Um modelo de orelha de camundongo para avaliação de dermatite alérgica de contato

Summary

Aqui, descrevemos os métodos de indução de dermatite alérgica de contato em orelhas de camundongos pelo 1-fluoro-2,4-dinitrobenzeno (DNFB) e como avaliar a gravidade da dermatite alérgica de contato.

Abstract

A pele é a primeira linha de defesa do corpo humano e um dos órgãos mais expostos aos produtos químicos ambientais. A dermatite alérgica de contato (DCA) é uma doença de pele comum que se manifesta como erupção cutânea local, vermelhidão e lesões cutâneas. A ocorrência e o desenvolvimento da DCA são influenciados por fatores genéticos e ambientais. Embora muitos estudiosos tenham construído uma série de modelos de DCA nos últimos anos, os protocolos experimentais desses modelos são todos diferentes, o que torna difícil para os leitores estabelecê-los bem. Portanto, um modelo animal estável e eficiente é de grande importância para aprofundar o estudo da patogênese da dermatite atópica. Neste estudo, detalhamos um método de modelagem usando 1-fluoro-2,4-dinitrobenzeno (DNFB) para induzir sintomas semelhantes aos da DAC em orelhas de camundongos e descrevemos vários métodos para avaliar a gravidade da dermatite durante a modelagem. Este protocolo experimental tem sido aplicado com sucesso em alguns experimentos e tem um certo papel promocional no campo da pesquisa em DCA.

Introduction

A dermatite alérgica de contato (DCA) é uma doença cutânea comum que se caracteriza por sintomas semelhantes aos eczemas no local de contato, edema e eritema em casos moderados, e pápulas, erosão, exsudação ou mesmo cicatrizes maciças em casos graves¹. Acomete até 20% da população e pode acometer pessoas de qualquer idade². A DCA ocorre frequentemente em indivíduos que foram expostos a alérgenos repetidamente e pode ser causada pela resposta imune do indivíduo a um ou mais alérgenos em sua casa ou local de trabalho³. A hipersensibilidade tardia tipo IV é considerada o principal tipo de resposta imune na^DAC4. Em áreas da pele que têm sido repetidamente expostas a alérgenos, as células T de memória circulantes acumulam-se em grande número e induzem respostas imunes e inflamatórias ^3,5,6. O objetivo deste trabalho é propor uma técnica laboratorial confiável para investigação adicional das respostas imunológica e inflamatória no desenvolvimento da DCA.

O início da DCA é geralmente devido à hipersensibilidade de contato causada pela exposição repetida a produtos químicos. Numerosos pesquisadores desenvolveram vários modelos animais de DCA em camundongos domésticos^7,8, cobaias ^9,10 e outros animais ao longo das últimas décadas^, a fim de simular o início da doença. A maioria dos métodos experimentais consiste em duas etapas: sensibilização abdominal (indução) e fornecimento de estímulos no dorso ou no lóbulo da orelha (estimulação). Substâncias químicas comumente usadas incluem principalmente 1-fluoro-2,4-dinitrobenzeno (DNFB)/1-cloro-2,4-dinitrobenzeno (DNCB)^8,9,11, oxazolona 12, urushiol ^13, etc. Dentre elas, DNFB e DNCB são as mais utilizadas, relatadas pela primeira vez em outubro de 1958¹⁰. O modelo de sensibilização ao níquel¹⁴ e a dermatite de contato fotoalérgica modelo¹⁵ também são frequentemente utilizados.

Apresentamos um método experimental para a construção do modelo de DCA. Este método é resumido e otimizado com base em estudos anteriores e na comparação com múltiplos experimentos. Comparado com outros modelos de DCA, este modelo tem algumas vantagens, tais como pequenas diferenças individuais, curtos períodos experimentais, uma pequena quantidade de estimulação química, etc. Além disso, este estudo é aplicável a camundongos, que não são apenas econômicos, mas também têm mais opções para knockout gênico ou preparação de camundongos transgênicos¹⁶. Também descrevemos os vários métodos usados para monitorar o progresso da DCA no experimento, como medir a espessura da orelha, usar o corante azul de Evans para medir a exsudação inflamatória, etc. Esse modelo pode não apenas analisar orelhas de camundongos, sangue, baço e outras amostras por meios laboratoriais para explorar a patogênese da DAC, mas também é aplicável para a avaliação pré-clínica de novos métodos terapêuticos, o que tem certo significado promocional.

Protocol

Todos os cuidados e tratamento dos camundongos estavam de acordo com as diretrizes estabelecidas pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Yangzhou e foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais sob a licença de projeto SYXK(SU)2022-0044. Camundongos BALB/c machos e fêmeas com idade entre 6-8 semanas foram usados neste estudo. Cada grupo consistiu de seis camundongos (ver Tabela de Materiais). As gaiolas foram colocadas em câmara com temperat…

Representative Results

Sob estimulação repetida com DNFB, as orelhas de camundongos do grupo DNFB apresentaram sintomas clínicos evidentes comparáveis aos da DAC, com áreas sensíveis apresentando os sintomas típicos de vermelhidão, ressecamento e até erosão e exsudação. Entretanto, a administração auricular de água pura (grupo controle) ou solvente controle (grupo veículo) não produziu sintomas semelhantes (Figura 4). Já no grupo DNFB, comparado à orelha direita não …

Discussion

O protocolo aqui descrito para indução de sintomas semelhantes aos da DAC em orelhas de camundongos pode ser utilizado para estudar a fisiopatologia da DAC e como ferramenta de triagem para o desenvolvimento de novas drogas.

Existem dois passos fundamentais para estabelecer um modelo de DCA: sensibilização inicial e estimulação subsequente. O abdome é geralmente o local de sensibilização inicial, mas o local de estimulação subsequente foi escolhido de forma ligeiramente diferente. E…

Materials

1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB)	Merck	200-734-3	1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99%
Acetone	Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD	10000418	≥99.5%
Aluminum foil	Cleanwrap	CF-2
Evans blue dye	Solarbio	314-13-6	Dye content approx. 80%
Mouse fixator	ZHUYANBANG	GEGD-SM1830
Olive oil	Solarbio	8001-25-0	500 ml
Pipet tip	Biofount	FT-200	10 – 200 μl
Pipettor	Eppendorf AG	3123000250	20 – 200 μl
Razor blade	Shanghai Gillette Co. LTD	74-S
Vernier calipers	Delixi Electric	DECHOTVCS1200