En museøremodel til evaluering af allergisk kontaktdermatitis

Summary

Her beskriver vi metoderne til at inducere allergisk kontaktdermatitis i museører med 1-fluor-2,4-dinitrobenzen (DNFB) og hvordan man vurderer sværhedsgraden af allergisk kontaktdermatitis.

Abstract

Hud er menneskekroppens første forsvarslinje og et af de mest udsatte organer for miljøkemikalier. Allergisk kontaktdermatitis (ACD) er en almindelig hudsygdom, der manifesterer sig som et lokalt udslæt, rødme og hudlæsioner. Forekomsten og udviklingen af ACD påvirkes af både genetiske og miljømæssige faktorer. Selvom mange forskere har konstrueret en række modeller af ACD i de senere år, er de eksperimentelle protokoller for disse modeller alle forskellige, hvilket gør det vanskeligt for læserne at etablere dem godt. Derfor er en stabil og effektiv dyremodel af stor betydning for yderligere at studere patogenesen af atopisk dermatitis. I denne undersøgelse beskriver vi en modelleringsmetode ved hjælp af 1-fluor-2,4-dinitrobenzen (DNFB) til at inducere ACD-lignende symptomer i ørerne på mus og beskriver flere metoder til vurdering af sværhedsgraden af dermatitis under modellering. Denne eksperimentelle protokol er blevet anvendt med succes i nogle eksperimenter og har en vis salgsfremmende rolle inden for ACD-forskning.

Introduction

Allergisk kontaktdermatitis (ACD) er en almindelig hudsygdom, der er karakteriseret ved eksemlignende symptomer på kontaktstedet, ødem og erytem i moderate tilfælde og papler, erosion, ekssudation eller endda massive ar i alvorlige tilfælde¹. Det påvirker op til 20% af befolkningen og kan påvirke mennesker i alle aldre². ACD forekommer ofte hos personer, der gentagne gange har været udsat for allergener og kan være forårsaget af individets immunrespons på et eller flere allergener i deres hjem eller arbejdsplads³. Type IV forsinket overfølsomhed betragtes som den vigtigste type immunrespons i ACD⁴. I områder af huden, der gentagne gange har været udsat for allergener, akkumuleres cirkulerende hukommelses-T-celler i stort antal og fremkalder immun- og inflammatoriske reaktioner ^3,5,6. Formålet med dette arbejde er at foreslå en pålidelig laboratorieteknik til yderligere undersøgelse af immunologiske og inflammatoriske reaktioner i udviklingen af ACD.

Udbruddet af ACD skyldes normalt kontaktoverfølsomhed forårsaget af gentagen eksponering for kemikalier. Talrige forskere har udviklet forskellige ACD-dyremodeller i husmus ^7,8, marsvin ^9,10 og andre dyr i løbet af de sidste par årtier for at simulere sygdommens begyndelse. De fleste af de eksperimentelle metoder består af to faser: abdominal sensibilisering (induktion) og tilvejebringelse af stimuli på ryggen eller øreflippen (stimulering). Almindeligt anvendte kemiske stoffer omfatter hovedsageligt 1-fluor-2,4-dinitrobenzen (DNFB) / 1-chlor-2,4-dinitrobenzen (DNCB) ^8,9,11, oxazolon 12^, urushiol ¹³ osv. Blandt dem er DNFB og DNCB de mest udbredte, først rapporteret i oktober 1958¹⁰. Nikkelsensibiliseringsmodel¹⁴ og fotoallergisk kontaktdermatitis model¹⁵ anvendes også ofte.

Vi præsenterer en eksperimentel metode til opbygning af ACD-modellen. Denne metode er opsummeret og optimeret på baggrund af tidligere undersøgelser og ved sammenligning med flere eksperimenter. Sammenlignet med andre ACD-modeller har denne model nogle fordele, såsom små individuelle forskelle, korte eksperimentelle perioder, en lille mængde kemisk stimulering osv. Derudover er denne undersøgelse anvendelig på mus, som ikke kun er økonomiske, men også har flere muligheder for genknockout eller transgen museforberedelse¹⁶. Vi beskriver også de forskellige metoder, der bruges til at overvåge ACD-fremskridt i eksperimentet, såsom måling af øretykkelse, brug af Evans blå farvestof til måling af inflammatorisk ekssudation osv. Denne model kan ikke kun analysere museører, blod, milt og andre prøver ved laboratoriemidler for at udforske patogenesen af ACD, men er også anvendelig til præklinisk evaluering af nye terapeutiske metoder, som har en vis salgsfremmende betydning.

Protocol

Al pleje og behandling af musene var i overensstemmelse med retningslinjerne fra Institutional Animal Care and Use Committee ved Yangzhou University og blev godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee under projektlicensen SYXK (SU) 2022-0044. BALB/c han- og hunmus i alderen 6-8 uger blev anvendt i dette studie. Hver gruppe bestod af seks mus (se Materialetabel). Burene blev anbragt i et temperaturkontrolleret kammer (22 ± 2 °C, 12 timers lys/mørk cyklus) med fri adgang til mad og vand. Et…

Representative Results

Under gentagen DNFB-stimulering viste museørerne i DNFB-gruppen tydelige kliniske symptomer, der kunne sammenlignes med ACD, med følsomme områder, der viste de typiske symptomer på rødme, tørhed og endda erosion og ekssudation. Øreadministration af rent vand (kontrolgruppe) eller opløsningsmiddelkontrol (vehikelgruppe) fremkaldte imidlertid ikke lignende symptomer (figur 4). I DNFB-gruppen sammenlignet med det ubehandlede højre øre steg tykkelsen af vens…

Discussion

Protokollen beskrevet her til inducering af ACD-lignende symptomer i ørerne på mus kan bruges til at studere patofysiologien af ACD og som et screeningsværktøj til udvikling af nye lægemidler.

Der er to vigtige trin til at etablere en ACD-model: indledende sensibilisering og efterfølgende stimulering. Underlivet er normalt stedet for indledende sensibilisering, men det efterfølgende stimuleringssted blev valgt lidt anderledes. Tidligere undersøgelser har vist, at de fleste forskere væ…

Materials

1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB)	Merck	200-734-3	1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99%
Acetone	Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD	10000418	≥99.5%
Aluminum foil	Cleanwrap	CF-2
Evans blue dye	Solarbio	314-13-6	Dye content approx. 80%
Mouse fixator	ZHUYANBANG	GEGD-SM1830
Olive oil	Solarbio	8001-25-0	500 ml
Pipet tip	Biofount	FT-200	10 – 200 μl
Pipettor	Eppendorf AG	3123000250	20 – 200 μl
Razor blade	Shanghai Gillette Co. LTD	74-S
Vernier calipers	Delixi Electric	DECHOTVCS1200