JoVE Journal > Medicine
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Medicine

Undersøgelse af de beskyttende virkninger af Platycodin D på ikke-alkoholisk fedtleversygdom i en palmitinsyre-induceret in vitro-model

Published: December 02, 2022
doi:
10.3791/64816
, , , , , , ,
1Chongqing Academy of Chinese Materia Medica, 2Bioengineering College of Chongqing University

Summary

Denne protokol undersøger de beskyttende virkninger af platycodin D på ikke-alkoholisk fedtleversygdom i en palmitinsyre-induceret in vitro-model .

Abstract

Forekomsten af ikke-alkoholisk fedtleversygdom (NAFLD) er steget med alarmerende hastighed over hele verden. Platycodon grandiflorum anvendes i vid udstrækning som en traditionel etnomedicin til behandling af forskellige sygdomme og er en typisk funktionel mad, der kan indarbejdes i den daglige kost. Undersøgelser har antydet, at platycodin D (PD), en af de vigtigste aktive ingredienser i Platycodon grandiflorum, har høj biotilgængelighed og væsentligt mindsker udviklingen af NAFLD, men den underliggende mekanisme for dette er stadig uklar. Denne undersøgelse har til formål at undersøge den terapeutiske virkning af PD mod NAFLD in vitro. AML-12-celler blev forbehandlet med 300 μM palmitinsyre (PA) i 24 timer for at modellere NAFLD in vitro. Derefter blev cellerne enten behandlet med PD eller modtog ingen PD-behandling i 24 timer. Niveauerne af reaktive iltarter (ROS) blev analyseret under anvendelse af 2′,7′-dichlor-dihydro-fluorescein diacetat (DCFH-DA) farvning, og mitokondriemembranpotentialet blev bestemt ved JC-1 farvningsmetoden. Desuden blev proteinekspressionsniveauerne af LC3-II / LC3-I og p62 / SQSTM1 i cellelysaterne analyseret ved western blotting. PD viste sig at reducere ROS- og mitokondriemembranpotentialeniveauerne signifikant i den PA-behandlede gruppe sammenlignet med kontrolgruppen. I mellemtiden øgede PD LC3-II / LC3-I-niveauerne og reducerede p62 / SQSTM1-niveauerne i den PA-behandlede gruppe sammenlignet med kontrolgruppen. Resultaterne viste, at PD forbedrede NAFLD in vitro ved at reducere oxidativt stress og stimulere autofagi. Denne in vitro-model er et nyttigt værktøj til at studere PD’s rolle i NAFLD.

Introduction

Platycodon grandiflorus (PG), som er den tørrede rod af Platycodon grandiflorus (Jacq.) A.DC., bruges i traditionel kinesisk medicin (TCM). Det produceres hovedsageligt i de nordøstlige, nordlige, østlige, centrale og sydvestlige regioner i Kina1. PG-komponenterne omfatter triterpenoidsaponiner, polysaccharider, flavonoider, polyphenoler, polyethylenglycoler, flygtige olier og mineraler2. PG har en lang historie med at blive brugt som mad og urtemedicin i Asien. Traditionelt blev denne urt brugt til at lave medicin mod lungesygdomme. Moderne farmakologi giver også bevis for effekten af PG til behandling af andre sygdomme. Undersøgelser har vist, at PG har en terapeutisk effekt på en række lægemiddelinducerede leverskademodeller. Kosttilskuddet af PG- eller platycodinekstrakter kan forbedre fedtfattig diætinduceret fedme og dets relaterede metaboliske sygdomme 3,4,5. Polysaccharider fra PG kan anvendes til behandling af akut leverskade forårsaget af LPS/D-GalN hos mus6. Desuden forbedrer saponiner fra PG’s rødder fedtfattig diætinduceret ikke-alkoholisk steatohepatitis (NASH)7. Desuden kan platycodin D (PD), en af de vigtigste terapeutiske komponenter i PG, forbedre lipoproteinreceptorekspression med lav densitet og lipoproteinoptagelse med lav densitet i humane hepatocellulære carcinomceller (HepG2)8. Desuden kan PD også inducere apoptose og hæmme vedhæftning, migration og invasion i HepG2-celler 9,10. I denne undersøgelse anvendes således AML-12-celler fra mus til in vitro-modelkonstruktion og til yderligere undersøgelse af de farmakologiske virkninger og underliggende mekanismer for PD i denne model.

Udtrykket ikke-alkoholisk fedtleversygdom (NAFLD) refererer til en gruppe leversygdomme, der omfatter simpel steatose, NASH, skrumpelever og hepatocellulært carcinom11. Selvom patogenesen af NAFLD er ufuldstændigt forstået, fra den klassiske “to-hit” teori til den nuværende “multiple-hit” teori, anses insulinresistens for at være central i patogenesen af NAFLD12,13,14. Undersøgelser har vist, at insulinresistens i hepatocytter kan føre til øgede frie fedtsyrer, som danner triglycerider, der deponeres i leveren og får leveren til at blive fed15,16. Akkumuleringen af fedt kan føre til lipotoksicitet, oxidativ stressinduceret mitokondriel dysfunktion, endoplasmatisk retikulumstress og inflammatorisk cytokinfrigivelse, hvilket resulterer i patogenese og progression af NAFLD17,18. Derudover spiller autofagi også en rolle i patogenesen af NAFLD, da den er involveret i regulering af cellulær insulinfølsomhed, cellulær lipidmetabolisme, hepatocytskade og medfødt immunitet 19,20,21.

En række dyremodeller og cellulære modeller er blevet etableret for at danne grundlag for at udforske patogenesen og potentielle terapeutiske mål for NAFLD22,23. Imidlertid kan enkeltdyrmodeller ikke fuldt ud efterligne alle de patologiske processer i NAFLD24. Individuelle forskelle mellem dyr fører til forskellige patologiske træk. Anvendelse af levercellelinjer eller primære hepatocytter i in vitro-undersøgelser af NAFLD sikrer maksimal konsistens i de eksperimentelle betingelser. Hepatisk lipidmetabolisme dysregulering kan føre til højere niveauer af hepatocyt lipid dråbe akkumulering i NAFLD25. Frie fedtsyrer som oliesyre og palmeolie er blevet brugt i in vitro-modellen til at efterligne NAFLD forårsaget af en fedtrig diæt26,27. Den humane hepatoblastomcellelinje HepG2 bruges ofte til konstruktion af NAFLD-modeller in vitro, men som tumorcellelinje er metabolismen af HepG2-celler signifikant forskellig fra levercellernes under normale fysiologiske forhold28. Derfor er det mere fordelagtigt at anvende primære hepatocytter eller primære hepatocytter til mus til at konstruere in vitro NAFLD-modellen til lægemiddelscreening end at anvende tumorcellelinjer. Sammenligning af den synergistiske undersøgelse af lægemiddeleffekter og terapeutiske mål i både dyremodeller og in vitro hepatocytmodeller ser det ud til, at brug af musehepatocytter til at konstruere in vitro NAFLD-modellen har bedre anvendelsespotentiale.

Frie fedtsyrer, der kommer ind i leveren, oxideres for at producere energi eller opbevares som triglycerider. Signifikant har frie fedtsyrer en vis lipotoksicitet og kan fremkalde cellulær dysfunktion og apoptose12. Palmitinsyre (PA) er den mest rigelige mættede fedtsyre i humant plasma29. Når celler i ikke-fedtvæv udsættes for høje koncentrationer af PA i lang tid, stimulerer dette produktionen af reaktive iltarter (ROS) og forårsager oxidativ stress, lipidakkumulering og endda apoptose30. Derfor bruger mange forskere PA som en inducer til at stimulere leverceller til at producere ROS og dermed konstruere in vitro fedtleversygdomsmodellen og evaluere de beskyttende virkninger af visse aktive stoffer på celler31,32,33,34. Denne undersøgelse introducerer en protokol til undersøgelse af de beskyttende virkninger af PD på en cellemodel af NAFLD induceret af PA.

Protocol

AML-12-celler (en normal musehepatocytcellelinje) anvendes til de cellebaserede undersøgelser. Cellerne fås fra en kommerciel kilde (se materialetabel). 1. Forbehandling af AML-12-cellerne til model af NAFLD in vitro Oprethold cellerne i normale cellekulturmedier (DMEM plus skinkens F12 [1:1] indeholdende 0,005 mg/ml insulin, 5 ng/ml selen, 0,005 mg/ml transferrin, 40 ng/ml dexamethason og 10% føtalt bovint serum [FBS], se materi…

Representative Results

Intracellulær ROS i cellerneAML-12-celler blev induceret med 300 μM PA i 24 timer, og en NAFLD-cellemodel blev etableret. Derefter blev cellerne behandlet med PD i 24 timer. Cellerne blev mærket med en DCFH-DA fluorescerende sonde, og ROS-produktion blev observeret under et fluorescensmikroskop. Resultaterne af DCFH-DA-farvning af intracellulær ROS i cellerne er vist i figur 1. Resultaterne viste, at PD signifikant kunne reducere niveauet af intracellulær ROS i cell…

Discussion

Undersøgelser har fremhævet det faktum, at NAFLD er et klinisk patologisk syndrom, der spænder fra fedtlever til NASH, der kan udvikle sig til skrumpelever og leverkræft51. En fedtfattig kost og en inaktiv livsstil er typiske risikofaktorer for NAFLD. Både ikke-medicinske terapier og lægemiddelterapier til NAFLD-behandling er blevet undersøgt51,52,53. Imidlertid er patogenesen af NAFLD ikke blevet …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dette arbejde støttes af tilskud fra Chongqing Science and Technology Commission (cstc2020jxjl-jbky10002, jbky20200026, cstc2021jscx-dxwtBX0013 og jbky20210029) og China Postdoctoral Science Foundation (nr. 2021MD703919).

Materials

5% BSA Blocking Buffer Solarbio, Beijing, China SW3015
AML12 (alpha mouse liver 12) cell line Procell Life Science&Technology Co., Ltd, China AML12
Beyo ECL Plus Beyotime, Shanghai, China P0018S
Bio-safety cabinet Esco Micro Pte Ltd, Singapore AC2-5S1 A2 
cellSens Olympus, Tokyo, Japan 1.8
Culture CO2 Incubator Esco Micro Pte Ltd, Singapore CCL-170B-8
Dexamethasone Beyotime, Shanghai, China ST125
Dimethyl sulfoxide Solarbio, Beijing, China D8371
DMEM/F12 Hyclone, Logan, UT, USA SH30023.01
Foetal Bovine Serum Hyclone, Tauranga, New Zealand SH30406.05
Graphpad software GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA 8.0
HRP Goat Anti-Mouse IgG (H+L) ABclonal, Wuhan, China AS003
Hydrophobic PVDF Transfer Membrane Merck, Darmstadt, Germany IPFL00010
Insulin, Transferrin, Selenium Solution, 100× Beyotime, Shanghai, China C0341
MAP LC3β Antibody Santa Cruz Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd SC-376404
Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with JC-1 Solarbio, Beijing, China M8650
Olympus Inverted Microscope IX53 Olympus, Tokyo, Japan IX53
Palmitic Acid Sigma, Germany P0500
Penicillin-Streptomycin Solution (100x) Hyclone, Logan, UT, USA SV30010
Phenylmethanesulfonyl fluoride Beyotime, Shanghai, China ST506
Phosphate Buffered Solution Hyclone, Logan, UT, USA BL302A
Platycodin D Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd, China CSA: 58479-68-8
Protease inhibitor cocktail for general use, 100x Beyotime, Shanghai, China P1005
Protein Marker Solarbio, Beijing, China PR1910
Reactive Oxygen Species Assay Kit Solarbio, Beijing, China CA1410
RIPA Lysis Buffer Beyotime, Shanghai, China P0013E
SDS-PAGE Gel Quick Preparation Kit Beyotime, Shanghai, China P0012AC
SDS-PAGE Sample Loading Buffer, 5x Beyotime, Shanghai, China P0015
Sigma Centrifuge Sigma, Germany 3K15
SQSTM1/p62 Antibody Santa Cruz Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd SC-28359
Tecan Infinite 200 PRO   Tecan Austria GmbH, Austria 1510002987
WB Transfer Buffer,10x Solarbio, Beijing, China D1060
β-Actin Mouse mAb ABclonal, Wuhan, China AC004
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Xunyan, X. Y., Fang, X. M. The effect of Platycodon grandiflorum and its historical change in the clinical application of Platycodonis radix. Zhonghua Yi Shi Za Shi. 51 (3), 167-176 (2021).
  2. Ma, X., et al. Platycodon grandiflorum extract: Chemical composition and whitening, antioxidant, and anti-inflammatory effects. RSC Advances. 11 (18), 10814-10826 (2021).
  3. Ke, W., et al. Dietary Platycodon grandiflorus attenuates hepatic insulin resistance and oxidative stress in high-fat-diet induced non-alcoholic fatty liver disease. Nutrients. 12 (2), 480 (2020).
  4. Kim, Y. J., et al. Platycodon grandiflorus root extract attenuates body fat mass, hepatic steatosis and insulin resistance through the interplay between the liver and adipose tissue. Nutrients. 8 (9), 532 (2016).
  5. Park, H. M., et al. Mass spectrometry-based metabolomic and lipidomic analyses of the effects of dietary Platycodon grandiflorum on liver and serum of obese mice under a high-fat diet. Nutrients. 9 (1), 71 (2017).
  6. Qi, C., et al. Platycodon grandiflorus polysaccharide with anti-apoptosis, anti-oxidant and anti-inflammatory activity against LPS/D-GalN induced acute liver injury in mice. Journal of Polymers and the Environment. 29 (12), 4088-4097 (2021).
  7. Choi, J. H., et al. Saponins from the roots of Platycodon grandiflorum ameliorate high fat diet-induced non-alcoholic steatohepatitis. Biomedicine & Pharmacotherapy. 86, 205-212 (2017).
  8. Choi, Y. J., et al. Platycodin D enhances LDLR expression and LDL uptake via down-regulation of IDOL mRNA in hepatic cells. Scientific Reports. 10, 19834 (2020).
  9. Li, T., et al. Platycodin D triggers autophagy through activation of extracellular signal-regulated kinase in hepatocellular carcinoma HepG2 cells. European Journal of Pharmacology. 749, 81-88 (2015).
  10. Lu, J. -. J., et al. Proteomic analysis of hepatocellular carcinoma HepG2 cells treated with platycodin D. Chinese Journal of Natural Medicines. 13 (9), 673-679 (2015).
  11. Neuschwander-Tetri, B. A. Therapeutic landscape for NAFLD in 2020. Gastroenterology. 158 (7), 1984-1998 (2020).
  12. Friedman, S. L., Neuschwander-Tetri, B. A., Rinella, M., Sanyal, A. J. Mechanisms of NAFLD development and therapeutic strategies. Nature Medicine. 24 (7), 908-922 (2018).
  13. Bessone, F., Razori, M. V., Roma, M. G. Molecular pathways of nonalcoholic fatty liver disease development and progression. Cellular and Molecular Life Sciences. 76 (1), 99-128 (2019).
  14. Buzzetti, E., Pinzani, M., Tsochatzis, E. A. The multiple-hit pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Metabolism. 65 (8), 1038-1048 (2016).
  15. Watt, M. J., Miotto, P. M., De Nardo, W., Montgomery, M. K. The liver as an endocrine organ-Linking NAFLD and insulin resistance. Endocrine Reviews. 40 (5), 1367-1393 (2019).
  16. Khan, R. S., Bril, F., Cusi, K., Newsome, P. N. Modulation of insulin resistance in nonalcoholic fatty liver disease. Hepatology. 70 (2), 711-724 (2019).
  17. Karkucinska-Wieckowska, A., et al. Mitochondria, oxidative stress and nonalcoholic fatty liver disease: A complex relationship. European Journal of Clinical Investigation. 52 (3), 13622 (2022).
  18. Tilg, H., Adolph, T. E., Dudek, M., Knolle, P. Non-alcoholic fatty liver disease: The interplay between metabolism, microbes and immunity. Nature Metabolism. 3 (12), 1596-1607 (2021).
  19. Qian, H., et al. Autophagy in liver diseases: A review. Molecular Aspects of Medicine. 82, 100973 (2021).
  20. Du, J., Ji, Y., Qiao, L., Liu, Y., Lin, J. Cellular endo-lysosomal dysfunction in the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease. Liver International. 40 (2), 271-280 (2020).
  21. Allaire, M., Rautou, P. E., Codogno, P., Lotersztajn, S. Autophagy in liver diseases: Time for translation. Journal of Hepatology. 70 (5), 985-998 (2019).
  22. Kanuri, G., Bergheim, I. In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). International Journal of Molecular Sciences. 14 (6), 11963-11980 (2013).
  23. Lau, J. K., Zhang, X., Yu, J. Animal models of non-alcoholic fatty liver disease: Current perspectives and recent advances. The Journal of Pathology. 241 (1), 36-44 (2017).
  24. Reimer, K. C., Wree, A., Roderburg, C., Tacke, F. New drugs for NAFLD: Lessons from basic models to the clinic. Hepatology International. 14 (1), 8-23 (2020).
  25. Carpino, G., et al. Increased liver localization of lipopolysaccharides in human and experimental NAFLD. Hepatology. 72 (2), 470-485 (2020).
  26. Vergani, L. Fatty acids and effects on in vitro and in vivo models of liver steatosis. Current Medicinal Chemistry. 26 (19), 3439-3456 (2019).
  27. Scorletti, E., Carr, R. M. A new perspective on NAFLD: Focusing on lipid droplets. Journal of Hepatology. 76 (4), 934-945 (2022).
  28. Green, C. J., Pramfalk, C., Morten, K. J., Hodson, L. From whole body to cellular models of hepatic triglyceride metabolism: Man has got to know his limitations. American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism. 308 (1), 1-20 (2015).
  29. Gambino, R., et al. Different serum free fatty acid profiles in NAFLD subjects and healthy controls after oral fat load. International Journal of Molecular Sciences. 17 (4), 479 (2016).
  30. Marra, F., Svegliati-Baroni, G. Lipotoxicity and the gut-liver axis in NASH pathogenesis. Journal of Hepatology. 68 (2), 280-295 (2018).
  31. Zhang, J., Zhang, H., Deng, X., Zhang, Y., Xu, K. Baicalin protects AML-12 cells from lipotoxicity via the suppression of ER stress and TXNIP/NLRP3 inflammasome activation. Chemico-Biological Interactions. 278, 189-196 (2017).
  32. Liang, Y., et al. γ-Linolenic acid prevents lipid metabolism disorder in palmitic acid-treated alpha mouse liver-12 cells by balancing autophagy and apoptosis via the LKB1-AMPK-mTOR pathway. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 69 (29), 8257-8267 (2021).
  33. Peng, Z., et al. Nobiletin alleviates palmitic acid-induced NLRP3 inflammasome activation in a sirtuin 1dependent manner in AML12 cells. Molecular Medicine Reports. 18 (6), 5815-5822 (2018).
  34. Xu, T., et al. Ferulic acid alleviates lipotoxicity-induced hepatocellular death through the SIRT1-regulated autophagy pathway and independently of AMPK and Akt in AML-12 hepatocytes. Nutrition & Metabolism. 18 (1), 13 (2021).
  35. Aranda, A., et al. Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA) assay: A quantitative method for oxidative stress assessment of nanoparticle-treated cells. Toxicology in Vitro. 27 (2), 954-963 (2013).
  36. Eruslanov, E., Kusmartsev, S. Identification of ROS using oxidized DCFDA and flow-cytometry. Methods in Molecular Biology. 594, 57-72 (2010).
  37. Bankhead, P. . Analyzing Fluorescence Microscopy Images with ImageJ. , (2014).
  38. Wiesmann, V., et al. Review of free software tools for image analysis of fluorescence cell micrographs. Journal of Microscopy. 257 (1), 39-53 (2015).
  39. Lugli, E., Troiano, L., Cossarizza, A. Polychromatic analysis of mitochondrial membrane potential using JC-1. Current Protocols in Cytometry. , (2007).
  40. Sivandzade, F., Bhalerao, A., Cucullo, L. Analysis of the mitochondrial membrane potential using the cationic JC-1 dye as a sensitive fluorescent probe. Bio-protocol. 9 (1), 3128 (2019).
  41. Chazotte, B. Labeling mitochondria with JC-1. Cold Spring Harbor Protocols. 2011 (9), (2011).
  42. Walker, J. M. The bicinchoninic acid (BCA) assay for protein quantitation. The Protein Protocols Handbook. , 11-15 (2009).
  43. Goldman, A., Ursitti, J. A., Mozdzanowski, J., Speicher, D. W. Electroblotting from polyacrylamide gels. Current Protocols in Protein Science. 82, 1-16 (2015).
  44. Mozdzanowski, J., Speicher, D. W. Proteins from polyacrylamide gels onto PVDF membranes. Current Research in Protein Chemistry. , 87 (2012).
  45. Taylor, S. C., Posch, A. The design of a quantitative western blot experiment. Biomed Research International. 2014, 361590 (2014).
  46. Motulsky, H. J. Graphpad Statistics Guide. Options for multiple t tests. Graphpad. , (2020).
  47. Poltorak, A. Cell death: All roads lead to mitochondria. Current Biology. 32 (16), 891-894 (2022).
  48. Dadsena, S., Jenner, A., García-Sáez, A. J. Mitochondrial outer membrane permeabilization at the single molecule level. Cellular and Molecular Life Sciences. 78 (8), 3777-3790 (2021).
  49. Green, D. R., Kroemer, G. The pathophysiology of mitochondrial cell death. Science. 305 (5684), 626-629 (2004).
  50. Lange, N. F., Radu, P., Dufour, J. F. Prevention of NAFLD-associated HCC: Role of lifestyle and chemoprevention. Journal of Hepatology. 75 (5), 1217-1227 (2021).
  51. Liu, X., Zhang, Y., Ma, C., Lin, J., Du, J. Alternate-day fasting alleviates high fat diet induced non-alcoholic fatty liver disease through controlling PPARalpha/Fgf21 signaling. Molecular Biology Reports. 49 (4), 3113-3122 (2022).
  52. Romero-Gomez, M., Zelber-Sagi, S., Trenell, M. Treatment of NAFLD with diet, physical activity and exercise. Journal of Hepatology. 67 (4), 829-846 (2017).
  53. Mizushima, N., Levine, B. Autophagy in human diseases. New England Journal of Medicine. 383 (16), 1564-1576 (2020).
  54. Cui, B., Yu, J. M. Autophagy: A new pathway for traditional Chinese medicine. Journal of Asian Natural Products Research. 20 (1), 14-26 (2018).
  55. Law, B. Y., et al. New potential pharmacological functions of Chinese herbal medicines via regulation of autophagy. Molecules. 21 (3), 359 (2016).
  56. Zhou, H., et al. Research progress in use of traditional Chinese medicine monomer for treatment of non-alcoholic fatty liver disease. European Journal of Pharmacology. 898, 173976 (2021).
  57. Zhang, L., Yao, Z., Ji, G. Herbal extracts and natural products in alleviating non-alcoholic fatty liver disease via activating autophagy. Frontiers in Pharmacology. 9, 1459 (2018).
  58. Zhang, X., et al. C-X-C motif chemokine 10 impairs autophagy and autolysosome formation in non-alcoholic steatohepatitis. Theranostics. 7 (11), 2822-2836 (2017).
  59. Li, C. X., et al. Allyl isothiocyanate ameliorates lipid accumulation and inflammation in nonalcoholic fatty liver disease via the Sirt1/AMPK and NF-kappaB signaling pathways. World Journal of Gastroenterology. 25 (34), 5120-5133 (2019).
  60. Li, S., et al. Sirtuin 3 acts as a negative regulator of autophagy dictating hepatocyte susceptibility to lipotoxicity. Hepatology. 66 (3), 936-952 (2017).
  61. Farrell, G. C., Teoh, N. C., McCuskey, R. S. Hepatic microcirculation in fatty liver disease. The Anatomical Record. 291 (6), 684-692 (2008).
  62. Milner, E., et al. Emerging three-dimensional hepatic models in relation to traditional two-dimensional in vitro assays for evaluating drug metabolism and hepatoxicity. Medicine in Drug Discovery. 8, 100060 (2020).
  63. Zhang, X., Jiang, T., Chen, D., Wang, Q., Zhang, L. W. Three-dimensional liver models: State of the art and their application for hepatotoxicity evaluation. Critical Reviews in Toxicology. 50 (4), 279-309 (2020).
  64. Bilson, J., Sethi, J. K., Byrne, C. D. Non-alcoholic fatty liver disease: A multi-system disease influenced by ageing and sex, and affected by adipose tissue and intestinal function. Proceedings of the Nutrition Society. 81 (2), 146-161 (2022).

Tags

AML-12 CellsNon-alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD)Platycodin DPalmitic AcidCell ModelIn VitroOxidative StressMitochondrial Membrane PotentialMicroscopy
check_url/64816?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Wen, X., Wang, J., Fan, J., Chu, R., Chen, Y., Xing, Y., Li, N., Wang, G. Investigating the Protective Effects of Platycodin D on Non-Alcoholic Fatty Liver Disease in a Palmitic Acid-Induced In Vitro Model. J. Vis. Exp. (190), e64816, doi:10.3791/64816 (2022).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image