Undersøgelse af oral Candida-infektion hos primære patienter med Sjögrens syndrom
Summary
Her præsenterer vi en protokol til undersøgelse af oral Candida-infektion hos patienter med primær Sjögrens syndrom, som kan bruges til rettidig behandling og derefter undgå relaterede komplikationer.
Abstract
Primær Sjögrens syndrom (pSS) er en autoimmun sygdom karakteriseret ved symptomer som mundtørhed, tørre øjne og andre systematiske symptomer. På grund af den hyposalivation, som pSS-patienter oplever, forekommer oral dysbakterier ofte. En almindelig komplikation af pSS er den orale Candida-infektion . I denne artikel beskriver forfatterne systematiske metoder, der effektivt kan diagnosticere oral Candida-infektion og identificere Candida-stammerne ved hjælp af spyt, mundslimhindepinde eller mundskyl fra pSS-patienter. Sabourauds Dextrose Agar (SDA), hyphal formation assay, kaliumhydroxid (KOH) smear test, og calcofluor hvid (CFW) farvning assay anvendes til diagnosticering af oral Candida infektion. En Candida diagnostisk agar anvendes til identifikation af Candida stammer. Endelig anvendes svampedræbende følsomhedstest til at bestemme passende svampedræbende lægemiddelbehandling. Denne standardiserede metode kan forbedre diagnosen, behandlingen og fremtidig forskning af pSS-relaterede orale Candida-infektioner . Tidlig diagnose ved hjælp af denne metode kan også forhindre komplikationer, der opstår på grund af forsinkelse i modtagelsen af passende behandling.
Introduction
Candidiasis er forårsaget af Candida spp., Som er opportunistiske patogener. Almindelige stammer omfatter Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis, og Candida dubliniensis1. Opportunistiske infektioner forårsaget af Candida spp. omfatter overfladiske Candida-infektioner og invasiv candidiasis. Invasiv candidiasis sker hovedsageligt hos immunkompromitterede individer; for eksempel hos patienter med erhvervet immundefektsyndrom (AIDS) kan invasiv candidiasis betydeligt true livskvaliteten eller endda levetiden2. Overfladisk Candida-infektion , såsom mucokutan candidiasis, er mere almindelig hos patienter3.
Oral candidiasis, en overfladisk Candida-infektion , er den mest almindelige menneskelige svampeinfektion. Candida albicans er en normal kommensal i munden; transportraten for Candida spp. er rapporteret at variere fra 20% til 75% i den almindelige befolkning uden symptomer4. Overvækst af Candida kan føre til lokalt ubehag hos patienter, såsom den ændrede smag af fornemmelse, brændende fornemmelse i munden, dysfagi på grund af dårlig ernæring, forsinket genopretning og længerevarende hospitalsophold. Langvarig oral candidiasis kan føre til alvorlig invasiv candidiasis, hvilket resulterer i betydelig sygelighed og dødelighed5. Oral candidiasis kan også øge risikoen for oral cancer5. Nedsat spytkirtelfunktion er blandt risikofaktorerne for oral candidiasis6. Indledningen af infektion er vedhæftningen af Candida til epitelcellevægge. Dette efterfølges af spredning og filamentering af Candida og dannelse og modning af biofilm7. Biofilm er ekstremt vanskelige at udrydde og er resistente over for konventionel svampedræbende behandling, hvilket gør klinisk behandling til en udfordring for biofilmassocieret oral Candida-infektion 7.
Primær Sjögrens syndrom (pSS) er en autoimmun sygdom, der er karakteriseret ved mundtørhed, tørre øjne og andre systematiske symptomer8. Mundtørhed er det hyppigste symptom på pSS. Spyt har vigtige fysiologiske svampedræbende funktioner. På den ene side kan det fortynde og skure munden og derefter fjerne organismer fra slimhinden. På den anden side indeholder spyt antimikrobielle proteiner, såsom lactoferrin, sialoperoxidase, lysozym, histidinrige polypeptider og specifikke anti-candidale antistoffer, som kan interagere med mundslimhinden og forhindre overvækst af Candida6. Den reducerede spytstrøm kan prædisponere pSS-patienter for oral candidiasis. En observationstværsnitsundersøgelse udført på 61 pSS-patienter viste, at 13,1% af pSS-patienterne præsenterede orale tegn på candidiasis, og kolonidannende enhed (CFU) / ml af Candida albicans blev fundet signifikant og negativt korreleret med niveauer af ustimuleret fuldspyt (UWS) og stimuleret fuldspyt (SWS)9.
De metoder, der introduceres i dette manuskript, kan identificere oral Candida-infektion baseret på karakteriserede morfologiske egenskaber (f.eks. Hyfer og gærceller) i direkte udstrygning eller efter dyrkning10. Stammeidentifikationen af Candida ved hjælp af en Candida diagnostisk agar er baseret på dannelsen af forskellige farvede kolonier med varieret morfologi, som skyldes spaltning af kromogene substrater af artsspecifikke enzymer11. I dette manuskript introduceres systematiske metoder til påvisning af oral Candida-infektion , herunder traditionel oral Candida-kultur og hurtig undersøgelse ved kaliumhydroxid (KOH) smear-test og calcofluor white (CFW) farvningsassay10. Derudover er antifungal modtagelighedstesten, som kan guide klinisk oral Candida-infektionsbehandling , blevet introduceret. I faktiske situationer er det ikke nødvendigt at udføre alle de indførte metoder i dette manuskript; de(n) orale Candida-detektionsmetode (r) kan vælges i henhold til formålet. Undersøgelsen af oral Candida-infektion og bestemmelse af Candida-stammer hos pSS-patienter gavner ikke kun sygdomsbehandlingen, men hjælper også med at vurdere karakteriseringen af oral candidiasis og artsprofilerne.
Protocol
Representative Results
Discussion
I det nuværende manuskript leverer vi en række systematiske, enkle og gennemførlige metoder til påvisning af orale Candida-infektioner , identifikation af Candida-stammer og test af svampedræbende modtagelighed af almindeligt anvendte lægemidler hos patienter med pSS.
I praktiske indstillinger er ikke alle de metoder, der introduceres i dette manuskript, nødvendige. Den eller de orale Candida-detektionsmetoder kan vælges ud fra det specifikke formål. KOH-u…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Denne forskning blev støttet af National Natural Science Foundation of China (82201084), China Postdoctoral Science Foundation (2022M722232), Beijing Postdoctoral Research Foundation (2023-ZZ-020), Miaopu Project of Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University (2023MP10) og General Research Fund, Hong Kong Research Grants Council (27111820 og 17116521).
Materials
| 0.22 µm Syringe Filter | MERCK | SLGV004SL | |
| 1.5 mL Centrifuge Tube | axygen | MCT-150-C-S | |
| 10 cm Microbiological Culture Dishes | Jet Bio-Filtration Co. Ltd | TCD000100 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | Jet Bio-Filtration Co., Ltd | CFT011150 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430290 | |
| 96-well Microplates | Corning | 3599 | |
| API 0.85% NaCl ampule | BIOMERIEUX | 20070 | |
| Calcofluor White Stain | Sigma-Aldrich | 18909-100ML-F | |
| CHROMagar Candida | CHROMagar | P002860 | Candida diagnostic agar |
| D(+)-Glucose Monohydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10010518 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26170035 | |
| McFarland Standards Kit | BIOMERIEUX | 70900 | |
| Nunc precision molded loops | ThermoFisher Scientific | 254399 | |
| Phosphate Buffered Saline | Gibco | C10010500BT | |
| Potassium Hydroxide | Aladdin | P112284-500g | |
| PowerSoil DNA Isolation Kit | MO BIO | 12888-50 | |
| RPMI 1640 Medium | Gibco | 11875119 | |
| Sabourand's Agar Medium | Solarbio | S9710 | |
| Yeast Nitrogen Base Without Amino acids | Solarbio | Y8040 | |
| Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) | BIOMERIEUX | 14204 |
References
- Wang, X., et al. Microbiota dysbiosis in primary Sjögren’s syndrome and the ameliorative effect of hydroxychloroquine. Cell Rep. 40 (11), 111352 (2022).
- Humphrey, S. P., Williamson, R. T. A review of saliva: normal composition, flow, and function. J Prosthet Dent. 85 (2), 162-169 (2001).
- Marsh, P. D., Do, T., Beighton, D., Devine, D. A. Influence of saliva on the oral microbiota. Periodontol 2000. 70 (1), 80-92 (2016).
- Vila, T., Rizk, A. M., Sultan, A. S., Jabra-Rizk, M. A. The power of saliva: Antimicrobial and beyond. PLoS Pathog. 15 (11), e1008058 (2019).
- Serrano, J., et al. Risk factors related to oral candidiasis in patients with primary Sjögren’s syndrome. Med Oral Patol Oral Cir Bucal. 25 (5), e700-e705 (2020).
- Napeñas, J. J., Rouleau, T. S. Oral complications of Sjögren’s syndrome. Oral Maxillofac Surg Clin North Am. 26 (1), 55-62 (2014).
- Mathews, S. A., Kurien, B. T., Scofield, R. H. Oral manifestations of Sjögren’s syndrome. J Dent Res. 87 (4), 308-318 (2008).
- Leung, K. C. M., McMillan, A. S., Cheung, B. P. K., Leung, W. K. Sjögren’s syndrome sufferers have increased oral yeast levels despite regular dental care. Oral Dis. 14 (2), 163-173 (2008).
- Lundstrom, I. M., Lindstrom, F. D. Subjective and clinical oral symptoms in patients with primary Sjögren’s syndrome. Clin Exp Rheumatol. 13 (6), 725-731 (1995).
- Alam, M. Z., et al. Candida identification: a journey from conventional to molecular methods in medical mycology. World J Microbiol Biotechnol. 30 (5), 1437-1451 (2014).
- Bauters, T. G., Nelis, H. J. Comparison of chromogenic and fluorogenic membrane filtration methods for detection of four Candida species. J Clin Microbiol. 40 (5), 1838-1839 (2002).
- Soto-Rojas, A. E., Villa, A. R., Sifuentes-Osornio, J., Alarcón-Segovia, D., Kraus, A. Oral candidiasis and Sjögren’s syndrome. J Rheumatol. 25 (5), 911-915 (1998).
- Gilchrist, J. E., Campbell, J. E., Donnelly, C. B., Peeler, J. T., Delaney, J. M. Spiral plate method for bacterial determination. Appl Microbiol. 25 (2), 244-252 (1973).
- Biomerieux. ATB FUNGUS 3 Sensitivity test for yeast-like fungi. REF 14204. Biomerieux. , (2014).
- Zhang, L., et al. The widely used ATB FUNGUS 3 automated readings in China and its misleading high MICs of Candida spp. to Azoles: Challenges for developing countries’ clinical microbiology labs. PLoS One. 9 (12), e114004 (2014).
- Hu, L., Zhou, P., Zhao, W., Hua, H., Yan, Z. Fluorescence staining vs. routine KOH smear for rapid diagnosis of oral candidiasis-A diagnostic test. Oral Dis. 26 (5), 941-947 (2020).
- Samaranayake, L. P. Candida krusei infections and fluconazole therapy. Hong Kong Med J. 3 (3), 312-314 (1997).
- Lee, Y., Puumala, E., Robbins, N., Cowen, L. E. Antifungal drug resistance: Molecular mechanisms in Candida albicans and beyond. Chem Rev. 121 (6), 3390-3411 (2021).
- Rihab, B., Lina, E. H., Noémie, S. T., Jean, S., Marjolaine, G. The experience of dry mouth and screening for Sjogren’s syndrome by the dentist: patient-reported experiences. BMC Oral Health. 23 (1), 1010 (2023).
- Panpetch, W., et al. Oral Candida administration in a Clostridium difficile mouse model worsens disease severity but is attenuated by Bifidobacterium. PLoS One. 14 (1), e210798 (2019).
- Alwaily, E. R., Abood, M. S., Al Uobody, R. M. Diagnosis of oral candidiasis in patients under 12 years: 18S rRNA as a marker of molecular characterization of Candida tropicalis. Arch Razi Inst. 78 (1), 475-483 (2023).
- Chen, C. L., et al. Candida infection as an early sign of subsequent Sjögren’s syndrome: A population-based matched cohort study. Front Med (Lausanne). 8, 796324 (2022).
