0.1% with 15% ethanol for injection |
| Ethanol | Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA | BAKR8006-05 | diluted to 15% with normal saline for working concentration |
| Glucose (Dianeal) | Baxter International, Inc., IL, USA | FNB9896 | Commercial dialysis solution (4.25%) |
| GraphPad Prism 8.0 | GraphPad Software, Inc., CA, US | ||
| L-type Glu 2 assay | FUJIFILM Wako, Japan | 461-32403 | |
| Xylazine 20 | Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, Taiwan | – | |
| Zoletil 50 | Virbac Laboratories, Carros, France | – |
References
- Han, S. H., et al. Improving outcome of CAPD: twenty-five years’ experience in a single Korean center. Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).
- Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T. Issues affecting the longevity of the continuous peritoneal dialysis therapy. Kidney International Supplements. 62, 105-107 (1997).
- Lee, Y. C., et al. Vitamin D can ameliorate chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis and functional deterioration through the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition of mesothelial cells. BioMed Research International. 2015, 595030 (2015).
- Nakamoto, H., Kawaguchi, Y., Suzuki, H. Is technique survival on peritoneal dialysis better in Japan. Peritoneal Dialysis International. 26 (2), 136-143 (2006).
- Schaefer, F., Klaus, G., Muller-Wiefel, D. E., Mehls, O. Current practice of peritoneal dialysis in children: results of a longitudinal survey. Mid European Pediatric Peritoneal Dialysis Study Group (MEPPS). Peritoneal Dialysis International. 19, 445-449 (1999).
- Woodrow, G., Turney, J. H., Brownjohn, A. M. Technique failure in peritoneal dialysis and its impact on patient survival. Peritoneal Dialysis International. 17 (4), 360-364 (1997).
- Schmidt, D. W., Flessner, M. F. Pathogenesis and treatment of encapsulating peritoneal sclerosis: basic and translational research. Peritoneal Dialysis International. 28, 10-15 (2008).
- Augustine, T., Brown, P. W., Davies, S. D., Summers, A. M., Wilkie, M. E. Encapsulating peritoneal sclerosis: clinical significance and implications. Nephron Clinical Practice. 111 (2), 149-154 (2009).
- Di Paolo, N., Nicolai, G. A., Garosi, G. The peritoneum: from histological studies to mesothelial transplant through animal experimentation. Peritoneal Dialysis International. 28, 5-9 (2008).
- Fusshoeller, A. Histomorphological and functional changes of the peritoneal membrane during long-term peritoneal dialysis. Pediatric Nephrology. 23 (1), 19-25 (2008).
- Goffin, E. Peritoneal membrane structural and functional changes during peritoneal dialysis. Seminars in Dialysis. 21 (3), 258-265 (2008).
- Ito, T., Yorioka, N. Peritoneal damage by peritoneal dialysis solutions. Clinical and Experimental Nephrology. 12 (4), 243-249 (2008).
- Io, K., et al. SAHA suppresses peritoneal fibrosis in mice. Peritoneal Dialysis International. 35 (3), 246-258 (2015).
- Yoh, K., Ojima, M., Takahashi, S. Th2-biased GATA-3 transgenic mice developed severe experimental peritoneal fibrosis compared with Th1-biased T-bet and Th17-biased RORgammat transgenic mice. Experimental Animals. 64 (4), 353-362 (2015).
- Karl, Z. J. T., et al. Peritoneal Equilibration Test. Peritoneal Dialysis International. 7 (3), 138-148 (1987).
- Lee, Y. C., et al. The clinical implication of vitamin D nanomedicine for peritoneal dialysis-related peritoneal damage. International Journal of Nanomedicine. 14, 9665-9675 (2019).
- Goldner, J. A. Modification of the masson trichrome technique for routine laboratory purposes. The American Journal of Pathology. 14 (2), 237-243 (1938).
- Cheng, F. Y., et al. Novel application of magnetite nanoparticle-mediated vitamin D3 delivery for peritoneal dialysis-related peritoneal damage. International Journal of Nanomedicine. 16, 2137-2146 (2021).
- Ross, A., Willson, V. L. . Basic and Advanced Statistical Tests: Writing Results Sections and Creating Tables and Figures. , 13-16 (2017).
- Suga, H., et al. Preventive effect of pirfenidone against experimental sclerosing peritonitis in rats. Experimental and Toxicologic Pathology. 47 (4), 287-291 (1995).
- Ishii, Y., et al. An experimental sclerosing encapsulating peritonitis model in mice. Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (6), 1262-1266 (2001).
- Nishino, T., et al. Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats. Kidney International. 64 (3), 887-896 (2003).
- Mishima, Y., et al. Enhanced expression of heat shock protein 47 in rat model of peritoneal fibrosis. Peritoneal Dialysis International. 23 (1), 14-22 (2003).
- Kushiyama, T., et al. Effects of liposome-encapsulated clodronate on chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis in rats. Nephrology Dialysis Transplantation. 26 (10), 3143-3154 (2011).
- Nishino, T., et al. Involvement of lymphocyte infiltration in the progression of mouse peritoneal fibrosis model. Renal Failure. 34 (6), 760-766 (2012).
- Lua, I., Li, Y., Pappoe, L. S., Asahina, K. Myofibroblastic conversion and regeneration of mesothelial cells in peritoneal and liver fibrosis. The American Journal of Pathology. 185 (12), 3258-3273 (2015).
- Kitamura, M., et al. Epigallocatechin gallate suppresses peritoneal fibrosis in mice. Chemico-Biological Interactions. 195 (1), 95-104 (2012).
