Das vorliegende Protokoll etabliert ein Peritonealdialyse (PD)-Mausmodell der Chlorhexidingluconat (CG)-induzierten Peritonealfibrose. Das aktuelle Modell ist im Vergleich zu anderen PD-Tiermodellen einfach und leicht zu bedienen.
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Methodenartikel
Ein Mäusemodell der Chlorhexidingluconat-induzierten Peritonealschädigung
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Peritonealfibrose ist eine wichtige Komplikation der Peritonealdialyse (PD). Um dieses Problem zu untersuchen und anzugehen, ist ein geeignetes Tiermodell für Parkinson erforderlich. Das vorliegende Protokoll etabliert ein Chlorhexidingluconat (CG)-induziertes Peritonealfibrosemodell, das den Zustand eines Patienten mit Parkinson nachahmt. Die Peritonealfibrose wurde durch intraperitoneale Injektion von 0,1% CG in 15% Ethanol für 3 Wochen (jeden zweiten Tag verabreicht) induziert, insgesamt neunmal bei männlichen C57BL/6-Mäusen. Am 22. Tag wurden dann peritoneale Funktionstests durchgeführt. Nachdem die Mäuse getötet worden waren, wurden das parietale Peritoneum der Bauchdecke und das viszerale Peritoneum der Leber geerntet. Sie waren dicker und fibrotischer, wenn sie nach Massons Trichromfärbung mikroskopisch analysiert wurden. Die Ultrafiltrationsrate nahm ab und der Glukose-Stofftransport zeigte eine CG-induzierte Erhöhung der peritonealen Permeabilität an. Das so etablierte PD-Modell kann Anwendungen zur Verbesserung der PD-Technologie, der Wirksamkeit der Dialyse und der Verlängerung des Überlebens der Patienten haben.
Einleitung
Die Peritonealdialyse (PD) ist eine Form der Nierenersatztherapie. PD hat jedoch Probleme, die nicht gelöst werden können. Zum Beispiel kann eine langfristige Parkinson-Behandlung zu Peritonealschäden führen, die schließlich zum Versagen der Ultrafiltration und zum Absetzen der Behandlung führen 1,2,3,4,5,6. Die Peritonealfibrose ist eine der schwerwiegendsten Komplikationen 7,8. Die peritoneale Fibrose ist gekennz....
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Protokoll
Alle Mausversuche wurden vom Laboratory Animal Center des E-DA Hospital/ I-Shou University genehmigt und nach dem "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals" (NRC, USA 2011) durchgeführt. Männliche C57BL/6-Mäuse im Alter von 7-8 Wochen wurden für die vorliegende Studie verwendet.
1. Chemische Zubereitung
- Bereiten Sie den chemischen Reizstoff vor, indem Sie 0,1% Chlorhexidingluconat (CG, siehe Materialtabelle) in 15% Ethanol verdünnen.
2. Behandlung von Tieren
- Weisen Sie drei Mäuse als Kontrollgruppe zu. Führen Sie 3 Wochen lang je....
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Ergebnisse
In Abbildung 1A, B war das parietale Peritoneum der Bauchdecke unter der Masson-Trichromfärbung deutlich dicker und fibrotischer17, was darauf hindeutet, dass die Peritonealfibrose in der CG-exponierten Gruppe schwerer ist als in der Kontrollgruppe mit Kochsalzlösung (NS). In Abbildung 2A,B war das viszerale Peritoneum der Leberoberflächen ebenfalls deutlich dicker und fibrotischer, was beweist, dass die Peritonealfibrose.......
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Diskussion
In dieser Studie wird ein Maus-PD-Modell durch i.p. Injektion von CG, und die Ergebnisse zeigten Peritonealfibrose und funktionelle Verschlechterung in diesem Modell, was den Zustand des Parkinson-Patienten nachahmte.
Es gibt mehrere kritische Schritte im Protokoll. Zunächst muss für die Durchführung einer IP-Injektion von CG oder NS die Bauchwandhaut der Maus mit einer Pinzette aufgenommen werden, um eine punktionsbedingte intraperitoneale Organschädigung zu verhindern. Zweitens muss bei der .......
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Offenlegungen
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Danksagungen
Wir danken Shin-Han Tseng herzlich für die kritische Diskussion und teilweise Durchführung der Studie. Diese Studie wurde von EDAHP110003 und NCKUEDA110002 von der Research Foundation of E-DA Hospital und der National Cheng Kung University, Taiwan, unterstützt.
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Materialien
2
% neutrales gepuffertes Formalin Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan 00002A Automatischer biochemischer Analysator Hitachi Ltd., Tokio, Japan Labospect Serie 008 zur Bestimmung der Glukosekonzentration Chlorhexidin-Digluconat-Lösung, 20 % in H
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 0,9 % normale Kochsalzlösung | Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwan-10 | ||
| O | Sigma-Aldrich, MO, USA | C9394 | verdünnt auf 0,1 % mit 15 % Ethanol für Injektionszwecke |
| Ethanol | Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA | BAKR8006-05 | verdünnt auf 15 % mit normaler Kochsalzlösung für die Arbeitskonzentration |
| Glukose (dianeal) | Baxter International, Inc., IL, USA | FNB9896 | Kommerzielle Dialyselösung (4,25 %) |
| GraphPad Prism 8.0 | GraphPad Software, Inc., CA, US | ||
| L-Typ Glu 2 Assay | FUJIFILM Wako, Japan | 461-32403 | |
| Xylazin 20 | Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, Taiwan-Zoletil | ||
| 50 | Virbac Laboratories, Carros, Frankreich | - |
Referenzen
- Han, S. H., et al. Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center. Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).
- Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T.
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Nachdrucke und Genehmigungen
