グルコン酸クロルヘキシジンによる腹膜損傷のマウスモデル
1School of Medicine, College of Medicine,I-Shou University, 2Division of Nephrology, Department of Internal Medicine,E-DA Hospital, 3Department of Pediatrics,National Cheng Kung University Hospital, 4Institute of Clinical Medicine, College of Medicine,National Cheng Kung University, 5Division of Nephrology, Department of Internal Medicine,E-DA Dachang Hospital
Summary
本プロトコルは、グルコン酸クロルヘキシジン(CG)誘発腹膜線維症の腹膜透析(PD)マウスモデルを確立する。現在のモデルは、他のPD動物モデルと比較してシンプルで使いやすいです。
Abstract
腹膜線維症は腹膜透析(PD)の重要な合併症です。この問題を調査して対処するには、PDの適切な動物モデルが必要です。本プロトコルは、PD患者の状態を模倣するグルコン酸クロルヘキシジン(CG)誘発腹膜線維症モデルを確立します。 腹膜線維症は、15%エタノール中のCGの0.1%を腹腔内注射によって3週間(1日おきに投与)、雄のC57BL / 6マウスで合計9回誘発しました。その後、腹膜機能試験を22日目に実施した。マウスを屠殺した後、腹壁の頭頂腹膜および肝臓の内臓腹膜を採取した。マッソンのトリクローム染色後に顕微鏡で分析すると、それらはより厚く、より線維化していました。限外濾過速度は低下し、グルコース物質輸送は腹膜透過性のCG誘発性の増加を示した。このようにして確立されたPDモデルは、PD技術の改善、透析の有効性、および患者の生存期間の延長に応用できる可能性があります。
Introduction
腹膜透析(PD)は腎代替療法の一種です。しかし、PDには解決できない問題があります。例えば、長期のPD治療は腹膜損傷を引き起こし、最終的には限外濾過不全および治療の中止につながる可能性がある1、2、3、4、5、6。腹膜線維症は最も深刻な合併症の1つです7,8。腹膜線維症は、間質内の細胞外マトリックスの沈着および蓄積、ならびに腹膜の血管新生および血管障害によって特徴付けられる9、10。
これらの腹膜変化の主な原因は、再発性腹膜炎および透析液の非生体適合性であり、これらは高浸透圧、高グルコース、低pH、およびグルコース分解生成物の蓄積である11,12。したがって、適切な動物実験モデルは、研究者がPD療法中の腹膜の生理学的および病理学的変化をよりよく研究するのに役立ちます。したがって、動物PDモデルの確立は、PD技術および透析有効性を改善し、患者の生存期間を延長するために重要である。この研究は、前述のように、グルコン酸クロルヘキシジン(CG)の腹腔内(i.p.)注射によってPDマウスモデルを生成することを目的としていました13,14。このPDマウスモデルは、他のPD動物モデルと比較して、シンプルで使いやすく、実現可能です。
Protocol
すべてのマウス実験は、E-DA病院/I-Shou大学の実験動物センターによって承認され、「実験動物の世話と使用のためのガイド」(NRC、USA 2011)に従って処理されました。本研究には、7〜8週齢の雄C57BL / 6マウスを使用しました。 1.化学薬品の準備 0.1%グルコン酸クロルヘキシジン(CG、 材料表を参照)を15%エタノールで希釈することにより、化学刺?…
Representative Results
図1A,Bでは、腹壁の頭頂腹膜はマッソンのトリクローム染色17の下で著しく厚く、より線維化しており、CG曝露群では腹膜線維症が対照生理食塩水群(NS)よりも重症であることを示しています。図2A,Bでは、肝臓表面の内臓腹膜も著しく厚く、線維性が高く、CG曝露群では、腹膜線維症が対照生理食塩水群(NS)よりも重症で?…
Discussion
本研究では、CGのi.p.注射によりマウスPDモデルを提示し、PD患者の状態を模倣した腹膜線維化と機能低下を示した。
プロトコルにはいくつかの重要なステップがあります。まず、CGまたはNSのi.p.注射を行うには、穿刺による腹腔内臓器損傷を防ぐために、鉗子を使用してマウスの腹壁皮膚をピックアップする必要があります。第二に、組織学的分析のために腹壁の腹膜を?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私たちは、研究の批判的な議論と部分的な実行について、Shin-Han Tsengに心から感謝します。この研究は、E-DA病院研究財団と台湾の国立成功大学のEDAHP110003およびNCKUEDA110002によってサポートされました。
Materials
| 0.9% Normal Saline | Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwan | – | |
| 10% neutral buffered formalin | Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan | 00002A | |
| Automatic biochemical analyzer | Hitachi Ltd., Tokyo, Japan | Labospect Series 008 | for determining glucose concentration |
| Chlorhexidine digluconate solution, 20% in H2O | Sigma-Aldrich, MO, USA | C9394 | diluted to 0.1% with 15% ethanol for injection |
| Ethanol | Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA | BAKR8006-05 | diluted to 15% with normal saline for working concentration |
| Glucose (Dianeal) | Baxter International, Inc., IL, USA | FNB9896 | Commercial dialysis solution (4.25%) |
| GraphPad Prism 8.0 | GraphPad Software, Inc., CA, US | ||
| L-type Glu 2 assay | FUJIFILM Wako, Japan | 461-32403 | |
| Xylazine 20 | Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, Taiwan | – | |
| Zoletil 50 | Virbac Laboratories, Carros, France | – |
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Cite This Article
Chang, M., Wang, H., Chen, L., Gao, J., Hung, S., Chiou, Y., Lee, Y. A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage. J. Vis. Exp. (182), e63903, doi:10.3791/63903 (2022).