En musmodell av klorhexidinglukonatinducerad peritoneal skada

Summary

Detta protokoll fastställer en peritonealdialys (PD) musmodell av klorhexidinglukonat (CG)-inducerad peritoneal fibros. Den nuvarande modellen är enkel och lätt att använda jämfört med andra PD-djurmodeller.

Abstract

Peritoneal fibros är en viktig komplikation av peritonealdialys (PD). För att undersöka och åtgärda detta problem krävs en lämplig djurmodell av PD. Detta protokoll etablerar en klorhexidinglukonat (CG) inducerad peritoneal fibrosmodell som efterliknar tillståndet hos en patient med PD. Peritoneal fibros inducerades genom intraperitoneal injektion av 0,1% CG i 15% etanol i 3 veckor (administrerad varannan dag), totalt nio gånger hos manliga C57BL / 6-möss. Peritoneala funktionstester utfördes sedan på dag 22. Efter att mössen offrades skördades bukväggens parietala bukhinnan och leverns viscerala peritoneum. De var tjockare och mer fibrotiska när de analyserades mikroskopiskt efter Massons trikromfärgning. Ultrafiltreringshastigheten minskade och glukosmasstransport indikerade en CG-inducerad ökning av peritoneal permeabilitet. Den sålunda etablerade PD-modellen kan ha tillämpningar för att förbättra PD-tekniken, dialyseffektiviteten och förlänga patientens överlevnad.

Introduction

Peritonealdialys (PD) är en typ av njurersättningsterapi. PD har dock problem som inte kan lösas. Till exempel kan långvarig PD-behandling orsaka peritoneal skada, vilket så småningom leder till ultrafiltreringsfel och utsättande av behandling 1,2,3,4,5,6. Peritoneal fibros är en av de allvarligaste komplikationerna ^7,8. Peritoneal fibros kännetecknas av avsättning och ackumulering av extracellulär matris inom interstitium och neo-angiogenes och vaskulopati i bukhinnan ^9,10.

De främsta orsakerna till dessa peritoneala förändringar är återkommande peritonit och icke-biokompatibilitet hos dialysatet, som är hyperosmotisk, hög glukos, lågt pH och glukosnedbrytningsproduktackumulering^11,12. Därför kan lämpliga djurexperimentella modeller hjälpa forskare att bättre studera bukhinnans fysiologiska och patologiska förändringar under PD-behandling. Därför är det viktigt att etablera en PD-modell för djur för att förbättra PD-tekniken och dialyseffektiviteten och förlänga patientens överlevnad. Denna studie syftade till att generera en PD-musmodell genom intraperitoneal (i.p.) injektion av klorhexidinglukonat (CG), som beskrivits tidigare^13,14. Denna PD-musmodell är enkel, lätt att använda och genomförbar jämfört med andra PD-djurmodeller.

Protocol

Alla musexperiment godkändes av Laboratory Animal Center vid E-DA Hospital / I-Shou University och hanterades enligt “Guide for the Care and Use of Laboratory Animals” (NRC, USA 2011). Möss av typen C57BL / 6, 7-8 veckor gamla, användes för den aktuella studien. 1. Kemisk beredning Förbered det kemiska irriterande ämnet genom att späda 0,1% klorhexidinglukonat (CG, se materialförteckning) i 15% etanol. …

Representative Results

I figur 1A,B var bukväggens parietala bukhinnan markant tjockare och mer fibrotisk under Massons trikromfärgning17, vilket indikerar att i den CG-exponerade gruppen är peritoneal fibros allvarligare än i kontrollsaltlösningsgruppen (NS). I figur 2A,B var leverytornas viscerala bukhinnan också markant tjockare och mer fibrotisk, vilket bevisar att i den CG-exponerade gruppen är peritoneal fibros svårare än i kontr…

Discussion

I denna studie presenteras en PD-modell hos möss genom i.p. injektion av CG, och resultaten visade peritoneal fibros och funktionell försämring i denna modell, vilket efterliknade PD-patientens tillstånd.

Det finns flera kritiska steg i protokollet. För det första, för att utföra en ip-injektion av CG eller NS, måste musens bukväggshud plockas upp med pincett för att förhindra punkteringsinducerad intraperitoneal organskada. För det andra, medan bukhinnans bukhinnan samlas in för…

Materials

0.9% Normal Saline	Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwan	–
10% neutral buffered formalin	Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan	00002A
Automatic biochemical analyzer	Hitachi Ltd., Tokyo, Japan	Labospect Series 008	for determining glucose concentration
Chlorhexidine digluconate solution, 20% in H2O	Sigma-Aldrich, MO, USA	C9394	diluted to 0.1% with 15% ethanol for injection
Ethanol	Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA	BAKR8006-05	diluted to 15% with normal saline for working concentration
Glucose (Dianeal)	Baxter International, Inc., IL, USA	FNB9896	Commercial dialysis solution (4.25%)
GraphPad Prism 8.0	GraphPad Software, Inc., CA, US
L-type Glu 2 assay	FUJIFILM Wako, Japan	461-32403
Xylazine 20	Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, Taiwan	–
Zoletil 50	Virbac Laboratories, Carros, France	–