Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

שיטת הנפקה צואה פשוטה לאבחון נמטודות זואונוטיות בתנאי שדה ומעבדה

Published: December 15, 2023 doi: 10.3791/66110
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 2
1Parasitology Department, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autonoma de Mexico, 2Instituto de Biología, Universidad Nacional Autonoma de Mexico

Summary

עבודה זו מתארת את השימוש בשיטת ציפה לזיהוי Toxocara canis ו - Ancylostoma spp. שזוהו בדגימות צואה שנאספו מכלבים במקסיקו בין השנים 2017 ל -2021 בתנאי שדה.

Abstract

אבחון של טפילים כלבים בעלי פוטנציאל זואונוטי כגון Toxocara canis ו - Ancylostoma caninum בתנאי שדה הוא בדרך כלל קשה בשל גישה מוגבלת למעבדה באזורים כפריים ופרבריים במקסיקו. מחקר זה נועד לזהות T. canis ו - Ancylostoma spp. בדגימות צואה שנאספו מכלבים במקסיקו בין השנים 2017 ל -2021 בתנאי שדה. חישוב גודל המדגם הביא לגיוס יעד של 534 כלבים ברחבי הארץ.

הדגימות נאספו ישירות מפי הטבעת או מהקרקע לאחר עשיית צרכים. הדגימות אוחסנו בשקיות ניילון בודדות, אטומות היטב, בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. תמיסה רוויה של נתרן כלורי (כוח משיכה סגולי [SpG] 1.20) הוכנה הן בתנאי שדה והן בתנאי מעבדה. בתוך 3 ימים של איסוף, 2-4 גרם של צואה נבדקו עבור טפילים באמצעות שיטת הנפקה על ידי השעיית כל דגימת צואה בתמיסת מלח. הצואה עורבבה עם תמיסת ההנפקה ונמחצה באמצעות כף מתכת.

לאחר שהושגה עקביות אחידה, דגימת הצואה נמזגה לכוס פלסטיק חדשה באמצעות מסננת והותרה לשבת במשך 10-15 דקות. שלוש טיפות מראש התערובת נאספו באמצעות לולאת חיסון מעוקרת. המגלשות הונחו על המיקרוסקופ וטפילים זוהו על ידי פרזיטולוגים מיומנים. דגימות צואה מ-1,055 כלבים נבדקו מיקרוסקופית. מספר הדגימות החיוביות עבור Ancylostoma spp. היה 833 (78.95% תדירות) ו 222 (21.04%) עבור T. canis. ממצאים אלה ממחישים את החשיבות של זיהוי הלמינת'ס זואונוטי בכלבים החיים באזורים עירוניים וכפריים במקסיקו באמצעות טכניקה קופופרזיטוסקופית במעבדה ובתנאי שדה.

Introduction

טפילים במערכת העיכול הם אחת הבעיות הבריאותיות הנפוצות ביותר המשפיעות על כלבים1. הערכות מצביעות על כך שישנם ~700 מיליון כלבים מבויתים ברחבי העולם, וכ -175 מיליון עשויים להיות מסווגים כמשוטטים חופשיים2. יותר מ-60 מיני טפילים משותפים לכלבים ולבני אדם, מה שמרמז על כך שכלבים יכולים להיות מקור להדבקה של בני אדם בטפילים אלה3. Toxocara canis ו- Ancylostoma caninum הם שני מינים טפיליים שמדביקים כלבים, ובטעות, פונדקאים אנושיים. נכון לעכשיו, ישנם מספר מחקרים על המקומות שבהם הלמינת'ס אלה מסוגלים לשרוד ולהתרבות במקסיקו. שכיחות הטוקסוקרה בכלבים נעה בין 0% ליותר מ-87% ברחבי ארצות הברית, מקסיקו, מרכז אמריקה והקריביים4. Toxocara canis ו- Ancylostoma spp., כמו גם מינים טפיליים אחרים בכלבים, דווחו בעבר במקסיקו 5,6,7,8,9,10,11,12,13 (טבלה 1 ).

מינים טפיליים אזור שכיחות (%) הפניה
Ancylostoma caninum קרטרו 42.90 5
טבסקו 15.90 6
קמפצ'ה 35.7 – 42.9 7
יוקטן 73.8 8
באבסיה מורלוס 13.60 9
וראקרוס 10.00
ביציות קוצידיאליות יוקטן 2.30 8
קטנוצפלידים מורלוס 30.3 10
דיפילידיום קנינום יוקטן 2.30 8
דירופילריה יוקטן 7.0 – 8.3 11
ג'יארדיה טבסקו 3.00 6
יוקטן 18.8 8
לישמניה צ'יאפס 19.00 12
תולעי סרט באחה קליפורניה 6.79 13
טוקסוקרה קאניס קרטרו 22.10 5
יוקטן 6.20 8
טריכוריס וולפיס יוקטן 25.40 8
טריפנוזומה חליסקו 8.10 9
קמפצ'ה 7.60
צ'יאפס 4.5 – 42.8
קינטנה רו 20.1 – 21.3
טולוקה 17.50
יוקטן 9.8 – 34

טבלה 1: שכיחות אזורית (%) של טפילי כלבים במקסיקו בין השנים 2001 ל-2020. ממצאים מחקירות קודמות שנערכו בין השנים 2001 ל-2020 אפשרו זיהוי של תפוצת טפילי כלבים במספר סביבות עירוניות וכפריות במקסיקו. מחקרים אלה מספקים הבנה מעמיקה של אלמנטים אפידמיולוגיים התורמים להתמדה של טפילי כלבים במערכות אקולוגיות שונות, ותורמים להערכה מקיפה של ההשפעה הזואונוטית של כמה מיני טפילים.

שלבי מחזור החיים של טפילי מעיים, כגון ביצים, ציסטות, ביציות או זחלים ניתן למצוא בדגימות צואה. לכן, בדיקה של חומר צואה מספק מידע רב ערך על טפילים של חיה. הצורך בשיטה לאיתור ביצי Ancylostomidae בצואת אדם הוביל לשימוש בכתם צואה פשוט בשנת 1878, ששימש במשך שנים רבות לאיתור טפילים במערכת העיכול אך נחשב לא רגיש במיוחד. לפיכך, התעורר הצורך לפתח שיטות קופרומיקרוסקופיות טובות יותר14. יותר מ-100 שנים חלפו מאז תוארה לראשונה טכניקת ההנפקה לשחזור וספירת ביצי טפילים בדגימות צואה15. מאז, מספר שיטות ווריאנטים של טכניקת ההנפקה נחשבו תקן לאיתור טפילים מסוימים אצל המארחים שלהם.

לדוגמה, ליין תיאר שיטה בשנת 1924 הכוללת את טכניקת ההנפקה הצנטריפוגלית הישירה, המשלבת צנטריפוגה ואחריה הצפת המשקעים בתמיסת נתרן כלורי רוויה עם SpG 1.2 ב 1 גרם (ליין) או 10 גרם (שינוי של סטול). טכניקת ההנפקה שונתה לאחר מכן על ידי שימוש בתמיסות עם SpG14 שונה. בשנת 1939 דיווחו גורדון וויטלוק על חסרונות הטכניקה של סטול עקב התערבות של דטריטוס בהדמיה של ביצי טפילים ופיתחו את השיטה הכמותית הידועה בשם מקמאסטר16. בשנת 1979 הראו או'גריידי וסלוקומב כי הכובד הסגולי של התמיסה, התזמון וגדלי הרשת של המסננות משפיעים על דיוק זיהוי הביצים באמצעות טכניקת ההנפקה17. במהלך העשורים האחרונים, מכיוון שנעשו מספר שינויים בטכניקת ההנפקה, יש צורך דחוף בסטנדרטיזציה של שיטות ההנפקה. כיום, זיהוי של זיהומי הלמינת'ס כלביים בהקשר של מניעת טפילים זואונוטיים נדרש ליישם טיפולים אנטלמינטיים מתאימים כדי להגביל זיהום סביבתי עם שלבים זיהומיים של נמטודות זואונוטיות18.

בין השיטות האיכותיות, טכניקת הנפקת הצואה נמצאת בשימוש נרחב ומקובל מכיוון שהיא אינה דורשת ציוד רב, היא פשוטה, זולה וניתנת לשחזור; עם זאת, יש לו חיסרון גדול בכך שהוא חסר רגישות כאשר עוצמת הזיהום נמוכה19. היכולת לחשוף את נוכחותם של מספר רב יותר של אלמנטים טפיליים כגון ביצים, ביציות, ציסטות או זחלי נמטודה נקבעת בדרך כלל על ידי צפיפות התמיסה20.

דיווחים קודמים השוו טכניקות קו-פרזיטולוגיות לזיהוי ביצי נמטודות כלבים. לגבי זיהוי של פרוטוזואה תנועתית, מריחות צואה ישירות משמשים; ואילו שיטות שיקוע שימושיות לאבחון ביצים כבדות של טפילים כגון טרמטודות21. אחת מבדיקות האבחון מבוססות השטח הנפוצות ביותר היא שיטת מריחת הצואה. עם זאת, ניתן לייחס את רמת הרגישות הנמוכה של טכניקה זו לעובדה שהיא מכילה פסולת המפריעה לאיתור ביצי טפילים. על ידי שילוב שלב מסננת יחד עם פתרונות המספקים את ה- SpG הנכון, שיטת ההנפקה מציעה התבוננות ברורה יותר ופחות עמוסה בביצי אסקרידים ותולעי קרס. זה מוביל לתהליך מדויק ויעיל יותר לסינון מיקרוסקופי22. כמו כן, טכניקות הנפקה פשוטות וצנטריפוגליות ישירות משמשות בדרך כלל לשחזור ביצי טפילים וביציות14. שיטות ההנפקה הקלאסיות יכולות להיחשב איכותיות או כמותיות בהתאם לשימוש בתא ספירה כגון שיטת מקמאסטר15. עם זאת, מכיוון שטכניקת ההנפקה היא בעלת רגישות נמוכה ומתמקדת באיתור טפילים בתקופת הפטנט, אין לראות בתוצאות שליליות חד משמעיות. עם זאת, הדיוק לא רק תלוי בהליך השימור של דגימות צואה או SpG של פתרונות ציפה, אלא גם תלוי במיומנות טכנית וניסיון בביצוע בדיקות צואה של המשתמש.

כתוצאה מכך, שיטות אחרות נחקרו לאיתור טפילים כלבים בצואה. ידוע כי אחת הגישות הנפוצות ביותר לאבחון זיהומי הלמינת'ס במעיים בכלבים היא טכניקת FLOTAC, שיטה רב-ערכית, רגישה ומדויקת המניבה תוצאות מדויקות ואמינות לאבחון A. caninum בכלבים בהשוואה לפרוטוקול הנפקה בצינור וטכניקת מקמאסטר19, 23. שיטות שיקוע שימושיות לשחזור ביצי פלוק, ביצי נמטודות עובריות ורוב ביצי תולעי הסרט, שלא ניתן לשחזר על פני תמיסת הנפקה מכיוון שמבנים אלה אינם צפים24. שיטה אחת שהוכחה כעדיפה על טכניקות הנפקה/שיקוע היא שיטת ההנפקה הצנטריפוגלית הכפולה המותאמת, שכן היא מאפשרת איתור ביצי צסטודה בצואה, גוזלת פחות זמן, מפרידה ביצי אנופלוצפלה מפסולת צואה ומפחיתה התגבשות25. יתר על כן, טכניקה זו שימשה בהצלחה כדי לזהות ביצים ascarid עם רגישות גבוהה26. עם זאת, חלק מהטכניקות והשיטות הצנטריפוגליות הנ"ל כגון Ovassay, בניגוד לפרוטוקול ההנפקה שאנו מציעים במחקר זה, דורשות שימור דגימות בריאגנטים כגון פורמלין, ערכות מסחריות, עיבוד דגימות בתנאי מעבדה, ושימוש בריאגנטים כגון אבץ גופרתי27 שהם יקרים ודורשים הליכי סילוק מיוחדים כדי למנוע רעילות סביבתית.

השימוש בטכניקות המגבירות את הרגישות של שיטת ההנפקה על ידי הוספת פתרונות עם SpG גבוה מועדף לאחרונה. עם זאת, יש לקחת בחשבון כי החיסרון של פתרונות אלה הוא הגידול בפסולת בהכנה הסופית ומכאן, גילוי לא מדויק של ביצים טפיל. בנוסף, הזמינות המסחרית של חומרים, ריאגנטים, עלות, בעיות השפעה על הסביבה וקושי בשימוש בשיטות צנטריפוגליות משפיעים על בחירת טכניקת הנפקה14, שיכולה להיות מאתגרת בתנאי שטח בניגוד לפרוטוקול שאנו מציגים בעבודה זו. להכנת תמיסות ההנפקה במלח שולחן יש יתרון על פני ניצול הסוכר מכיוון שבתנאי שדה סוכר מושך חרקים כמו צרעות ודבורים והתכשירים הופכים לדביקים. יתר על כן, פתרונות כגון פנול, אשר מתווסף לתמיסות סוכר כדי למנוע דביקות, או ZnSO4מורכבים להשלכה כראוי על פי הנחיות הגנת הסביבה ולא ניתן להיפטר מהם בשטח; בניגוד לתמיסת מלח שולחן.

מטרת כתב היד היא להדגים את השלבים לגילוי ביציות T. canis ו - Ancylostoma spp. בדגימות צואה תוך התאמה של טכניקת ההנפקה הפשוטה בתנאי שדה ומעבדה. בהתאם לפרוטוקול המתואר כאן ובאמצעות מיקרוסקופ עם סוללת גיבוי, אבחון של טפילים זואונוטיים כלביים אלה באזורים כפריים ופרבריים אפשרי כאשר אין ציוד מעבדה ותשתיות זמינים. שיטת ההנפקה הפשוטה המתוארת בעבודה זו יכולה לספק תוצאות מהירות והיא טכניקה לא פולשנית וחסכונית לבדיקות סקר שגרתיות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

השימוש והטיפול בכלבים אושר על ידי האוניברסיטה הלאומית והאוטונומית של מקסיקו.

1. איסוף דגימות צואה

הערה: יש לטפל בכלב בעזרת וטרינר או הבעלים של החיה.

  1. במקרה של כלבי פרא (איור 1A) או חיות עצבניות, אספו דגימות מהקרקע מיד לאחר עשיית הצרכים או לא יותר מ-10 דקות מאוחר יותר.
  2. יש לשמן כפפות כירורגיות או שקיות פוליאתילן בעלות דופן דקה במים או בוזלין. כדי לאסוף דגימות צואה מפי הטבעת, ללבוש כפפות כירורגיות או שקיות פוליאתילן דקיקות.
  3. אספו לפחות 2 גרם צואה מכל כלב (איור 1B).
  4. זהה דגימות צואה בודדות באופן הבא: תאריך, מיקום (מתאם מערכת מיקום גלובלית [GPS] באמצעות מפות Google), הקצה מספר זיהוי לכל חיה, גיל משוער של הכלב, מין הכלב, גזע, כלב פנימי או חיצוני (פראי).
  5. סגור את השקיות המכילות את דגימת הצואה בקשר הדוק. יש לשמור את השקיות בקירור (4-8 מעלות צלזיוס) אם דגימות הצואה אינן מנותחות תוך 3-4 שעות לאחר האיסוף.

2. הכנת תמיסת מלח רווי לאבחון שדה

הערה: אם הגישה לאיזון, לחומר מדידה, לתנורים או לגז להרתחת מים נעדרת או מוגבלת, ניתן להכין בקלות את תמיסת המלח הרוויה באמצעות מים, מלח שולחן משותף, פלסטיק בנפח 355 מ"ל (12 אונקיות) ובקבוק ריק מפלסטיק בנפח 1 ליטר.

  1. יש לשטוף היטב בקבוק סודה ריק בנפח 1 ליטר. מלאו את הבקבוק בליטר אחד של מים.
  2. מלאו פלסטיק בנפח 350 מ"ל במלח שולחן.
  3. מעבירים את המלח לבקבוק הסודה.
  4. סגור היטב את בקבוק הסודה עם פקק הבורג. נערו את התמיסה במרץ עד שהמלח כבר לא יתמוסס.
    הערה: טלטול התמיסה בבקבוק הסודה עד להמסה מלאה של מלח יכול להימשך עד 90 דקות.

3. הכנת תמיסת מלח רווי לאבחון מעבדה

  1. שוקלים 420 גרם מלח שולחן נפוץ.
  2. ממיסים 420 גרם מלח ב 1 ליטר מים.
  3. מרתיחים את התמיסה עד שלא נמס עוד מלח.
  4. סנן את התמיסה כדי להשליך את המלח הבלתי מומס.
  5. בדוק את ריכוז התמיסה באמצעות הידרומטר נוזל כבד או מד צפיפות.
    הערה: לריכוז האידיאלי יש SpG של 1.20 כדי להשיג תוצאות טובות יותר (איור 2A). יכולת הציפה של ביצה מושפעת מהאינטראקציה שלה עם התמיסה, ותורמת ליכולת המשתנה של ביצים לצוף בתמיסות עם אותו כוח משיכה סגולי. לפיכך, כדי להשיג התאוששות ביצים אופטימלית, חיוני לקחת בחשבון את הטווח העליון של הכובד הספציפי בתמיסת ההנפקה, ולהבטיח שהוא עולה על זה של יסודות הטפיל הממוקד6.

4. שיטת ההנפקה

הערה: אם דגימות הצואה יבשות או קשות מדי, השרו אותן במכתש.

  1. בעזרת כף, מניחים כ -3 גרם צואה בכוס פלסטיק אחת (~ 8.5 ס"מ גובה וקוטר ~ 5.5 ס"מ).
  2. מוסיפים 1 מ"ל של תמיסת מלח רווי עד לקבלת הדבק.
  3. מערבבים במשך דקה אחת ומוסיפים 100 מ"ל של תמיסת מלח רווי.
  4. העבירו את המתלה הזה דרך מסננת פלסטיק לכוס פלסטיק שנייה כדי להימנע מחלקיקים גסים (איור 2B).
  5. תן למתלים לעמוד במשך 15-20 דקות.
  6. הניחו לולאת חיסון בלהבה למשך שנייה אחת כדי לוודא שהיא נקייה מביציות, ציסטות או ביציות (איור 2C).
  7. המתינו 5 שניות עד שלולאת החיסון תתקרר (איור 2D).
  8. קח שלוש טיפות מפני השטח של המתלה עם לולאת החיסון. הניחו כל אחת משלוש הטיפות בנפרד על מגלשת זכוכית אחת (איור 2E-G)
    הערה: ודאו שהטיפות אינן במגע זו עם זו (איור 2H).
  9. התבוננו מתחת למיקרוסקופ עם מטרה של פי 10 (איור 2I). הניחו מכסה אם ההגדלה גדלה ל-40x.
  10. כאשר תוצאה חיובית נצפתה בטיפתה, הקצה צלב (+) ביומן המעבדה כדי לרשום את נוכחותם של טפילים בתקופת הפטנט באתרים אקראיים של משטח ההשעיה הצואה.

5. פרשנות שיטת ההנפקה

הערה: תוצאות שליליות אינן חד משמעיות.

  1. בצע סדרה של שלוש בדיקות עם דגימות מ -3 ימים רצופים כדי להגביר את רגישות הבדיקה.
    הערה: תוצאות חיוביות מצביעות על נוכחות של טפילים בתקופת הפטנט.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

בעבודה זו מתוארים הליכי איסוף וקופרופרסיטוסקופיים לזיהוי T. canis ו - Ancylostoma spp. הרציונל מאחורי ההתאמה של שיטת הציפה הצואה הפשוטה לגילוי ביצי הלמינת'ס של כלבים הוא שטכניקה זו חסכונית מכיוון שהפתרונות, הציוד והחומרים זולים. לפיכך, לשיטה יכולת טיפול גבוהה בדגימות מכיוון שניתן לעבד דגימות מרובות בתקופה קצרה. יתר על כן, שיטת ההנפקה הצואה הפשוטה קלה לביצוע ורגישה יחסית.

גודל המדגם ובחירת בעלי החיים נעשו על ידי נוחות שנקבעה בעיקר על ידי נכונותו של הבעלים של בעלי החיים ואת הבטיחות של כלבי פרא מתקרבים. בעבודה הנוכחית, שיטת ההנפקה שימשה להערכת מופעים ותדרים של Ancylostoma spp. ו - T. canis בכלבים Canis lupus familiaris במקסיקו במהלך 4 שנים החל משנת 2017. דגימות צואה מ-1,638 כלבים נאספו ונבדקו במיקרוסקופ. בסך הכל 1,235 כלבים נמצאו חיוביים ל-T. canis ול-Ancylostoma spp. אחת המטרות של השימוש בשיטת ההנפקה הייתה להדגים את יעילותה במדידת התרחשות טוקסוקרה או אנצילוסטומה, אך שאפנו גם לבצע בדיקה מעמיקה יותר של הגורמים שיכולים להשפיע על שכיחותם. כתוצאה מכך, 185 בעלי חיים עם זיהומים מעורבים הושלכו. מספר הדגימות החיוביות עבור Ancylostoma spp. היה 833 (78.95% תדירות) ו 222 (21.04%) עבור T. canis. מתוך 1,050 הדגימות, 75.5% (793 דגימות) עובדו ונקראו בשטח על ידי הכנת תמיסת ההנפקה עם בקבוק סודה ושימוש במיקרוסקופ עם 3 x 1.2 V AA סוללות נטענות למשך 4 שעות של פעולה רציפה. 257 דגימות הצואה הנותרות נבדקו במעבדה.

מטרת מחקר זה הייתה להשתמש בתמיסת ציפה ובשיטה בשטח כדי לזרז ולהקל על האבחון של שני טפילי הלמינת'ס של כלבים באזורים בהם אין תשתית מעבדה או ציוד זמין. יישום שיטת ההנפקה בשטח אפשר לנו להעביר ממצאים ל-400 בעלים מיד לאחר כל קריאה מיקרוסקופית כדי לספק המלצות לגבי טיפולים אנטילמינטיים ואמצעי מניעה ובכך להימנע מהתפשטות טפילים בבני אדם או בחיות מחמד. כמו כן, טכניקת הציפה בשטח אפשרה לבחון כלבי פרא ולהעניק להם טיפול אנטלמינטי באמצעות פינוקים או מזון. איור 3A ואיור 3B מראים ביצים של T. canis ו-Ancylostoma spp., בהתאמה, שנצפו לאחר שתמיסת ההנפקה והטכניקה נעשו בסביבת שדה. כאשר דגימות צואה טריות היו נתונות לשיטת ההנפקה בשטח, התמיסה שהוכנה בבקבוק סודה הייתה מסוגלת להביא ביצי הלמינת'ס לציפה. ייצור גבישי מלח ובועות אוויר הושווה לדגימות שנקראו בתנאי מעבדה ולא זוהה הבדל על ידי המפעיל. תצפית זו מעודדת ומאתגרת את הידיעה שריכוז דגימות צואה מבטיח קריאה מיקרוסקופית מדויקת יותר.

כאשר תמיסת ההנפקה ודגימות הצואה עובדו בתנאי מעבדה, לא נצפה הבדל במורפולוגיה ובבהירות של הקריאות תחת המיקרוסקופ, שכן אותה כמות פסולת צפה בו זמנית הן בשדה והן בגילוי קופו-מיקרוסקופי של טפילים. איור 3A,B מראה ביצי T. canis ו-Ancylostoma spp., בהתאמה, שנמצאו מ-257 דגימות שעובדו בסביבת מעבדה מאובזרת לחלוטין לאחר הובלת דגימות מאזורים עירוניים, פרבריים וכפריים. ביצי הטפילים האלה לא היו שונות מורפולוגית מאלו שנצפו בתנאי שדה (איור 3C).

פרוטוקול זה הניב מספר מספיק של ממצאים כדי להעריך את ההשפעה של מיקום, עונה בשנה, מין, גזע, גיל ותנאים חיצוניים או פנימיים בשכיחות T. canis ו - Ancylostoma spp. נתוני השכיחות הושוו באמצעות מבחן ANOVA עם ערך מובהקות של 0.05. טבלה 2 מראה כי T. canis הציג תדירות גבוהה משמעותית של פיזור באקלים ממוזג ויבש בהשוואה למצבים המאופיינים באקלים חם, בעוד שלא הייתה שונות ניכרת בשכיחות של Ancylostoma spp. באזורים עם אקלים חם, ממוזג או יבש דומיננטי. כמו כן, Ancylostoma spp. ו - T. canis מזוהים לרוב בקיץ. נמצא כי 60.86% מהגברים היו חיוביים לאנצילוסטומיאזיס ו -37.38% לטוקסוקריאזיס. יתר על כן, T. canis זוהה בתדירות גבוהה יותר אצל גורים מתחת לגיל 6 חודשים; ואילו Ancylostoma spp. אובחן יותר בכלבים בוגרים. באופן מעניין, לא נמצא הבדל בין גזעי כלבים. תולעי הקרס הדביקו 65.54% מכלבי החוץ; עם זאת, T. canis זוהה באותה מידה אצל כלבים עם סטטוס חיצוני או מקורה.

Figure 1
איור 1: איסוף דגימות צואה מכלבים. (א) יש לנקוט משנה זהירות בעת איסוף דגימות צואה מכלבי פרא. במידת האפשר, יש לאסוף צואה טרייה ולשמור אותה בשקית ניילון לצורך הגשה וניתוח קופרופארסיטוסקופי במעבדה. יש לשמור את הדגימות בקירור בטמפרטורה של 4°C ולהניח אותן בקופסאות קלקר או מעטפות מתכתיות מבודדות תוך 24 שעות מרגע האיסוף. (ב) שלושה גרם צואה מומלצים כסטנדרט; לפיכך, 2-5 גרם הוא סביר. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2: הכנת תמיסת מלח רווי ועיבוד תרחיף הצואה למיקרוסקופיה. (A) הצפיפות האידיאלית של תמיסה רוויה המיוצרת במלח צריכה להיות מעל 1.20. מומלץ מאוד לבדוק שאין גבישים בתחתית והתמיסה שקופה. (B) העברת מתלה הצואה דרך מסננת פלסטיק מסירה חלקיקים גסים. (C) לולאת החיסון חייבת להיות חשופה ללהבה (מבער מעבדה או מצית נייד נפוץ) כדי לוודא שהיא נקייה מזיהום. (D) לאפשר ללולאת החיסון להתקרר ולקחת שלוש טיפות מאתרים שונים על פני השטח של התרחיף. (E) לאחר הנחת הטיפה הראשונה על מגלשת הזכוכית, הימנעו מהזזת המגלשה כדי להפחית את שפיכת הטיפה. מגלשת הזכוכית מספקת פלטפורמה דקה ושקופה המאפשרת תצפית על דגימות. (F) הניחו את הטיפה השנייה במרכז מגלשת הזכוכית. לקיחת טיפה שנייה מפני השטח של תרחיף הצואה מגדילה את ההסתברות למצוא ביצים בתרחיף שבו מבנים טפיליים עשויים להיות מופצים באופן לא שווה. (G) הניחו את הטיפה השלישית על מגלשת הזכוכית. טיפה שלישית מפני השטח של תרחיף הצואה תאפשר תצפית על אזור אחר שבו התרכזו ביצים צפות. (H) שלוש הטיפות נצפות בנפרד על מגלשת הזכוכית כדי לזהות ביצי נמטודות מאזורים שונים של פני השטח של תרחיף הצואה. (I) התבוננו בדגימה תחת מיקרוסקופ באמצעות המטרה 10x. אם המטרה משתנה ל 40x, מניחים כיסוי על טיפות מתלה הצואה. כאשר תוצאה חיובית נצפתה בטיפה, להקצות צלב (+) כדי לסמן את נוכחותם של טפילים בתקופת הפטנט באתרים אקראיים של משטח ההשעיה צואה. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 3
איור 3: ביצים של Toxocara canis ו-Ancylostoma spp. שזוהו במיקרוסקופ אור באמצעות הגדלה פי 40. (A) ביצים של Toxocara canis שזוהו במיקרוסקופ אור באמצעות הגדלה של פי 40. שיטת ההנפקה אפשרה הדמיה של שדות מיקרוסקופיים נקיים ללא חומרים גסים (שנאספו בסביבת שדה). ללא קשר לשיטת הכנת תמיסת ההנפקה, הביצים נראו ונצפו בעיקר ללא שינויים מורפולוגיים. (B) ביצים של Ancylostoma spp. שזוהו במיקרוסקופ אור באמצעות הגדלה של פי 40. למרות שלא בוצע ריכוז צואה (במסגרת שדה), שיטת ההנפקה הפשוטה התייחסה לחסרונות של זיהוי מורפולוגי של ביצים בצואה כאשר ההליך נעשה בשיטה הנוכחית. (C) ביצים של T. canis ו - Ancylostoma spp. שזוהו במיקרוסקופ אור באמצעות הגדלה פי 40. המאפיינים המורפולוגיים של ביצים אלה (שנמצאו בתנאי מעבדה) היו ברורים למרות שלא נעשה ריכוז דגימות צואה ולא היו שונות מהביצים שנמצאו בסביבת שדה. מוטות קנה מידה = 75 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Ancylostoma spp. טוקסוקרה קאניס
אקלים אקלים חם 38.66א 22.52אמפר
אקלים יבש 29.41אמפר 36.03א
אקלים ממוזג 31.93א 41.44ב
אביב 23.76אמפר 19.81א
קיץ 49.81ב 50.00ב
סתיו 17.52אמפר 20.27אמפר
חורף 8.88ג 9.90ג
מין זכר 60.86אמפר 62.61אמפר
נקבה 39.13ב 37.38ב
גיל 0-3 חודשים 18.72א 51.80אמפר
3-6 חודשים 15.48אמפר 32.43ב
> 6 חודשים 22.44אמפר 10.36ג
> 1 שנה 43.33ב 5.40ג
גזע קרוסברד 52.78אמפר 55.86א
גזעי 47.22א 44.14א
מצב דיור מקורה 34.45א 52.25אמפר
חיצונית 65.54אמפר 47.74ב

טבלה 2: שכיחות (%) של Ancylostoma spp. ו - Toxocara canis בכלבים במקסיקו במהלך 4 שנים בהתאם לאקלים, עונה, מין, גיל, גזע ומצב דיור. אינדיקציות מהנתונים מראות כי אין שונות משמעותית בשכיחות של Ancylostoma spp. בין אזורים המאופיינים באקלים חם, ממוזג או יבש. לעומת זאת, T. canis מציג שכיחות גבוהה יותר באופן בולט באקלים ממוזג ויבש בהשוואה לאקלים חם. בנוסף, הן Ancylostoma spp. והן T. canis מזוהים בתדירות הגבוהה ביותר במהלך עונת הקיץ. ניתוח הנתונים מראה עוד כי 60.86% מהכלבים הזכרים נמצאו חיוביים לאנצילוסטומיאזיס ואילו 37.38% נמצאו חיוביים לטוקסוקריאזיס. יתר על כן, T. canis מזוהה יותר אצל גורים מתחת לגיל 6 חודשים, בעוד Ancylostoma spp. נפוץ יותר אצל כלבים בוגרים. באופן מעניין, לא נצפו הבדלים ניכרים בין גזעי כלבים שונים. הממצאים מצביעים על כך ש-65.54% מכלבי החוץ נגועים בתולעי קרס של כלבים, בעוד ש-T. canis שכיח באותה מידה בקרב כלבי פנים וחוץ. * ערכים ממוצעים בתוך עמודה של הגורם (אקלים, עונה, מין, גיל, גזע ודיור) ואחריו אותן אותיות אינם שונים באופן משמעותי ב- P < 0.05 על פי מבחן ANOVA.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

נמטודות כגון T. canis ו - Ancylostoma spp. יכולות לאכלס את המעי הדק של כלבים ויש להן פוטנציאל להיות מועברות לבני אדם. סימנים קליניים הנגרמים על ידי T. canis הם חמורים אצל כלבים צעירים, ומתבטאים בגדילה לקויה, בעיות נשימה או נגעים במערכת העיכול28. אצל כלבים בוגרים, הזיהום נוטה בדרך כלל להיות קל. האבחון מסתמך על זיהוי ביציות אופייניות בדגימת צואה. מצב זה הוא סיבה שכיחה לרשום טיפול anthelmintic לכלבים29. כדי להבין את האפידמיולוגיה של טוקסוקרה, חיוני להכיר בכך שהטפיל יכול לעבור מהאם לגור הן דרך השליה לפני הלידה והן באמצעות יניקה כזיהום גלקטוגני זמן קצר לאחר ההמלטה. בני אדם יכולים להידבק T. canis בעת בליעת ביצים זיהומיות, אשר יכול להתרחש באמצעים שונים כגון אדמה מזוהמת או פרווה של כלב נגוע. במקרה זה, בני אדם משמשים פונדקאים פאראטניים, ובעוד שאין רבייה טפילית, הזחלים המשוחררים מהביצים עלולים לגרום נזק, במיוחד במקרה של ילדיםבני 30.

זיהום בתולעת קרס Ancylostoma spp. אצל כלבים מתרחש כאשר בעלי החיים בולעים את הזחלים או כאשר הזחלים חודרים לעור. גורים יכולים להידבק בזיהום על ידי צריכת פונדקאי פרטני או דרך מסלול לקטוגני31. תולעי קרס בוגרות ניזונות מדם, מה שעלול להוביל לאנמיה חמורה ולתסמינים במערכת העיכול, במיוחד אצל כלבים צעירים. זיהומים המתרחשים דרך העור לגרום דרמטיטיס, אשר בדרך כלל נפתרת כשבוע לאחר תחילת הזיהום. נעשה שימוש בתרופות אנטלמינטיות שונות, המלוות בטיפול תומך. עם זאת, היו דיווחים על התנגדות אנטלמינטית (anthelmintic). לאנסילוסטומה יש פוטנציאל להיות פתוגנית לבני אדם. העברה טרנסעורית של זחלי L3 יכולה להוביל למצב המכונה זחלים עוריים נודדים. נגעים אלה בדרך כלל נפתרים ללא טיפול במשך מספר חודשים. במקרים נדירים, תולעי הקרס הכלביות עלולות לנדוד למערכת העיכול האנושית, ולגרום לדלקת מעיים אאוזינופילית30.

אבחון מדויק, חסכוני ומהיר של טפילים בכלבים חיוני להגדלת הידע האפידמיולוגי שלנו על הלמינטיאזות כלבים. מסיבה זו, התאמנו פרוטוקול של טכניקת ההנפקה הפשוטה לשימוש בסביבת שדה כדי לזהות T. canis ו - Ancylostoma spp. סוגיה רלוונטית שעמדה בפני הפרוטוקול הנוכחי הייתה איסוף דגימות מכלבי פרא, שכן בעלי חיים אלה בדרך כלל קשים לטיפול. לכן, הדגימה נעשתה על ידי תצפית ומעקב אחר הכלבים עד שהם עושים את צרכיהם, מה שהופך את שיטת הדגימה לגוזלת זמן, מאתגרת, ואיכשהו מסוכנת. על פי ניסיוננו, אנו ממליצים בחום לבצע מחקרים פרזיטולוגיים בכלבי מקלט.

לגבי שחזור ביצית הלמינת'ס הזואונוטית, קופרוסקופיה איכותית ממשיכה להיות המתודולוגיה הנפוצה במעבדה לפרזיטולוגיה למטרות אבחון1. מחקרים קודמים מצאו כי טכניקת ההנפקה באמצעות תמיסת מלח רווי אמינה יותר ממיקרוסקופיה ישירה. לדוגמה, דריידן ועמיתיו קבעו רגישות של 95.15% לביצים מסוג Ancylostoma spp. ב-206 דגימות צואה שעובדו בטכניקת ההנפקה ו-27.18% במיקרוסקופ ישיר32. מקובל כי צפיפות תמיסת ההנפקה היא גורם קריטי לשיטת ההנפקה 14,20,23. בתמיסות שאינן מגיעות לצפיפות זו, לצורות הטפיליות לוקח זמן רב יותר לצוף או לעולם לא לצוף. כאשר תמיסת הנפקה רוויה יתר על המידה, היא מתגבשת תוך מספר דקות ואף קודם לכןאם מניחים כיסוי.

הבחירה בפתרון ההנפקה בפרוטוקול זה התבססה על קלות ההכנה, הנוחות, העלות וההשפעה על הסביבה. למרות שתמיסת הסוכר לוקחת זמן רב יותר להתגבש, יש להוסיף פורמלין או פנול כחומר משמר ולהפחית את תחושת הדביק או הדביק; שהיא אי נוחות בתנאי השטח ששררו במחקר זה. יתר על כן, סילוק ריאגנטים כימיים הוא נושא מורכב בשל תקנות סביבתיות. הנתונים במחקר זה הראו כי התמיסה הרוויה שהוכנה עם מלח שולחן נפוץ בתנאי שדה באמצעות בקבוק סודה בשל חוסר זמינות של ציוד מעבדה להכנת ומרתיחת תמיסת ציפה, הייתה יעילה כמו זו שהוכנה בתנאי מעבדה. ההבדל המורגש היחיד הוא הזמן הארוך יותר שלוקח לנער את בקבוק הסודה עד שניתן לראות פתרון שקוף. תצפיות מיקרוסקופיות היו נקיות באותה מידה עבור הדגימה שהוכנה בשתי השיטות להכנת התמיסה הרוויה. חשוב לבצע מחקרים נוספים בעתיד עם מספר גדול יותר של דגימות כדי לאשר את ההצהרה הנ"ל. עם זאת, זה גוזל זמן ודורש את המאמץ הפיזי של ניעור התמיסה בתוך הבקבוק במשך שעות. שלב קריטי נוסף בפרוטוקול הוא לתת לתרחיף הצואה לעמוד לפחות 15 דקות כדי לאפשר לביצים לצוף ולהתרכז על פני השטח. עם זאת, ככל שזמן המנוחה ארוך יותר, כך יותר פסולת תצוף ולאחר מספר שעות, הביצים יתעוותו או יישברו. בהתחשב בכך רגישות וספציפיות של שיטות coproparasitoscopic הם נמוכים וכי הדיוק של שיטות אלה כמו בדיקות אבחון תלוי במיומנויות של המשתמש, במחקר הנוכחי, פרזיטולוגים מאומנים ומנוסים ביצעו את טכניקת ההנפקה וזיהו את הטפילים.

מחקר זה, למיטב ידיעתנו, הוא הראשון להעריך את השכיחות של Ancylostoma spp. ו - T. canis בכלבים במקסיקו באמצעות דגימות צואה שנבדקו בשיטת הציפה הפשוטה בסביבת שדה. כאן הוכח כי טכניקת ההנפקה בה השתמשנו, למרות עשרות השנים בהן היא נמצאת בשימוש, היא עדיין בדיקת אבחון יעילה, חסכונית ומהירהביותר 14. עם זאת, ישנן טכניקות coproparasitoscopic עם רגישות גבוהה יותר ספציפיות מאשר זה שבו השתמשנו לאבחון של הלמינת'ס כלבים; כגון ריכוז השיקוע, כמו במקרה של טכניקת פאוסט. יתר על כן, חשוב לציין כי פאוסט, שהיא שיטת ריכוז, הוכחה גם כיעילה יותר בזיהוי פרוטוזואה כגון Giardia33. עם זאת, לשיטה הקופרופרזיטוסקופית שבחרנו למחקר זה היו מספר יתרונות כגון עלות. טכניקת פאוסט יקרה יותר מהנפקה בתמיסה רוויה במי מלח משום שהיא דורשת ציוד נוסף ויקר כמו צנטריפוגה. שיטות ריכוז אחרות כגון אלה המשתמשות בריאגנטים כגון אבץ גופרתי יקרות יותר ממלח רגיל ודורשות זמן רב יותר בשל מספר השטיפות הנדרשות בצנטריפוגה. לכן, טכניקת פאוסט מוגבלת לשימושה בעבודת שדה שבה אין גישה לצנטריפוגה.

והכי חשוב, מגבלה של טכניקת ההנפקה הפשוטה היא שהיא אינה רגישה מספיק כדי לזהות ביציות קריפטוספורידיום , ציסטות ג'יארדיה או ביציות טריכוריס . לפיכך יש להשתמש בטכניקות המשתמשות בהליכי צנטריפוגה כדי לרכז צורות טפילים אם האבחנה של מינים אלה מיועדת. יש חשיבות להדגיש כי אין להתייחס לשיעורי החיוביות של הסוגים שדווחו במחקר זה כחד משמעיים מכיוון ששיטת נוחות שימשה כאסטרטגיית דגימה. חשוב לציין כי ייתכנו מצבים, כגון במקלטים עם ניהול מאתגר של בעלי חיים, שבהם זה הופך להיות קריטי לזהות טפילי הלמינת'ס אצל כלבים. כתוצאה מכך, פרוטוקול זה עשוי להזדקק להתאמות בעתיד כדי להתאים לאיסוף הדגימות המשולבות.

כנקודת תורפה, יש לציין כי שיטת ההנפקה הפשוטה והכנת התמיסה הרוויה של NaCl פותחו למטרה ספציפית - לבדוק צואת כלבים בתנאי שדה בעיקר - אך רגישות הליך הציפה הפשוט נחשבה בדרך כלל לנמוכה. לכן, כדי לזהות ציסטות או ביצים של מיני טפילים כבדים יותר, מומלץ מאוד להשתמש בטכניקת ריכוז. בהתחשב ברגישות הנמוכה של שיטת ההנפקה הפשוטה, ללא קשר אם היא מבוצעת בשטח או בתנאי מעבדה, היה סביר ספק אם טכניקה זו תהיה שימושית כשיטת בחירה למחקרים אפידמיולוגיים של טפילי הלמינתוס כלבים. עם זאת, השכיחות הגבוהה של Ancylostoma spp. בכלבים במחקר זה והזיהוי של ביצי T. canis מצביעים על כך ששיטת ההנפקה הפשוטה, בין אם היא מבוצעת בשדה או בתנאי מעבדה, שימושית כדי לספק ראיות שעשויות לתמוך במחקרים אפידמיולוגיים נוספים ולהציע אמצעי בקרה ומניעה להפחתת ההדבקה של כלבים ובני אדם בנמטודות אלה.

באמצעות שיטת ההנפקה הפשוטה, ניתחנו את הגורמים המשפיעים על T. canis ו- Ancylostoma spp. התאוששות ביצים מצואת כלבים. ממצאי T. canis עולים בקנה אחד עם המחקר האחרון המצביע על כך שטפילים נפוצים יותר באזורים ממוזגים וטרופיים. זה עולה בקנה אחד עם מחקרים קודמים שבדקו כיצד גורמים סביבתיים, במיוחד טמפרטורה וגשמים, משפיעים על הטווח האקולוגי של מיני טפילים 34,35,36. התוצאות הנוכחיות הראו כי שני הלמינת'ס מדביקים זכרים בשיעור גבוה משמעותית. סביר לשער כי ממצא זה נובע מכך שזכרים מגיבים פחות מבחינה חיסונית לזיהומים37,38. הגיל משפיע על שכיחות T. canis מכיוון שגורים הושפעו יותר מטפיל זה. ממצא זה מתיישב עם מחקרים קודמים שהצביעו על כך שטפיל זה נוטה להשפיע על גורים במידה רבה יותר, בעוד שבוגרים מפתחים עמידות מוגברת, וכתוצאה מכך הסבירות להדבקה נמוכה יותר 6,39. גם כלבים גזעיים וגם כלבים גזעיים הראו שכיחות דומה של Toxocara canis ו- Ancylostoma spp. עם זאת, כלבי פרא הציגו שכיחות גבוהה יותר של Ancylostoma spp. בהשוואה לכלבים המתגוררים בסביבה ביתית. ממצא זה אינו עולה בקנה אחד עם דיווחים קודמים שלא זיהו הבדלים בין גזעי כלבים6. ניתן להסיק כי יישומים עתידיים של הכנת תמיסת מלח רוויה ושיטת ההנפקה הפשוטה המשמשת בפרוטוקול זה יכולים להתבצע לבדיקות צואה שגרתיות בתנאי שדה או מעבדה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

Acknowledgments

המחברים אסירי תודה ל-Dirección General de Asuntos del Personal Académico של האוניברסיטה הלאומית האוטונומית של מקסיקו על אספקת המשאבים הכספיים באמצעות מענק PAPIIT IN218720 ולד"ר קלאודיה מנדוזה על מתן ההארכה המבוקשת. עבודה זו מוקדשת לניקול המקסימה שלי, שנפטרה בשנת 2019. אתה תמיד תחיה בליבי.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
3 x 1.2 V AA rechargeable batteries Energizer Sold in retail stores
Bunsen burner Viresa FER-M224
Disposable 12-oz glass cup Uline Mexico S-22275 Sold in retail stores
Glass slides Velab, Mexico VEP-P20
Inoculating loop VelaQuin, Mexico CRM-5010PH 
Light Microscope VelaQuin, Mexico VE-B2
Lighter Bic J25 Sold in retail stores
One plastic cup (12 oz) Amazon ASIN B08C2CRHSH Can be any kitchen plastic reuseable cup
Plastic cups  (size of a dice or urine sample cup) diameter 5.5 cm and height 8.5 cm, two cups Amazon Layhit-Containers-ZYHD192919 Can be any kitchen plastic reuseable cup
Plastic strainer 10 cm Ecko ASIN B00TUAAVWI Can be any kitchen plastic strainer
Soda bottle Coca-Cola 1-liter Sold in retail stores
Spoon Amazon Basics ASIN B00TUAAVWI Can be any kitchen spoon
Table salt La Fina Sold in retail stores

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Duncan, K. T., Koons, N. R., Litherland, M. A., Little, S. E., Nagamori, Y. Prevalence of intestinal parasites in fecal samples and estimation of parasite contamination from dog parks in central Oklahoma. Veterinary Parasitology Regional Studies and Reports. 19, 100362 (2020).
  2. Kisiel, L. M., et al. Owned dog ecology and demography in Villa de Tezontepec, Hidalgo, Mexico. Preventive Veterinary Medicine. 135, 37-46 (2016).
  3. Lyons, M. A., Malhotra, R., Thompson, C. W. Investigating the free-roaming dog population and gastrointestinal parasite diversity in Tulúm, México. PLoS One. 17 (10), e0276880 (2022).
  4. Dantas-Torres, F., et al. TROCCAP recommendations for the diagnosis, prevention and treatment of parasitic infections in dogs and cats in the tropics. Veterinary Parasitology. 283, (2020).
  5. Cantó, G. J., García, M. P., García, A., Guerrero, M. J., Mosqueda, J. The prevalence and abundance of helminth parasites in stray dogs from the city of Querétaro in central Mexico. Journal Of Helminthology. 85 (3), 263-269 (2011).
  6. Torres-Chablé, O. M., et al. Prevalence of gastrointestinal parasites in domestic dogs in Tabasco, Southeastern Mexico. Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária. 24 (4), 432-437 (2015).
  7. Cortez-Aguirre, G. R., Jiménez-Coello, M., Gutiérrez-Blanco, E., Ortega-Pacheco, A. Stray dog population in a city of Southern Mexico and its impact on the contamination of public areas. Veterinary Medicine International. 2018, 1-6 (2018).
  8. Rodríguez-Vivas, R. I., et al. An epidemiological study of intestinal parasites of dogs from Yucatán, Mexico, and their risk to public health. Vector Borne Zoonotic Diseases. 11 (8), 1141-1144 (2011).
  9. Maggi, R. G., Krämer, F. A review on the occurrence of companion vector-borne diseases in pet animals in Latin America. Parasites & Vectors. 12 (1), 145 (2019).
  10. Cruz-Vazquez, C., Castro, G., Parada, F., Ramos, P. Seasonal occurrence of Ctenocephalides felis and Ctenocephalides canis (siphonaptera:Pulicidae) infesting dogs and cats in an urban area in Cuernavaca, Mexico. Entomological Society of America. 38 (1), 111-113 (2001).
  11. Bolio-Gonzalez, M. E., et al. Prevalence of the Dirofilaria immitis infection in dogs from Mérida, Yucatán, Mexico. Veterinary Parasitology. 148 (2), 166-169 (2007).
  12. Pastor-Santiago, J. A., Flisser, A., Chávez-López, S., Guzmán-Bracho, C., Olivo-Díaz, A. American visceral leishmaniasis in Chiapas, Mexico. The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 86 (1), 108-114 (2012).
  13. Trasviña-Muñoz, E., et al. Detection of intestinal parasites in stray dogs from a farming and cattle region of Northwestern Wexico. Pathogens. 9 (7), (2020).
  14. Ballweber, L. R., Beugnet, F., Marchiondo, A. A., Payne, P. A. American Association of Veterinary Parasitologists' review of veterinary fecal flotation methods and factors influencing their accuracy and use--is there really one best technique. Veterinary Parasitology. 204 (1-2), 73-80 (2014).
  15. Nielsen, M. K. What makes a good fecal egg count technique. Veterinary Parasitology. 296, 109509 (2021).
  16. Gordon, H. M., Whitlock, H. V. A new technique for counting nematode eggs in sheep faeces. Journal of the Council for Scientific and Industrial Research. 12 (1), 50-52 (1939).
  17. O'grady, M. R., Slocombe, J. O. D. An investigation of variables in a fecal flotation technique. Canadian Journal of Comparative Medicine. 44 (2), 148 (1980).
  18. ESCCAP. Worm control in dogs and cats. Guideline 01. European Scientific Counsel Companion Animal Parasites. , (2017).
  19. Cringoli, G., et al. Ancylostoma caninum: Calibration and comparison of diagnostic accuracy of flotation in tube, McMaster and FLOTAC in faecal samples of dogs. Experimental Parasitology. 128 (1), 32-37 (2011).
  20. Figueroa, C. J. A. Examen coproparasitoscópico. In: Técnicas para el diagnóstico de parásitos con importancia en salud pública y veterinaria, Consejo Técnico Consultivo Nacional de Sanidad Animal. AMPAVE-CONASA. , 83-105 (2015).
  21. Dryden, M. W., Payne, P. A., Ridley, R., Smith, V. Comparison of common fecal flotation techniques for the recovery of parasite eggs and oocysts. Veterinary Therapeutics. 6 (1), 15-28 (2005).
  22. Adolph, C., et al. Diagnostic strategies to reveal covert infections with intestinal helminths in dogs. Veterinary Parasitology. 247, 108-112 (2017).
  23. Cringoli, G., Rinaldi, L., Maurelli, M. P., Utzinger, J. FLOTAC: New multivalent techniques for qualitative and quantitative copromicroscopic diagnosis of parasites in animals and humans. Nature Protocols. 5 (3), 503-515 (2010).
  24. Katagiri, S., Oliveira-Sequeira, T. C. Comparison of three concentration methods for the recovery of canine intestinal parasites from stool samples. Experimental Parasitology. 126 (2), 214-216 (2010).
  25. Rehbein, S., Lindner, T., Visser, M., Winter, R. Evaluation of a double centrifugation technique for the detection of Anoplocephala eggs in horse faeces. Journal of Helminthology. 85 (4), 409-414 (2011).
  26. Liccioli, S., et al. Sensitivity of double centrifugation sugar fecal flotation for detecting intestinal helminths in coyotes (Canis latrans). Journal of Wildlife Diseases. 48 (3), 717-723 (2012).
  27. Rishniw, M., Liotta, J., Bellosa, M., Bowman, D., Simpson, K. W. Comparison of 4 Giardia diagnostic tests in diagnosis of naturally acquired canine chronic subclinical giardiasis. Journal of Veterinary Internal Medicine. 24 (2), 293-297 (2010).
  28. Barutzki, D., Schaper, R. Endoparasites in dogs and cats in Germany 1999-2002. Parasitology Research. 90, S148-S150 (2003).
  29. Carlin, E. P., Tyungu, D. L. Toxocara: Protecting pets and improving the lives of people. Advances in Parasitology. 109, 3-16 (2020).
  30. Saari, S., NaReaho, A., Nikander, S. Canine parasites and parasitic diseases. , Academic Press. (2019).
  31. Bowman, D. D., Montgomery, S. P., Zajac, A. M., Eberhard, M. L., Kazacos, K. R. Hookworms of dogs and cats as agents of cutaneous larva migrans. Trends in Parasitology. 26 (4), 162-167 (2010).
  32. Dryden, M. W., Payne, P. A., Ridley, R., Smith, V. Comparison of common fecal flotation techniques for the recovery of parasite eggs and oocysts. Veterinary Therapeutics. 6 (1), 15-28 (2005).
  33. Barutzki, D., Schaper, R. Results of parasitological examinations of faecal samples from cats and dogs in Germany between 2003 and 2010. Parasitology Research. 109, S45-S60 (2011).
  34. Novobilský, A., Novák, J., Björkman, C., Höglund, J. Impact of meteorological and environmental factors on the spatial distribution of Fasciola hepatica in beef cattle herds in Sweden. BMC Veterinary Research. 11, 128 (2015).
  35. Pickles, R. S., Thornton, D., Feldman, R., Marques, A., Murray, D. L. Predicting shifts in parasite distribution with climate change: A multitrophic level approach. Global Change Biology. 19 (9), 2645-2654 (2013).
  36. Pérez-Rodríguez, A., De La Hera, I., Fernández-González, S., Pérez-Tris, J. Global warming will reshuffle the areas of high prevalence and richness of three genera of avian blood parasites. Global Chaneg Biology. 20 (8), 2406-2416 (2014).
  37. Nava-Castro, K., Hernández-Bello, R., Muñiz-Hernández, S., Camacho-Arroyo, I., Morales-Montor, J. Sex steroids, immune system, and parasitic infections: Facts and hypotheses. Annals Of The New York Academy Of Sciences. 1262, 16-26 (2012).
  38. Morales-Montor, J., Escobedo, G., Vargas-Villavicencio, J. A., Larralde, C. The neuroimmunoendocrine network in the complex host-parasite relationship during murine cysticercosis. Current Topics in Medicinal Chemistry. 8 (5), 400-407 (2008).
  39. Olave-Leyva, J., et al. Prevalencia de helmintos gastrointestinales en perros procedentes del servicio de salud de Tulancingo, Hidalgo. Abanico Veterinario. 9 (1), 1-10 (2019).

Tags

החודש ב JoVE גיליון 202 הנפקה coproparasitoscopic טפילים כלב פתרון רווי
שיטת הנפקה צואה פשוטה לאבחון נמטודות זואונוטיות בתנאי שדה ומעבדה
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Segura, J., Alcala-Canto, Y.,… More

Segura, J., Alcala-Canto, Y., Figueroa, A., Del Rio, V., Salgado-Maldonado, G. A Simple Fecal Flotation Method for Diagnosing Zoonotic Nematodes Under Field and Laboratory Conditions. J. Vis. Exp. (202), e66110, doi:10.3791/66110 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter