Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biochemistry
Click here for the English version

Biochemistry

In vitro Digestion av emulsioner i en enda droppe via multi-subfasutbyte av simulerade gastrointestinala vätskor

Published: November 18, 2022 doi: 10.3791/64158
Automatic Translation
1, 2, 3, 1
1Department of Applied Physics, Faculty of Sciences, Campus de Fuentenueva, University of Granada, 2Department of Physical Chemistry, Faculty of Pharmacy, Campus de Cartuja, University of Granada, 3Department of Software Engineering, School of Computer and Telecommunication Engineering, Campus de Aynadamar, University of Granada

Summary

En hängande droppytafilmbalans implementerad med ett flerfasutbyte, smeknamnet OCTOPUS, möjliggör efterliknande matsmältningsförhållanden genom sekventiell subfasutbyte av den ursprungliga bulklösningen med simulerade gastrointestinala vätskor. Den simulerade matsmältningen in vitro övervakas genom att på plats registrera gränssnittsspänningen i det smälta gränsskiktet.

Abstract

Emulsioner används för närvarande för att kapsla in och leverera näringsämnen och läkemedel för att hantera olika gastrointestinala tillstånd som fetma, näringsbefästning, matallergier och matsmältningssjukdomar. Förmågan hos en emulsion att tillhandahålla den önskade funktionaliteten, nämligen att nå en specifik plats i mag-tarmkanalen, hämma / fördröja lipolys eller underlätta smältbarhet, beror i slutändan på dess mottaglighet för enzymatisk nedbrytning i mag-tarmkanalen. I olja-i-vatten-emulsioner omges lipiddroppar av gränssnittsskikt, där emulgeringsmedlen stabiliserar emulsionen och skyddar den inkapslade föreningen. Att uppnå en skräddarsydd smältbarhet av emulsioner beror på deras ursprungliga sammansättning men kräver också övervakning av utvecklingen av dessa gränsskikt eftersom de utsätts för olika faser av gastrointestinal matsmältning. En hängande droppytafilmbalans implementerad med ett utbyte med flera subfaser gör det möjligt att simulera in vitro-uppslutning av emulsioner i en enda vattendroppe nedsänkt i olja genom att tillämpa en anpassad statisk matsmältningsmodell. Transiteringen genom mag-tarmkanalen efterliknas av subfasutbytet av den ursprungliga droppbulklösningen med konstgjorda medier, vilket efterliknar de fysiologiska förhållandena i varje fack / steg i mag-tarmkanalen. Den dynamiska utvecklingen av gränsspänningen registreras in situ genom hela den simulerade gastrointestinala matsmältningen. De mekaniska egenskaperna hos smälta gränssnitt, såsom interfacial dilatationselasticitet och viskositet, mäts efter varje matsmältningsfas (oral, gastrisk, tunntarmen). Sammansättningen av varje matsmältningsmedia kan ställas in för att ta hänsyn till särdragen i matsmältningsförhållandena, inklusive gastrointestinala patologier och spädbarns matsmältningsmedier. De specifika gränssnittsmekanismerna som påverkar proteolys och lipolys identifieras, vilket ger verktyg för att modulera matsmältningen genom gränssnittsteknik av emulsioner. De erhållna resultaten kan manipuleras för att utforma nya livsmedelsmatriser med skräddarsydda funktioner som låg allergenicitet, kontrollerat energiintag och minskad smältbarhet.

Introduction

Att förstå hur fett smälts, vilket innebär emulsionssmältning, är viktigt för att rationellt utforma produkter med skräddarsydd funktionalitet1. Underlaget för fettsmältning är en emulsion eftersom fett emulgeras vid konsumtion genom mekanisk verkan och blandning med biosurfaktanter i munnen och magen. Dessutom är det mesta av det fett som konsumeras av människor redan emulgerat (som mjölkprodukter), och när det gäller spädbarn eller vissa äldre är detta den enda formen av konsumtion. Därför är utformningen av emulsionsbaserade produkter med specifika matsmältningsprofiler mycket viktig i näring1. Dessutom kan emulsioner kapsla in och leverera näringsämnen, läkemedel eller lipofila bioaktiva ämnen2 för att hantera olika gastrointestinala tillstånd som fetma3, näringsbefästning, matallergier och matsmältningssjukdomar. I olja-i-vatten-emulsioner omges lipiddroppar av gränssnittsskikt av emulgeringsmedel såsom proteiner, ytaktiva ämnen, polymerer, partiklar och blandningar4. Emulgeringsmedlens roll är tvåfaldig: stabilisera emulsionen5 och skydda/transportera den inkapslade föreningen till ett specifikt ställe. Att uppnå en skräddarsydd smältbarhet av emulsioner beror på deras ursprungliga sammansättning men kräver också övervakning av den kontinuerliga utvecklingen av detta gränssnitt under transiteringen genom mag-tarmkanalen (figur 1).

Figure 1
Figur 1: Tillämpa gränssnittsteknik av emulsioner för att hantera några av de viktigaste gastrointestinala tillstånden. Klicka här för att se en större version av denna figur.

Lipidsmältning är i slutändan en gränssnittsprocess eftersom det kräver adsorption av lipaser (magsäck eller bukspottkörtel) på olje-vattengränssnittet för emulgerade lipiddroppar genom gränsskiktet för att nå och hydrolysera triglyceriderna i oljan till fria fettsyror och monoacylglycerider6. Detta schematiseras i figur 2. Maglipas konkurrerar med pepsin och fosfolipider i magsäcken om gränssnittet mellan olja och vatten (figur 2, magsmältningen). Sedan, pankreas lipas / kolipas konkurrera med trypsin / chymotrypsin, fosfolipider, gallsalter, och matsmältningsprodukter i tunntarmen. Proteaser kan förändra gränssnittstäckningen, förhindra eller gynna lipasadsorption, medan gallsalter är mycket ytaktiva och förskjuter det mesta av det återstående emulgeringsmedlet för att främja lipasadsorption (figur 2, intestinal matsmältning). Så småningom beror lipolysens hastighet och omfattning på gränssnittsegenskaperna hos den initiala / gastriska smälta emulsionen, såsom tjockleken, inter / intramolekylära anslutningar och elektrostatiska och steriska interaktioner. Följaktligen erbjuder övervakning av utvecklingen av gränsskiktet när det smälts en experimentell plattform för att identifiera gränssnittsmekanismer och händelser som påverkar lipasadsorption och därmed lipidsmältning.

Figure 2
Figur 2: Schematiskt diagram som illustrerar gränssnittens roll i gastrointestinal lipidsmältning. Pepsinhydrolys förändrar gränssnittskompositionen vid magfasen, medan gastrlipas hydrolyserar triglycerider. I tunntarmen hydrolyserar trypsin/chymotrypsin ytterligare gränssnittsfilmen, medan lipolys fortskrider genom adsorption av BS/lipaser, hydrolys av triglycerider och desorption av lipolytiska produkter genom solubilisering i BS-miceller / komplexet. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Pendeldroppsutrustningen vid University of Granada (UGR) implementeras med en patenterad teknik, den koaxiella dubbelkapillären, som möjliggör subfasutbyte av bulklösningen7. Kapillären, som håller hängande droppen, består av ett arrangemang av två koaxialkapillärer som är oberoende anslutna till varje kanal i en dubbel mikroinjektor. Varje mikroinjektor kan fungera oberoende, vilket möjliggör utbyte av det tappade innehållet genom genomflöde7. Följaktligen består subfasutbytet av samtidig injektion av den nya lösningen med den inre kapillären och extraktionen av bulklösningen med den yttre kapillären med användning av samma flödeshastighet. Denna process möjliggör ersättning av bulklösningen utan störning av gränsområdet eller droppens volym. Denna procedur uppgraderades senare till ett flerfasutbyte, vilket möjliggör upp till åtta sekventiella subfasutbyten av droppbulklösningen8. Detta möjliggör simulering av matsmältningsprocessen i en enda vattenhaltig droppe suspenderad i lipidiska medier genom att sekventiellt utbyta bulklösningen med konstgjorda medier som efterliknar de olika facken (mun, mage, tunntarm). Hela installationen representeras i figur 3, inklusive detaljer om komponenterna. Sprutorna i mikroinjektorn är anslutna till de åtta viasventilerna, som var och en ansluter till ett mikrocentrifugrör som innehåller den konstgjorda matsmältningsvätskan med komponenter som beskrivs i figur 2.

Figure 3
Figur 3: Allmän bild av bläckfisken med alla komponenter. CCD-kameran, mikroskopet, mikrolägesställaren, termostabiliserad cell och dubbelkapillär ansluten oberoende till en dubbel mikroinjektor med två sprutor anslutna till åtta viasventiler. Varje spruta ansluts med kapillär, fyra mikrocentrifugrör med prov och en urladdning. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 4A visar hur var och en av de konstgjorda matsmältningsvätskorna injiceras i hänget droppe genom subfasutbyte genom dubbelkapillären. Varje matsmältningsförening som beskrivs i figur 2 kan appliceras samtidigt/sekventiellt och simulera passagen genom mag-tarmkanalen. De konstgjorda matsmältningsvätskorna innehåller olika enzymer och biosurfaktanter, som förändrar gränssnittsspänningen hos det initiala emulgeringsmedlet, enligt schemat i figur 4B. Programvaran DINATEN (se Materialförteckning), som också utvecklats vid UGR, registrerar utvecklingen av gränssnittsspänningen i realtid när det ursprungliga gränssnittsskiktet smälts in vitro. Efter varje matsmältningsfas beräknas också dilatationselasticiteten hos det interfaciala skiktet genom att införa periodiska svängningar av volym / gränssnittsområde på det stabiliserade gränssnittsskiktet och registrera svaret på gränssnittsspänningen. Perioden/frekvensen och amplituden för oscillationen kan varieras, och bildbehandling med programvaran CONTACTO tillhandahåller de dilatationella reologiska parametrarna8.

Figure 4
Figur 4: Exempel på rötningsprofiler . (A) Det ursprungliga emulgeringsskiktet utsätts för artificiella matsmältningsmedier placerade i mikrocentrifugen genom sekventiellt subfasutbyte av de olika lösningarna i hängdroppen. (B) Den allmänna utvecklingen av gränssnittsspänningen (y-axeln) hos det ursprungliga emulgeringsmedlet som en funktion av tiden (x-axeln) när den smälts in vitro av de olika enzymerna/biosurfaktanterna i det artificiella mediet. Ett slutligt subfasutbyte med vanlig tarmvätska mäter desorptionen av smält lipid genom solubilisering i blandade miceller . Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Denna studie presenterar det allmänna protokollet som är utformat för att mäta in vitro-matsmältning av gränssnittsskikt med hängande dropputrustning9. Det initiala gränssnittsskiktet utsätts sekventiellt för förhållanden som efterliknar passagen genom mag-tarmkanalen, som visas i figur 2. Dessa olika matsmältningsmedier injiceras i hängdroppen genom subfasutbyte av de olika lösningarna i mikrocentrifugrören (figur 4A). Sammansättningen av dessa medier kan anpassas beroende på de gastrointestinala förhållanden som kommer att utvärderas, nämligen mag-/tarmproteolys/lipolys, vilket möjliggör mätning av kumulativa effekter och sinergies10. De experimentella betingelserna som används för att efterlikna matsmältningsprocessen i varje fack följer det internationella konsensusprotokollet som publicerats av INFOGEST som beskriver pH och mängder elektrolyter och enzymer11. Den experimentella anordningen baserad på hängande droppe möjliggör inspelning av gränssnittsspänningen på plats under hela den simulerade matsmältningsprocessen. Mellanskiktets dilatationella reologi beräknas i slutet av varje matsmältningssteg. På detta sätt erbjuder varje emulgeringsmedel en matsmältningsprofil som illustrerar egenskaperna hos de smälta gränssnitten, som visas i figur 4B. Detta möjliggör extraktion av slutsatser om dess mottaglighet eller resistens mot de olika stadierna i matsmältningsprocessen. I allmänhet innehåller det artificiella matsmältningsmediet syra / basiskt pH, elektrolyter, proteaser (mag- och tarm), lipaser (mag- och tarm), gallsalter och fosfolipider, som löses i sina respektive matsmältningsvätskor (mag- eller tarm). Figur 4B visar en generisk profil av utvecklingen av ett emulgeringsmedels gränssnittsspänning, först utsatt för proteasverkan, följt av lipaser. I allmänhet främjar proteolys av gränsskiktet en ökning av gränssnittsspänningen på grund av desorptionen av hydrolyserade peptider9,12, medan lipolys resulterar i en mycket brant minskning av gränssnittsspänningen på grund av adsorptionen av gallsalter och lipaser 13. Ett slutligt subfasutbyte med tarmvätska utarmar bulklösningen av oadsorberat / smält material och främjar desorptionen av lösliga föreningar och solubiliseringen av smälta lipider i blandade miceller. Detta kvantifieras genom den ökade gränssnittsspänningen som registrerats (figur 4B).

Sammanfattningsvis möjliggör den experimentella designen som implementeras i hängande droppe för att simulera in vitro-matsmältning i en enda droppe att mäta kumulativa effekter och synergier när matsmältningsprocessen appliceras sekventiellt på det initiala gränssnittsskiktet10. Sammansättningen av varje matsmältningsmedium kan enkelt ställas in för att ta hänsyn till särdragen i matsmältningsförhållandena, inklusive gastrointestinala patologier eller spädbarns matsmältningsmedier14. Därefter kan identifiering av gränssnittsmekanismerna som påverkar proteolys och lipolys användas för att modulera matsmältningen genom gränssnittsteknik av emulsioner. De erhållna resultaten kan tillämpas vid utformning av nya livsmedelsmatriser med skräddarsydda funktioner såsom låg allergenicitet, kontrollerat energiintag och minskad smältbarhet 15,16,17,18,19.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Rengöringssekvens för alla glasvaror som används i ytvetenskapliga experiment

  1. Skrubba glaset med en koncentrerad rengöringslösning (se materialtabell) utspädd i vatten (10%).
  2. Skölj noggrant med en sekvens av kranvatten, propanol, destillerat vatten och ultrarent vatten. Torka i en stuga och förvara i ett slutet skåp tills det används.

2. Beredning av prov

  1. Förbered artificiella matsmältningsmedier enligt INFOGEST-standardiserade protokoll11,20 (se materialförteckning). För närmare uppgifter, se tabell 1 och inkludera små anpassningar till kraven för gränssnittsarbetet för att förhindra ytaktiv kontaminering och utspädning av prover (1:10)10.
  2. Förbered emulgeringslösningen enligt stegen nedan.
    1. Bered 0,01 liter av en koncentrerad lösning av (1 kg· L−1) emulgeringsmedel eller en blandning av emulgeringsmedel (se materialförteckning) i en initial buffert (tabell 1) och förvaras under mild omrörning över natten.
    2. Späd till 0,1 kg· L−1 (eller efter behov) för att mätta gränssnittet; nå en pseudoplatå i gränssnittsspänningen efter 1 h adsorption vid ett konstant gränssnittsområde efter den tidigare publicerade rapporten21.
    3. Håll under mild omrörning i 15 min före användning.
  3. Rena oljefasen.
    1. Förbered en blandning av vegetabilisk olja (solros, oliv, triolein, etc.) och magnesiummetasilikathartser (se materialtabell) i en andel av 2:1 w/w i en stor bägare. Håll under mild mekanisk omrörning i minst 3 timmar.
    2. Centrifugera blandningen vid 8 000 x g i 30 minuter vid rumstemperatur i en kommersiell centrifug (se materialförteckning).
    3. Filtrera oljeblandningen under vakuum med ett sprutfilter (0,2 μm porstorlek) (se Materialförteckning). Förvara i rena bärnstensfärgade flaskor förseglade och bubblade med kväve tills de används.

3. Kalibrering och rengöring av bläckfisken

  1. Skölj alla slangar med ultrarent vatten genom att ställa in en sekvens för rengöring av både sprutor och alla ventiler genom en kapillär (ventiler 6/4) och till den yttre utgången (ventil 8-blå färg). Utför detta genom att trycka på knappen Rensa i den vänstra dialogrutan (kompletterande figur 1A).
  2. Kontrollera ytspänningen7 för vatten vid rumstemperatur genom att bilda en vattendroppe och mäta i realtid i 5 min (kompletterande figur 1B, C).
    1. Ställ in differentialdensiteten på luft-vatten (0,9982 kg· L−1) i den vänstra dialogrutan, kompletterande figur 1B.
  3. Fyll den rena kyvetten (optiskt glas) med 0,002 L ren vegetabilisk olja och placera den i kyvetthållaren i den termostatiska cellen (figur 3).
  4. Ställ in termostaten och tillåt temperaturjämvikt vid 37 °C.
  5. Kontrollera gränssnittsspänningen för vattenolja vid rumstemperatur7.
    1. Ställ in differensdensiteten på vegetabiliskt oljevatten (olivolja: 0,800 kg · L−1) (kompletterande figur 1C).
    2. Injicera 40 μl med en hastighet av 0,5 μl·s−1 och mät i realtid varje sekund fram till slutet av injektionen. Detta är en enkel dynamisk process (kompletterande figur 1B, D).
    3. Plotta gränssnittsspänningen som en funktion av droppvolymen i ett datablad.
    4. Kontrollera att droppvolymintervallet ger ett värde för gränssnittsspänningen oberoende av droppvolymen. Plotta gränssnittsområdet som en funktion av droppvolymen.
    5. Programmera en process som innehåller två steg (kompletterande figur 1B och kompletterande figur 2A) enligt stegen nedan.
      1. Med en inre spruta, injicera en volym som finns inom detta intervall av konstant gränssnittsspänning.
      2. Håll gränssnittsområdet konstant vid det värde som valts i steg 3.5.4 och registrera gränssnittsspänningen i 5 min7.

4. Programmering av en experimentell process i DINATEN för varje matsmältningssteg

OBS: För processparametrarna, se kompletterande figur 1B.

  1. Utför den första kontrollen.
    1. För droppbildning, injicera 10 μl (±5 μl) emulgeringslösning i kapillären (ventil 6) (kompletterande figur 2A).
    2. Registrera adsorptionen vid en konstant gränssnittsarea21 av 20 mm2 (±10 mm2) i 1 timme (kompletterande figur 2B).
    3. Anteckna dilatationsreologin8 (kompletterande figur 2C).
      1. Ställ in oscillationens amplitud till 1,25 μL, period 10 s.
      2. Registrera adsorptionen vid det valda gränssnittsområdet (steg 4.1.2) i 10 s.
      3. Upprepa steg 4.1.3 vid olika perioder: 5 s, 20 s, 50 s och 100 s.
  2. Spela in gastrisk matsmältning.
    1. Registrera adsorptionen21 vid det valda gränssnittsområdet i 10 s.
    2. Subfasutbyte7 med vätska i ventil 2 (sSGF) och gastriska enzymer (tabell 1) (tilläggsfigur 2D).
      1. Fyll den vänstra sprutan från ventil 2. Injicera 125 μL i ventil 6-kapillär med vänster spruta vid 5 μL·s−1.
      2. Extrahera 125 μL ur kapillären med rätt spruta vid 5 μL·s−1. Lossa den högra sprutan för att lämna ventil 8. Upprepa steg 4.2.2.1-4.2.2.2 10 gånger för att säkerställa fullständigt utbyte.
    3. Registrera adsorptionen21 vid det valda gränssnittsområdet i steg 4.1.2 i 1 timme (tilläggsfigur 2B).
    4. Anteckna dilatationsreologin8 (kompletterande figur 2C).
      1. Ställ in oscillationens amplitud till 1,25 μL, period 10 s.
      2. Registrera adsorptionen för det valda gränssnittsområdet i steg 4.1.2 i 10 s. Upprepa vid olika perioder: 5 s, 20 s, 50 s, 100 s.
  3. Spela in intestinal matsmältning.
    1. Registrera adsorptionen21 vid det valda gränssnittsområdet i steg 4.1.2 i 10 s (kompletterande figur 2B).
    2. Subfasutbyte7 med vätska i ventil 3 (sSIF) och tarmenzymer/gallsalter/fosfolipider (tabell 1) (tilläggsfigur 2D).
      1. Fyll den vänstra sprutan från ventil 2. Injicera 125 μL i ventil 6-kapillär med vänster spruta vid 5 μL·s−1. Extrahera 125 μL ur kapillären med rätt spruta vid 5 μL·s−1.
      2. Lossa den högra sprutan för att lämna ventil 8. Upprepa steg 4.3.2.1-4.3.2.2 10 gånger för att säkerställa fullständigt utbyte.
    3. Registrera adsorptionen21 vid det valda gränssnittsområdet i steg 4.1.2 i 1 timme.
    4. Anteckna dilatationsreologin8 (kompletterande figur 2C).
      1. Ställ in oscillationens amplitud till 1,25 μL, period 10 s.
      2. Registrera adsorptionen vid det valda gränssnittsområdet i steg 4.1.2 i 10 s.
      3. Upprepa vid olika perioder: 5 s, 20 s, 50 s, 100 s.
  4. Spela in desorptionen enligt stegen nedan.
    1. Registrera adsorptionen21 vid det valda gränssnittsområdet i steg 4.1.2 i 10 s (kompletterande figur 2B).
    2. Subfasutbyte7 med vätska i ventil 5 (sSIF) (tabell 1, tilläggsfigur 2D).
      1. Fyll den vänstra sprutan från ventil 5. Injicera 125 μL i ventil 5-kapillär med vänster spruta vid 5 μL·s−1.
      2. Extrahera 125 μL ur kapillären med rätt spruta vid 5 μL·s−1. Lossa den högra sprutan för att lämna ventil 8. Upprepa steg 4.4.2.1–4.4.2.2 10 gånger för att säkerställa fullständigt utbyte.
    3. Registrera adsorptionen21 vid det valda gränssnittsområdet i steg 4.1.2 i 1 timme (tilläggsfigur 2B).
    4. Anteckna dilatationsreologin8 (kompletterande figur 2C).
      1. Behåll amplituden på 1,25 μL, period 10 s.
      2. Registrera adsorptionen vid det valda gränssnittsområdet i steg 4.1.2 i 10 s.
      3. Upprepa steg 4.4.4 vid olika perioder: 5 s, 20 s, 50 s, 100 s.

5. Ställa in experimentet

  1. Fyll mikrocentrifugrören med det konstgjorda matsmältningsmediet och anslut var och en av dem till respektive ventil med motsvarande slang.
  2. Fyll slangen i ventilerna 2-5 genom att rengöra från ventil 2, ventil 3, ventil 4 och ventil 5 till den yttre utgången (ventil 8) (kompletterande figur 1A).
  3. Fyll slangen i ventil 1 genom att rengöra från ventil 1 till ventil 6-kapillär 5 gånger.
  4. Placera kapillären i oljefasen. Ladda den vänstra sprutan med ventil 1 (initial lösning, tabell 1).
  5. Börja sekventiellt bearbeta steg 4.1-initialt, steg 4.2-mag-, steg 4.3-tarmar och steg 4.4-desorption, spara data i slutet av varje process.

6. Beräkning av dilatationella reologiska parametrar med bildbehandlingsprogrammet CONTACTO8

OBS: För mer information, se Maldonado-Valderrama et al.8.

  1. Ladda bilderna som motsvarar areaoscillationen vid en given frekvens och amplitud (kompletterande figur 3A).
  2. Tryck på Reologi (kompletterande figur 3B) och få dilatationsparametrarna (tilläggsfigur 3C).
  3. Kopiera och klistra in resultaten i datauppslagsbladet.

7. Plottning av experimentella resultat

  1. Beräkna om tidskolumnen i vart och ett av stegen i matsmältningsprocessen genom att lägga till de sista uppgifterna för tiden för föregående steg.
  2. Plotta gränssnittsspänningen kontra tillsatstiden för vart och ett av stegen i matsmältningsprocessen som används.
  3. Plotta den slutliga gränssnittsspänningen / dilatationselasticiteten och viskositeten som erhålls i slutet av varje steg jämfört med matsmältningsfasen: initial, gastrisk matsmältning, duodenal matsmältning och desorption.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Detta avsnitt visar olika exempel på rötningsprofiler uppmätta med bläckfisken. Det allmänna utseendet på de simulerade matsmältningsprofilmatchningarna visas i figur 4B. Gränssnittsspänningen representeras vanligtvis mot tiden i matsmältningsprofilen. De olika faserna/matsmältningsstegen som beaktas representeras i olika färger. Den första fasen bildar det initiala skiktet och motsvarar adsorptionsfasen för emulgeringsmedlet eller proteinet/ytaktivt ämne/polymeren, beroende på varje enskilt fall. Därefter injiceras de olika matsmältningsvätskorna genom subfasutbyte i en bulklösning som innehåller det nya mediet. Den nya delfasen ger förändringar i gränssnittsspänningen hos det initiala emulgeringsskiktet och i dilatationsreologin mätt i slutet av varje matsmältningssteg. Matsmältningsprocessen kan omfatta högst åtta matsmältningssteg.

Figure 5
Figur 5: Exempel på gastriska matsmältningsprofiler . (A) Gastrisk proteolys av humant serumalbumin. Matsmältningsmedier appliceras genom subfasutbyte med lösningar som beskrivs i experimentavsnittet vid T = 37 °C. Blå: initial buffert med protein, röd: sSGF med pepsin. Omtryckt med tillstånd från del Castillo-Santaella et al.12. B) Maglipolys av citruspektin. Matsmältningsmedier appliceras genom subfasutbyte med lösningar som beskrivs i experimentavsnittet vid T = 37 °C. Blå: initial buffert med citruspektin, gul: sSGF med maglipas, grå: sSGF. Omtryckt med tillstånd från Infantes-Garcia et al.17. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 5 visar några experimentella resultat som erhållits för gastrisk matsmältning av emulgeringsmedel. I figur 5A adsorberas humant serumalbumin (HSA)12 först på gränssnittet mellan olivolja och vatten, vilket minskar gränssnittsspänningen för att nå en platå efter 1 timme. I slutet av denna fas mäts reologin vid 0, 1 Hz (10 s) frekvens (period). I det andra steget läggs sSGF med pepsin till genom subfasutbyte. Detta består av att införa en volym med en spruta medan man extraherar samma volym med den andra sprutan. På detta sätt förändras inte droppens yta, vilket upprätthåller de irreversibelt adsorberade komponenterna vid olje-vattengränssnittet. Utbytet upprepas mellan 10-15 gånger. Under subfasutbyte med sSGF och pepsin ökar gränssnittsspänningen på grund av hydrolys av proteinet, vilket spädar ut det ursprungliga proteinskiktet (figur 5A). I figur 5B adsorberas citruspektin (CP)17 på triglyceridoljevattnet i 40 minuter, följt av dilatationsreologi vid 0,1 Hz. I det andra steget injiceras sSGF med gastrisk lipas i huvuddelen av droppen; Omvänt till proteolys resulterar lipolys i adsorption av lipas och bildandet av fettsyror, som förblir vid gränssnittet, vilket minskar gränssnittsspänningen. Desorptionsfasen är det tredje steget, som bedömer produktionen av hydrofil eller solubilisering av lipofila produkter av lipolys. Figur 5B visar att subfasutbyte med sSGF ger ett nollsvar av gränssnittsspänningen. Detta kan tolkas som produktion av lipofila matsmältningsprodukter, som adsorberar irreversibelt och inte lösligen, förblir förankrade vid gränssnittet. Frånvaron av gallsalter i magfasen är ansvarig för bristen på solubilisering. Graden av lipolys kan kvalitativt analyseras av värdet av interfacial spänning som uppnåtts.

Figure 6
Figur 6: Exempel på tarmens matsmältningsprofiler . (A) Adsorptions-desorptionsprofiler av gallsalter (svarta rutor), lipas (grå trianglar) och lipas + gallsalter (orange romboider) i sSIF vid 37 °C. Omtryckt med tillstånd från Macierzanka et al.13. (B) Adsorption av gallsalter + lipas på tidigare adsorberad F68 (mörkgrön) och F127 (ljusgrön), adsorption av gallsalter (gul) i sSIF. Desorption: subfasutbyte med sSIF på gallsalter (orange), F68 (mörklila) och F127 (ljuslila). Omtryckt med tillstånd från Torcello-Gómez et al.19. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 6 visar de experimentella resultaten som erhållits för intestinal matsmältning av emulgeringsmedel. Till skillnad från magsmältningen erbjuder närvaron av gallsalter i tunntarmen olika desorptionsprofiler vid subfasutbyte med sSIF och utarmning av bulklösningen. Figur 6A visar de desorptionsprofiler som erhållits för rena gallsalter, rent lipas och blandade lipas-/gallsalter 8,9,10,13. Gallsalter adsorberas reversibelt på olje-vatten-gränssnittet, och därför desorberas de fullständigt vid subfasutbyte med sSIF, vilket indikeras av ökningen av gränssnittsspänningen för att nå värdet på det nakna olje-vatten-gränssnittet 8,13. Omvänt adsorberar lipas irreversibelt, vilket ges av det konstanta värdet av gränssnittsspänning efter subfasutbyte av sSIF. Blandningen lipas och gallsalter ger en mellanliggande desorptionsprofil kvantifierad genom en begränsad ökning av gränssnittsspänningen vid subfasutbyte av sSIF till ett mellanvärde. Det återstående gränssnittsskiktet innehåller lipas och fria fettsyror. Gallsalterna desorberades möjligen från gränssnittet och solubiliserade några av de fria fettsyrorna som bildades i lipolysen. Figur 6B visar utvecklingen av gränssnittsspänningen vid lipolys av två varianter av Pluronic: F127 och F6819. Figur 6B visar en kraftig minskning av gränssnittsspänningen på grund av adsorptionen av lipas- och gallsalter och produktionen av fria fettsyror på tidigare bildade gränssnittsfilmer av F68 och F127 vid gränssnittet mellan olja och vatten. Desorptionssteget visar den ökade gränssnittsspänningen orsakad av subfasutbyte med sSIF, som kvantifierar solubiliseringen av lipolytiska produkter.

Figure 7
Figur 7: Exempel på fullständiga dynamiska gastrointestinala matsmältningsprofiler . (A) In vitro-uppslutningsprofil för AS-48-adsorberad film vid gränssnittet mellan luft och vatten. Matsmältningsmedier appliceras genom subfasutbyte med lösningar som beskrivs i experimentavsnittet vid T = 37 °C. Kontroll: initial buffert med AS-48, pepsin: sSGF med pepsin, trypsin: sSIF med trypsin + chymotrypsin, desorption: sSIF. Omtryckt med tillstånd från del Castillo-Santaella et al.18. B) In vitro-uppslutningsprofil för adsorberade filmer av serumalbumin från människa och nötkreatur vid gränssnittet mellan olivolja och vatten. Matsmältningsmedier appliceras genom subfasutbyte med lösningar som beskrivs i experimentavsnittet vid T = 37 °C. Kontroll: initial buffert med HSA/BSA, pepsin: sSGF med pepsin, trypsin: sSIF med trypsin + chymotrypsin, lipolys: sSIF med lipas och gallsalter, desorption: sSIF. Plottade kurvor är representativa experiment med avvikelser <5%. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 7 visar exempel på fullständiga simulerade matsmältningsprofiler. Figur 7A visar rötningsprofilen för livsmedelsbiokonserveringsmedlet AS-48 som adsorberats vid gränssnittet mellan luft och vatten18. Matsmältningsprocessen var utformad för att fokusera på proteolysen av denna peptid, medan lipolysen av olja inte behövdes, vid luft-vattengränssnittet. Därför består den simulerade matsmältningen i figur 7A av fem steg: kontroll/initial film, pepsinolys, trypsinolys och desorption. De experimentella resultaten visade att denna bakteriocin är resistent mot både pepsin- och trypsinhydrolys eftersom ytspänningen förblev oförändrad. Följaktligen ansågs AS-48 vara ett bra livsmedelsbiokonserveringsmedel som var resistent mot in vitro-matsmältning. I figur 7B jämförs rötningsprofilerna in vitro för adsorberade lager av humana och bovina serumalbuminer som adsorberats vid gränssnittet mellan olja och vatten22. Denna simulering utformades för att efterlikna smältbarheten av emulsioner stabiliserade av dessa två proteiner23 och utvärdera inkapslingen av curcumin4. Därför anpassades den simulerade matsmältningen bestående av fem steg: kontroll / initial, pepsinolys, trypsinolys, lipolys och desorption. De experimentella resultaten visade ökad gränssnittsspänning efter pepsindigestion, vilket indikerar ökad mottaglighet för pepsinolys. Detta tillskrevs ökad utveckling av den bovina varianten vid adsorption, vilket exponerade pepsinkänsliga platser. Därefter gav trypsinolys och lipolys helt liknande matsmältningsprofiler (figur 7B).

Figure 8
Figur 8: Exempel på slutliga värden på gastrointestinal matsmältning. A) Gränssnittsspänning. B) dilatationselasticitet, C) dilatationsviskositet vid matsmältning in vitro av β-laktoglobulinadsorberad film vid gränssnittet mellan olivolja och vatten. Dilatationsparametrarna mättes vid 1 Hz, 0,1 Hz och 0,01 Hz efter att det smälta gränssnittet var jämställt i varje steg. Matsmältningsmedier appliceras genom subfasutbyte med lösningar som beskrivs i experimentavsnittet vid T = 37 °C. Kontroll: initial buffert med protein, pepsin: sSGF med pepsin, trypsin: sSIF med trypsin + chymotrypsin, lipolys: sSIF med lipas och gallsalter, desorption: sSIF. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

I allmänhet, för att utvärdera och jämföra arten av olika smälta gränssnittsskikt, plottas den slutliga gränssnittsspänningen och den dilatationselasticitet / viskositet som erhålls för smälta gränssnitt för vart och ett av de steg som beaktas i den utformade matsmältningsprocessen. Figur 8 visar gränssnittsspänningen (figur 8A), dilatationselasticiteten (figur 8B) och dilatationsviskositeten (figur 8C), mätt vid frekvenserna 1 Hz, 0,1 Hz och 0,01 Hz. De plottade värdena erhölls efter varje matsmältningssteg av β-laktoglobulin adsorberat vid olje-vattengränssnittet16. Figur 8A visar att proteolys (pepsin och trypsin) ger små ökningar av gränssnittsspänningen, medan lipolys minskar detta värde och desorptionen ökar igen. När det gäller dilatationselasticitet bildar proteinet elastiska och sammankopplade filmer vid olje-vattengränssnittet. Närvaron av gallsalter producerar mycket mobila och flytande gränssnittsfilmer med låg elasticitet. Slutligen kan de återstående lipolytiska produkterna inte utveckla en sammanhängande elastisk film efter desorption. Dilatationselasticiteten ökar något med svängningsfrekvensen (figur 8B). Slutligen är dilatationsviskositeten hos gränssnittsfilmerna som visas i figur 8C endast detekterbar vid den lägre frekvensen och detekterar förekomsten av flerskikt, aggregat eller andra dissipativa strukturer vid gränssnittet. Jämförelse av matsmältningsprofilen för β-laktoglobulin med matsmältningsprofilen erhållen för pulsbehandlad β-laktoglobulin visade förbättrad smältbarhet hos proteiner som utsattes för denna typ av fysisk behandling16.

Inledande buffert 0,00113 mol L-1 NaH2PO4, pH 7,0
Förenklad simulerad magvätska (sSGF) [NaH2PO4] = 0,00113 mol L-1, [NaCl] = 0,15 mol L-1, pH 3,0
Förenklad simulerad tarmvätska (sSIF) [NaH2PO4] =0,00113 mol L-1, [NaCl] = 0,15 mol L-1, [CaCl2] = 0,003 mol L-1, pH 7,0
Gastriska enzymer pepsin (50 ∙ 10 3 U L-1), gastrisk lipas (0,5 ∙ 103 U L-1)
Intestinala enzymer trypsin (2,5 ∙ 10 3 U L-1), chymotrypsin (0,625 ∙ 10 3 U L-1), pankreaslipas (50∙ 10 3 U L-1), co-lipas (150 ∙ 10 3 U L-1)
Gallsaltblandning 0,01 mol L-1 M. Gallsaltblandning: natriumtaurokolat och natriumdeoxikolat (50/50) eller natriumtaurokolat och natriumglykodoxikolat (50/50)

Tabell 1: Sammansättning av det artificiella matsmältningsmediet.

Kompletterande figur 1: Grundläggande funktioner i datorgränssnittet DINATEN. A) Datorgränssnittet DINATEN:s allmänna utseende. Den vänstra dialogrutan visar de två sprutorna som är anslutna till alla ventiler och styr injektionen/utsugningen och rengöringen. Den centrala dialogrutan innehåller kommandot, släppbilden och tabellen med resultat. (B) Realtidsberäkningen ger automatisk mätning som en funktion av tiden. (C) Vänsterkommando för att inkludera differentialdensiteten. (D) En enkel dynamisk process styr injektions-/extraktionsvolymen, hastigheten och infångningstiderna. Klicka här för att ladda ner den här filen.

Kompletterande figur 2: Gränssnittet för programmering av varje matsmältningssteg (process). (A) Droppbildning med en vänster spruta med fast volym och fast injektionshastighet. (B) Adsorption vid konstant gränssnittsområde: kontroll. (C) Reologi med en fast amplitud, period och antal cykler. (D) Utbyte under fas: injicera och extrahera med båda sprutorna i samma hastighet. Klicka här för att ladda ner den här filen.

Kompletterande figur 3: Beräkning av dilatationsparametrarna med programvaran för bildanalys CONTACTO. (A) Analys av de bilder som motsvarar svängningen vid en bestämd period. (B) Beräkning av dilatationsparametrarna för gränssnittsskiktet för de valda bilderna. (C) Dialogruta som visar resultaten från dilatationsanalysen. Klicka här för att ladda ner den här filen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Den här artikeln beskriver ett generaliserat protokoll för att mäta in vitro-matsmältning av gränssnittsskikt med hjälp av hängande dropputrustning. Protokollet kan anpassas till experimentets specifika krav genom att ställa in sammansättningen av matsmältningsbuffertarna, som är baserade på det harmoniserade protokollet INFOGEST11,20 för att underlätta jämförelse med litteratur. Matsmältningsenzymerna och biosurfaktanterna kan tillsättas individuellt, sekventiellt eller tillsammans. Detta senare alternativ måste genomföras med försiktighet eftersom mättnaden av gränsskiktet skulle hindra de olika fenomenen genom att bara ge en mycket låg gränssnittsspänning och kan få droppen att falla. För att kunna analysera effekten av varje matsmältningskomponent tillsätts de olika matsmältningsenzymerna sekventiellt och i olika koncentrationer. På detta sätt kan effekterna av varje komponent analyseras och systematiseras, och synergierna utvärderas genom sekventiell addition. För att förhindra att dropparfaller späds vissa koncentrationer 9. De erhållna resultaten kan inte direkt extrapoleras till emulgerade system eftersom villkoren justeras för att ta hänsyn till ett förenklat system. Utvecklingen av gränssnittsspänningen visar emellertid utvecklingen av gränssnittstäckningen när gränsskiktet smälts10. På samma sätt ger utvecklingen av dilatationsreologin viss information om gränssnittets mekaniska egenskaper när matsmältningen fortskrider9. Dessa resultat innehåller användbar information som kan anpassas och noggrant tolkas för att tillämpas på emulgerade system.

Hängdroppsutrustningen gör det möjligt att utvärdera in situ-händelser som inträffar specifikt vid gränsskiktet, som visas i figur 2. Först bildas ett initialt gränsskikt som representerar en enda emulsionsdroppe. Detta initiala skikt utsätts för olika matsmältningsförhållanden och ändrar dess sammansättning sekventiellt på grund av närvaron av de olika komponenterna i vattenfasen. Lipaser måste också övervinna detta gränsskikt för att komma åt oljefasen och hydrolysera fettet. Dessa gränssnittshändelser måste utvärderas vid samma gränssnittsskikt som ursprungligen skapades. Att utsätta en emulsion för matsmältning in vitro skulle möjliggöra provtagning vid olika tidpunkter och utvärdering av förändringarna i emulsionen när den smälts (droppstorlek, zetapotential), men det skulle inte tillåta in situ-utvärdering av det gränsöverskridande skiktet som omger varje emulsionsdroppe. Därför består hängdroppsutrustningen som implementeras med flerfasutbyte en kompletterande teknik för att fokusera på gränssnittstekniken för emulsioner14.

Den första begränsningen av denna metod är exakt relaterad till mättnaden av gränsskiktet med diverse produkter, som måste spädas för att förhindra att droppen faller. En annan experimentell fråga är förgasningen av alla konstgjorda medier för att undvika kärnbildning av bubblor, vilket också kan orsaka droppavskiljning från kapillären. Det är också viktigt att ta hänsyn till det större olje-vattenförhållandet jämfört med emulsionssystem vid extrapolering till emulgerade system. Slutligen, även om dilatationsreologin innehåller information om de inter- och intramolekylära föreningarna inom gränsskiktet, bildade och störda av matsmältningsenzymer, är det svårt att tolka och extrapolera till emulsionsstabilitet. Sammantaget är hängdroppen som implementeras med en utbytesanordning med flera subfaser en användbar utrustning för att komplettera in vitro-matsmältningsstudier av emulsioner 12, som följer utvecklingen av droppstorleksfördelning och zetapotentialen för proteinsmältning med elektrofores22. Modifieringar av matsmältningskanalen för att ta hänsyn till könsvariation, spädbarns matsmältning eller matsmältningsproblem omfattar framtida tillämpningar av experimentproceduren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna förklarar att de inte har några kända konkurrerande ekonomiska intressen eller personliga relationer som kan ha påverkat det arbete som rapporteras i detta dokument.

Acknowledgments

Denna forskning finansierades av projekten RTI2018-101309-B-C21 och PID2020-631-116615RAI00, finansierade av MCIN/AEI/10.13039/501100011033 och av "ERUF Ett sätt att skapa Europa". Detta arbete stöddes (delvis) av Biocolloid and Fluid Physics Group (ref. PAI-FQM115) vid universitetet i Granada (Spanien).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Alpha-chymotrypsin from bovine pancreas Sigma-Aldrich C4129 Enzyme
Beta-lactoglobulin Sigma-Aldrich L0130 Emulsfier
Bovine Serum Albumin Sigma-Aldrich 9048-46-8 Emulsfier
CaCl2 Sigma-Aldrich 10043-52-4 Electrolyte
Centrifuge Kronton instruments Centrikon T-124 For separating oil and resins
Citrus pectin Sigma-Aldrich P9135 Emulsfier
co-lipase FROM PORCINE PANCREAS Sigma C3028 Enzyme
CONTACTO University of Granada (UGR) https://core.ugr.es/dinaten/, last access: 07/18/2022
DINATEN University of Granada (UGR) https://core.ugr.es/dinaten/, last access: 07/18/2022
Gastric lipase Lipolytech RGE15-1G Enzyme
Human Serum Albumin Sigma-Aldrich 70024-90-7 Emulsifier
INFOGEST http://www.proteomics.ch/IVD/
Lipase from porcine pancreas, type II Sigma-Aldrich L33126 Enzyme
Magnesium metasilicate resins Fluka 1343-88-0 Resins to purify oil
Micro 90 International products M-9051-04 Cleaner
NaCl Sigma 7647-14-5 Electrolyte
NaH2PO4 Scharlau 10049-21-5 To prepare buffer
OCTOPUS Producciones Científicas y Técnicas S.L. (Gójar, Spain) Pendandt Drop Equipment implemented with multi subphase exchange
Olive oil Sigma-Aldrich 1514 oil
Pancreatic from porcine pancreas Sigma P7545-25 g Enzyme
Pepsin Sigma-Aldrich P6887 Enzyme
Pluronic F127 Sigma P2443 Emulsifier
Pluronic F68 Sigma P1300 Emulsfier
Sodium deoxycholate Sigma Bile salts
Sodium glycodeoxycholate Sigma C9910 Bile salts
Sodium taurocholate Sigma 86339 Bile salts
Syringe Filter Millex-DP SLGP033R  Syringe Filter 0.22 µm pore size polyethersulfone
Trypsin Sigma-Aldrich T1426 Enzyme

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. McClements, D. J. The biophysics of digestion: Lipids. Current Opinion in Food Science. 21, 1-6 (2018).
  2. McClements, D. J., Li, Y. Structured emulsion-based delivery systems: Controlling the digestion and release of lipophilic food components. Advances in Colloid and Interface Science. 159 (2), 213-228 (2010).
  3. Corstens, M. N., et al. Food-grade micro-encapsulation systems that may induce satiety via delayed lipolysis: A review. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 57 (10), 2218-2244 (2017).
  4. Aguilera-Garrido, A., del Castillo-Santaella, T., Galisteo-González, F., Gálvez-Ruiz, M. J., Maldonado-Valderrama, J. Investigating the role of hyaluronic acid in improving curcumin bioaccessibility from nanoemulsions. Food Chemistry. 351, 129301 (2021).
  5. Rodríguez Patino, J. M., Carrera Sánchez, C., Rodríguez Niño, M. R. Implications of interfacial characteristics of food foaming agents in foam formulations. Advances in Colloid and Interface Science. 140 (2), 95-113 (2008).
  6. Wilde, P. J., Chu, B. S. Interfacial & colloidal aspects of lipid digestion. Advances in Colloid and Interface Science. 165 (1), 14-22 (2011).
  7. Cabrerizo-Vílchez, M. A., Wege, H. A., Holgado-Terriza, J. A., Neumann, A. W. Axisymmetric drop shape analysis as penetration Langmuir balance. Review of Scientific Instruments. 70 (5), 2438-2444 (1999).
  8. Maldonado-Valderrama, J., Muros-Cobos, J. L., Holgado-Terriza, J. A., Cabrerizo-Vílchez, M. A. Bile salts at the air-water interface: Adsorption and desorption. Colloids and surfaces B: Biointerfaces. 120, 176-183 (2014).
  9. Maldonado-Valderrama, J., Terriza, J. A. H., Torcello-Gómez, A., Cabrerizo-Vílchez, M. A. In vitro digestion of interfacial protein structures. Soft Matter. 9, 1043-1053 (2013).
  10. Maldonado-Valderrama, J. Probing in vitro digestion at oil-water interfaces. Current Opinion in Colloid and Interface Science. 39, 51-60 (2019).
  11. Brodkorb, A., et al. INFOGEST static in vitro simulation of gastrointestinal food digestion. Nature Protocols. 14 (4), 991-1014 (2019).
  12. del Castillo-Santaella, T., Maldonado-Valderrama, J., Molina-Bolivar, J. A., Galisteo-Gonzalez, F. Effect of cross-linker glutaraldehyde on gastric digestion of emulsified albumin. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 145, 899-905 (2016).
  13. Macierzanka, A., Torcello-Gómez, A., Jungnickel, C., Maldonado-Valderrama, J. Bile salts in digestion and transport of lipids. Advances in Colloid and Interface Science. 274, 102045 (2019).
  14. Maldonado-Valderrama, J., Torcello-Gómez, A., del Castillo-Santaella, T., Holgado-Terriza, J. A., Cabrerizo-Vílchez, M. A. Subphase exchange experiments with the pendant drop technique. Advances in Colloid and Interface Science. 222, 488-501 (2015).
  15. Bellesi, F. A., Ruiz-Henestrosa, V. M. P., Maldonado-Valderrama, J., Del Castillo Santaella, T., Pilosof, A. M. R. Comparative interfacial in vitro digestion of protein and polysaccharide oil/water films. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 161, 547-554 (2018).
  16. Del Castillo-Santaella, T., Sanmartín, E., Cabrerizo-Vílchez, M. A., Arboleya, J. C., Maldonado-Valderrama, J. Improved digestibility of β-lactoglobulin by pulsed light processing: A dilatational and shear study. Soft Matter. 10 (48), 9702-9714 (2014).
  17. Infantes-Garcia, M. R., et al. In vitro gastric lipid digestion of emulsions with mixed emulsifiers: Correlation between lipolysis kinetics and interfacial characteristics. Food Hydrocolloids. 128, 107576 (2022).
  18. del Castillo-Santaella, T., Cebrián, R., Maqueda, M., Gálvez-Ruiz, M. J., Maldonado-Valderrama, J. Assessing in vitro digestibility of food biopreservative AS-48. Food Chemistry. 246, 249-257 (2018).
  19. Torcello-Gómez, A., Maldonado-Valderrama, J., Jódar-Reyes, A. B., Cabrerizo-Vílchez, M. A., Martín-Rodríguez, A. Pluronic-covered oil-water interfaces under simulated duodenal conditions. Food Hydrocolloids. 34, 54-61 (2014).
  20. Minekus, M., et al. A standardised static in vitro digestion method suitable for food - an international consensus. Food & Function. 5 (6), 1113-1124 (2014).
  21. Wege, H. A., Holgado-Terriza, J. A., Cabrerizo-Vílchez, M. A. Development of a constant surface pressure penetration langmuir balance based on axisymmetric drop shape analysis. Journal of Colloid and Interface Science. 249 (2), 263-273 (2002).
  22. del Castillo-Santaella, T., et al. Hyaluronic acid and human/bovine serum albumin shelled nanocapsules: Interaction with mucins and in vitro digestibility of interfacial films. Food Chemistry. 383, 132330 (2022).
  23. Aguilera-Garrido, A., et al. Applications of serum albumins in delivery systems: Differences in interfacial behaviour and interacting abilities with polysaccharides. Advances in Colloid and Interface Science. 290 (5), 102365 (2021).

Tags

Biokemi utgåva 189
<em>In vitro</em> Digestion av emulsioner i en enda droppe <em>via</em> multi-subfasutbyte av simulerade gastrointestinala vätskor
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Maldonado-Valderrama, J., del… More

Maldonado-Valderrama, J., del Castillo Santaella, T., Holgado-Terriza, J. A., Cabrerizo-Vílchez, M. Á. In vitro Digestion of Emulsions in a Single Droplet via Multi Subphase Exchange of Simulated Gastrointestinal Fluids. J. Vis. Exp. (189), e64158, doi:10.3791/64158 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter