알레르기성 접촉성 피부염 평가를 위한 마우스 귀 모델
Summary
여기에서는 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)에 의해 마우스 귀에 알레르기성 접촉성 피부염을 유도하는 방법과 알레르기성 접촉성 피부염의 중증도를 평가하는 방법을 설명합니다.
Abstract
피부는 인체의 첫 번째 방어선이며 환경 화학 물질에 가장 많이 노출되는 기관 중 하나입니다. 알레르기성 접촉 피부염(ACD)은 국소 발진, 발적 및 피부 병변으로 나타나는 흔한 피부 질환입니다. ACD의 발생과 발달은 유전적 요인과 환경적 요인의 영향을 받습니다. 최근 몇 년 동안 많은 학자들이 일련의 ACD 모델을 구축했지만 이러한 모델의 실험 프로토콜이 모두 다르기 때문에 독자가 잘 확립하기가 어렵습니다. 따라서 안정적이고 효율적인 동물모델은 아토피성 피부염의 발병기전을 더 연구하는데 큰 의미가 있다. 이 연구에서는 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)을 사용하여 생쥐의 귀에 ACD 유사 증상을 유도하는 모델링 방법을 자세히 설명하고 모델링 중 피부염의 중증도를 평가하는 몇 가지 방법을 설명합니다. 이 실험 프로토콜은 일부 실험에 성공적으로 적용되었으며 ACD 연구 분야에서 특정 판촉 역할을 합니다.
Introduction
알레르기성 접촉성 피부염(ACD)은 접촉 부위의 습진과 유사한 증상, 중등도의 경우 부종 및 홍반, 심한 경우 구진, 미란, 삼출 또는 다량의 흉터를 특징으로 하는 흔한 피부 질환입니다1. 인구의 최대 20%에 영향을 미치며 모든 연령대의 사람들에게 영향을 미칠 수 있습니다2. ACD는 알레르겐에 반복적으로 노출된 사람에게서 자주 발생하며, 가정이나 직장에서 하나 이상의 알레르겐에 대한 개인의 면역 반응으로 인해 발생할 수 있다3. IV형 지연성 과민증은 ACD4에서 주요 유형의 면역 반응으로 간주됩니다. 알레르겐에 반복적으로 노출된 피부 부위에서는 순환 기억 T 세포가 다량으로 축적되어 면역 및 염증 반응을 유도한다 3,5,6. 이 연구의 목적은 ACD 발병에서 면역학적 및 염증 반응에 대한 추가 조사를 위한 신뢰할 수 있는 실험실 기술을 제안하는 것입니다.
ACD의 발병은 일반적으로 화학 물질에 반복적으로 노출되어 발생하는 접촉 과민증으로 인한 것입니다. 많은 연구자들이 질병의 발병을 시뮬레이션하기 위해 지난 수십 년 동안 집 쥐 7,8, 기니피그 9,10 및 기타 동물에서 다양한 ACD 동물 모델을 개발했습니다. 대부분의 실험 방법은 복부 감작 (유도)과 등 또는 귓불에 자극 제공 (자극)의 두 단계로 구성됩니다. 일반적으로 사용되는 화학 물질은 주로 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)/1-클로로-2,4-디니트로벤젠(DNCB)8,9,11, 옥사졸론12, 우루시올 13 등을 포함합니다. 그 중 DNFB와 DNCB가 가장 널리 사용되며 1958년 10월10일에 처음 보고되었습니다. 니켈 감작 모델(14)과 광알레르기성 접촉 피부염 모델(15)도 자주 사용된다.
ACD 모델을 구축하기 위한 실험적 방법을 제시한다. 이 방법은 이전 연구 및 여러 실험과의 비교를 기반으로 요약되고 최적화됩니다. 다른 ACD 모델과 비교할 때 이 모델은 작은 개인차, 짧은 실험 기간, 소량의 화학적 자극 등과 같은 몇 가지 장점이 있습니다. 또한, 이 연구는 경제적일 뿐만 아니라 유전자 녹아웃 또는 형질전환 마우스 준비에 대한 더 많은 옵션을 가지고 있는 마우스에 적용할 수 있다16. 또한 귀 두께 측정, 염증 삼출물 측정을 위한 Evans blue 염료 사용 등과 같이 실험에서 ACD 진행을 모니터링하는 데 사용되는 다양한 방법을 설명합니다. 이 모델은 ACD의 발병기전을 탐색하기 위해 실험실 수단으로 마우스 귀, 혈액, 비장 및 기타 샘플을 분석할 수 있을 뿐만 아니라 특정 판촉 의미가 있는 새로운 치료 방법의 전임상 평가에도 적용할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
마우스의 귀에서 ACD 유사 증상을 유도하기 위해 여기에 설명된 프로토콜은 ACD의 병태생리학을 연구하고 신약 개발을 위한 스크리닝 도구로 사용할 수 있습니다.
ACD 모델을 확립하는 데는 초기 감작과 후속 자극의 두 가지 주요 단계가 있습니다. 복부는 일반적으로 초기 감작 부위이지만 후속 자극 부위는 약간 다르게 선택되었습니다. 이전 연구에 따르면 대부분의 학자들은 ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작업은 중국 국립 자연 과학 재단 (NSFC)이 N.-N.에 지원했습니다. Y. (81904212); 장쑤 성 중국 전통 의학 과학 기술 프로젝트 (YB201995); 중국 박사후 연구원을 위한 특별 자금 지원 프로젝트(2020T130562).
Materials
| 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) | Merck | 200-734-3 | 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99% |
| Acetone | Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD | 10000418 | ≥99.5% |
| Aluminum foil | Cleanwrap | CF-2 | |
| Evans blue dye | Solarbio | 314-13-6 | Dye content approx. 80% |
| Mouse fixator | ZHUYANBANG | GEGD-SM1830 | |
| Olive oil | Solarbio | 8001-25-0 | 500 ml |
| Pipet tip | Biofount | FT-200 | 10 – 200 μl |
| Pipettor | Eppendorf AG | 3123000250 | 20 – 200 μl |
| Razor blade | Shanghai Gillette Co. LTD | 74-S | |
| Vernier calipers | Delixi Electric | DECHOTVCS1200 |
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