原发性干燥综合征患者口腔 念珠菌 感染的检查
Summary
在这里，我们提出了一种检查原发性干燥综合征患者口腔 念珠菌 感染的方案，该方案可用于及时治疗，此后避免相关并发症。
Abstract
原发性干燥综合征 （pSS） 是一种自身免疫性疾病，其特征是口干、眼睛干涩和其他全身症状等症状。由于pSS患者所经历的唾液分泌减退，口腔菌群失调经常发生。pSS 的一个常见并发症是口腔 念珠菌 感染。在本文中，作者描述了可以有效诊断口腔 念珠菌 感染并使用唾液、口腔粘膜拭子或 pSS 患者漱口水识别 念珠菌 菌株的系统方法。Sabouraud 葡萄糖琼脂 （SDA）、菌丝形成试验、氢氧化钾 （KOH） 涂片试验和钙荧光白 （CFW） 染色试验用于诊断口腔 念珠菌 感染。 念珠菌 诊断琼脂用于鉴定 念珠菌 菌株。最后，使用抗真菌药敏试验来确定适当的抗真菌药物治疗。这种标准化方法可以促进pSS相关口腔 念珠菌 感染的诊断、治疗和未来研究。使用这种方法进行早期诊断还可以防止由于延迟接受适当治疗而出现的任何并发症。
Introduction
念珠菌病是由 念珠菌属引起的，念珠菌 属是机会性病原体。常见菌株包括 白色念珠菌、克鲁塞念珠菌、光滑念珠菌、副念珠 菌和 都柏林念珠菌1。 念珠菌 属引起的机会性感染包括浅表 念珠菌 感染和侵袭性念珠菌病。侵袭性念珠菌病主要发生在免疫功能低下的个体中;例如，在患有获得性免疫缺陷综合症 （AIDS） 的患者中，侵袭性念珠菌病会严重威胁生活质量甚至寿命2。浅表 念珠菌 感染，如皮肤黏膜念珠菌病，在患者中更常见3.
口腔念珠菌病是一种浅表性 念珠菌 感染，是最常见的人类真菌感染。 白色念珠菌 是口腔的正常共生;据报道，在没有任何症状的一般人群中 ，念珠菌 属的携带率为 20%-75%4。 念珠菌 的过度生长会导致患者的局部不适，例如感觉味觉改变、口腔灼热感、营养不良导致的吞咽困难、恢复延迟和住院时间延长。长期口服念珠菌病可导致严重的侵袭性念珠菌病，导致严重的发病率和死亡率5.口腔念珠菌病也会增加患口腔癌的风险5.唾液腺功能受损是口腔念珠菌病的危险因素之一6.感染的开始是 念珠菌 粘附在上皮细胞壁上。其次是 念珠菌 的增殖和丝化以及生物膜7 的形成和成熟。生物膜极难根除，并且对常规抗真菌治疗具有抵抗力，这使得临床治疗成为生物膜相关口腔 念珠菌 感染的挑战7.
原发性干燥综合征 （pSS） 是一种自身免疫性疾病，其特征是口干、眼睛干涩和其他全身症状8.口干是pSS最常见的症状。唾液具有重要的生理抗真菌功能。一方面，它可以稀释和冲刷口腔，然后从粘膜中清除微生物。另一方面，唾液中含有抗菌蛋白，如乳铁蛋白、唾液过氧化物酶、溶菌酶、富含组氨酸的多肽和特异性抗念珠菌抗体，它们可以与口腔粘膜相互作用，防止 念珠菌6的过度生长。唾液流量减少可能使 pSS 患者易患口腔念珠菌病。一项对 61 例 pSS 患者进行的观察性横断面研究发现，13.1% 的 pSS 患者出现念珠菌病的口腔体征，发现 白色念珠 菌菌落形成单位 （CFU）/mL 与未刺激的全唾液 （UWS） 和刺激的全唾液 （SWS） 水平显着且呈负相关9。
本手稿中介绍的方法可以根据直接涂片或培养后的表征形态属性（例如菌丝和酵母细胞）识别口腔念珠菌感染10。使用念珠菌诊断琼脂对念珠菌进行菌株鉴定是基于具有不同形态的不同颜色菌落的形成，这些菌落是由物种特异性酶裂解显色底物引起的11。在本文中，介绍了检测口腔念珠菌感染的系统方法，包括传统的口腔念珠菌培养和氢氧化钾（KOH）涂片试验和Calcofluor White（CFW）染色试验的快速检查10。此外，还引入了抗真菌药敏试验，可指导临床口腔念珠菌感染治疗。在实际情况下，没有必要执行本手稿中介绍的所有方法;口腔念珠菌检测方法可根据目的选择。口腔念珠菌感染的检查和 pSS 患者念珠菌菌株的测定不仅有利于疾病治疗，而且有助于评估口腔念珠菌病的特征和物种特征。
Protocol
Representative Results
Discussion
在目前的手稿中，我们提供了一系列系统、简单、可行的方法，用于检测口腔 念珠菌 感染、鉴定 念珠菌 菌株以及检测pSS患者常用药物的抗真菌敏感性。
在实际环境中，并非本手稿中介绍的所有方法都是必需的。口腔 念珠菌 检测方法可以根据具体目的进行选择。KOH 涂片试验和 CFW 染色试验使用未经培养的样本，可以快速、初步地确定 pSS 患者是否存在?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
本研究得到国家自然科学基金（82201084）、中国博士后科学基金（2022M722232）、北京市博士后科研基金（2023-ZZ-020）、首都医科大学附属北京天坛医院苗浚项目（2023MP10）和香港研究资助局优配研究金（27111820和17116521）资助。
Materials
| 0.22 µm Syringe Filter | MERCK | SLGV004SL | |
| 1.5 mL Centrifuge Tube | axygen | MCT-150-C-S | |
| 10 cm Microbiological Culture Dishes | Jet Bio-Filtration Co. Ltd | TCD000100 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | Jet Bio-Filtration Co., Ltd | CFT011150 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430290 | |
| 96-well Microplates | Corning | 3599 | |
| API 0.85% NaCl ampule | BIOMERIEUX | 20070 | |
| Calcofluor White Stain | Sigma-Aldrich | 18909-100ML-F | |
| CHROMagar Candida | CHROMagar | P002860 | Candida diagnostic agar |
| D(+)-Glucose Monohydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10010518 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26170035 | |
| McFarland Standards Kit | BIOMERIEUX | 70900 | |
| Nunc precision molded loops | ThermoFisher Scientific | 254399 | |
| Phosphate Buffered Saline | Gibco | C10010500BT | |
| Potassium Hydroxide | Aladdin | P112284-500g | |
| PowerSoil DNA Isolation Kit | MO BIO | 12888-50 | |
| RPMI 1640 Medium | Gibco | 11875119 | |
| Sabourand's Agar Medium | Solarbio | S9710 | |
| Yeast Nitrogen Base Without Amino acids | Solarbio | Y8040 | |
| Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) | BIOMERIEUX | 14204 |
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