בדיקת זיהום קנדידה פומי בחולי תסמונת סיוגרן ראשונית
Summary
כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבדיקת זיהום קנדידה אוראלי בחולים עם תסמונת סיוגרן ראשונית, אשר ניתן להשתמש בהם לטיפול בזמן, ולאחר מכן, הימנעות סיבוכים הקשורים.
Abstract
תסמונת סיוגרן ראשונית (pSS) היא מחלה אוטואימונית המאופיינת בתסמינים כגון יובש בפה, עיניים יבשות ותסמינים שיטתיים אחרים. בשל hyposalivation שחוו חולי pSS, dysbacteriosis אוראלי מתרחשת לעתים קרובות. סיבוך נפוץ של pSS הוא זיהום קנדידה דרך הפה. במאמר זה, המחברים מתארים שיטות שיטתיות שיכולות לאבחן ביעילות זיהום קנדידה דרך הפה ולזהות את זני הקנדידה באמצעות רוק, מקלוני רירית הפה או מי פה מחולי pSS. בדיקת דקסטרוז אגר (SDA) של Sabouraud, בדיקת היווצרות היפאל, בדיקת מריחת אשלגן הידרוקסיד (KOH) ובדיקת צביעה לבנה (CFW) משמשים לאבחון זיהום קנדידה דרך הפה. אגר אבחון קנדידה משמש לזיהוי זני קנדידה . לבסוף, בדיקות רגישות אנטי פטרייתיות משמשות לקביעת טיפול תרופתי אנטי פטרייתי מתאים. שיטה מתוקננת זו יכולה לשפר את האבחון, הטיפול והמחקר העתידי של זיהומי קנדידה אוראליים הקשורים ל- pSS. אבחון מוקדם, בשיטה זו, יכול גם למנוע סיבוכים הנובעים מאיחור בקבלת טיפול מתאים.
Introduction
קנדידאזיס נגרמת על ידי Candida spp., שהם פתוגנים אופורטוניסטיים. בין הזנים הנפוצים Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis ו-Candida dubliniensis1. זיהומים אופורטוניסטיים הנגרמים על ידי Candida spp. כוללים זיהומי קנדידה שטחיים וקנדידה פולשנית. קנדידה פולשנית מתרחשת בעיקר אצל אנשים מדוכאי חיסון; לדוגמה, בחולים עם תסמונת הכשל החיסוני הנרכש (איידס), קנדידה פולשנית יכולה לאיים באופן משמעותי על איכות החיים או אפילו על תוחלת החיים2. זיהום קנדידה שטחי, כגון קנדידה רירית, שכיח יותר בחולים3.
קנדידה אוראלית, זיהום קנדידה שטחי, היא הזיהום הפטרייתי האנושי הנפוץ ביותר. קנדידה אלביקנס היא קומנסל נורמלי של הפה; שיעור ההובלה של קנדידה spp. דווח כי נע בין 20% ל -75% באוכלוסייה הכללית ללא תסמינים4. צמיחת יתר של קנדידה עלולה להוביל לאי נוחות מקומית בחולים, כגון שינוי בטעם התחושה, תחושת צריבה בפה, דיספגיה עקב תזונה לקויה, התאוששות מאוחרת ושהייה ממושכת בבית החולים. קנדידה אוראלית ארוכת טווח עלולה להוביל לקנדידה פולשנית קשה, וכתוצאה מכך לתחלואה ותמותה משמעותיות5. קנדידה אוראלית יכולה גם להגביר את הסיכון לסרטן הפה5. תפקוד לקוי של בלוטת הרוק הוא בין גורמי הסיכון לקנדידה אוראלית6. התחלת הזיהום היא היצמדות קנדידה לדפנות תאי אפיתל. זה ואחריו התפשטות ונימה של קנדידה ואת היווצרות והבשלה של ביופילם7. ביופילמים קשים מאוד למיגור והם עמידים לטיפול אנטי פטרייתי קונבנציונלי, מה שהופך את הטיפול הקליני לאתגר עבור זיהום קנדידה פומי הקשור לביופילם7.
תסמונת סיוגרן ראשונית (pSS) היא מחלה אוטואימונית המאופיינת ביובש בפה, עיניים יבשות ותסמינים שיטתיים אחרים8. יובש בפה הוא התסמין השכיח ביותר של pSS. לרוק יש תפקידים פיזיולוגיים אנטי פטרייתיים חשובים. מצד אחד, הוא יכול לדלל ולסרוק את הפה ולאחר מכן להסיר אורגניזמים מן הרירית. מצד שני, רוק מכיל חלבונים מיקרוביאליים, כגון לקטופרין, סיאלופרוקסידז, ליזואנזים, פוליפפטידים עשירים בהיסטידין, ונוגדנים אנטי קנדידליים ספציפיים, אשר יכולים לקיים אינטראקציה עם רירית הפה ולמנוע צמיחת יתר של קנדידה6. זרימת הרוק המופחתת עלולה לגרום לחולי pSS לקנדידה אוראלית. מחקר חתך תצפיתי שנערך בקרב 61 חולי pSS מצא כי 13.1% מחולי pSS הציגו סימנים אוראליים של קנדידה ויחידה ליצירת מושבה (CFU)/מ”ל של קנדידה אלביקנס נמצאה בקורלציה משמעותית ושלילית עם רמות של רוק שלם לא מגורה (UWS) ורוק שלם מגורה (SWS)9.
השיטות שהוכנסו בכתב יד זה מסוגלות לזהות זיהום קנדידה אוראלי על סמך תכונות מורפולוגיות מאופיינות (למשל, תאי הקורים והשמרים) במריחה ישירה או לאחר תרבית10. זיהוי הזנים של הקנדידה באמצעות אגר דיאגנוסטי קנדידה מבוסס על היווצרות מושבות צבעוניות שונות בעלות מורפולוגיה מגוונת, הנובעות מפיצול מצעים כרומוגניים על ידי אנזימים ספציפיים למין11. בכתב יד זה מוצגות שיטות שיטתיות לגילוי זיהום קנדידה פומי, כולל תרבית קנדידה אוראלית מסורתית ובדיקה מהירה על ידי בדיקת מריחה של אשלגן הידרוקסידי (KOH) ובדיקת צביעה לבנה (CFW)10. בנוסף, הוצגה בדיקת רגישות אנטי פטרייתית, שיכולה להנחות טיפול קליני בזיהום קנדידה דרך הפה. במצבים ממשיים, אין צורך לבצע את כל השיטות שהוכנסו בכתב יד זה; ניתן לבחור את שיטות זיהוי הקנדידה דרך הפה בהתאם למטרה. בדיקת זיהום קנדידה פומי וקביעת זני קנדידה בחולי pSS לא רק מועילה לטיפול במחלה אלא גם מסייעת להעריך את אפיון הקנדידה האוראלית ואת פרופילי המינים.
Protocol
Representative Results
Discussion
בכתב היד הנוכחי, אנו מספקים סדרה של שיטות שיטתיות, פשוטות ואפשריות לאיתור זיהומי קנדידה דרך הפה, זיהוי זני קנדידה ובדיקת הרגישות האנטי פטרייתית של תרופות נפוצות בחולים עם pSS.
במסגרות מעשיות, לא כל השיטות שהוכנסו בכתב יד זה נחוצות. ניתן לבחור את שיטות זיהוי הקנדיד…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82201084), הקרן למדע פוסט-דוקטורט בסין (2022M722232), קרן המחקר הפוסט-דוקטורט בבייג’ינג (2023-ZZ-020), פרויקט Miaopu של בית החולים טיאנטאן בבייג’ינג, האוניברסיטה הרפואית קפיטל (2023MP10) וקרן המחקר הכללית, מועצת מענקי המחקר של הונג קונג (27111820 ו-17116521).
Materials
| 0.22 µm Syringe Filter | MERCK | SLGV004SL | |
| 1.5 mL Centrifuge Tube | axygen | MCT-150-C-S | |
| 10 cm Microbiological Culture Dishes | Jet Bio-Filtration Co. Ltd | TCD000100 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | Jet Bio-Filtration Co., Ltd | CFT011150 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430290 | |
| 96-well Microplates | Corning | 3599 | |
| API 0.85% NaCl ampule | BIOMERIEUX | 20070 | |
| Calcofluor White Stain | Sigma-Aldrich | 18909-100ML-F | |
| CHROMagar Candida | CHROMagar | P002860 | Candida diagnostic agar |
| D(+)-Glucose Monohydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10010518 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26170035 | |
| McFarland Standards Kit | BIOMERIEUX | 70900 | |
| Nunc precision molded loops | ThermoFisher Scientific | 254399 | |
| Phosphate Buffered Saline | Gibco | C10010500BT | |
| Potassium Hydroxide | Aladdin | P112284-500g | |
| PowerSoil DNA Isolation Kit | MO BIO | 12888-50 | |
| RPMI 1640 Medium | Gibco | 11875119 | |
| Sabourand's Agar Medium | Solarbio | S9710 | |
| Yeast Nitrogen Base Without Amino acids | Solarbio | Y8040 | |
| Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) | BIOMERIEUX | 14204 |
References
- Wang, X., et al. Microbiota dysbiosis in primary Sjögren’s syndrome and the ameliorative effect of hydroxychloroquine. Cell Rep. 40 (11), 111352 (2022).
- Humphrey, S. P., Williamson, R. T. A review of saliva: normal composition, flow, and function. J Prosthet Dent. 85 (2), 162-169 (2001).
- Marsh, P. D., Do, T., Beighton, D., Devine, D. A. Influence of saliva on the oral microbiota. Periodontol 2000. 70 (1), 80-92 (2016).
- Vila, T., Rizk, A. M., Sultan, A. S., Jabra-Rizk, M. A. The power of saliva: Antimicrobial and beyond. PLoS Pathog. 15 (11), e1008058 (2019).
- Serrano, J., et al. Risk factors related to oral candidiasis in patients with primary Sjögren’s syndrome. Med Oral Patol Oral Cir Bucal. 25 (5), e700-e705 (2020).
- Napeñas, J. J., Rouleau, T. S. Oral complications of Sjögren’s syndrome. Oral Maxillofac Surg Clin North Am. 26 (1), 55-62 (2014).
- Mathews, S. A., Kurien, B. T., Scofield, R. H. Oral manifestations of Sjögren’s syndrome. J Dent Res. 87 (4), 308-318 (2008).
- Leung, K. C. M., McMillan, A. S., Cheung, B. P. K., Leung, W. K. Sjögren’s syndrome sufferers have increased oral yeast levels despite regular dental care. Oral Dis. 14 (2), 163-173 (2008).
- Lundstrom, I. M., Lindstrom, F. D. Subjective and clinical oral symptoms in patients with primary Sjögren’s syndrome. Clin Exp Rheumatol. 13 (6), 725-731 (1995).
- Alam, M. Z., et al. Candida identification: a journey from conventional to molecular methods in medical mycology. World J Microbiol Biotechnol. 30 (5), 1437-1451 (2014).
- Bauters, T. G., Nelis, H. J. Comparison of chromogenic and fluorogenic membrane filtration methods for detection of four Candida species. J Clin Microbiol. 40 (5), 1838-1839 (2002).
- Soto-Rojas, A. E., Villa, A. R., Sifuentes-Osornio, J., Alarcón-Segovia, D., Kraus, A. Oral candidiasis and Sjögren’s syndrome. J Rheumatol. 25 (5), 911-915 (1998).
- Gilchrist, J. E., Campbell, J. E., Donnelly, C. B., Peeler, J. T., Delaney, J. M. Spiral plate method for bacterial determination. Appl Microbiol. 25 (2), 244-252 (1973).
- Biomerieux. ATB FUNGUS 3 Sensitivity test for yeast-like fungi. REF 14204. Biomerieux. , (2014).
- Zhang, L., et al. The widely used ATB FUNGUS 3 automated readings in China and its misleading high MICs of Candida spp. to Azoles: Challenges for developing countries’ clinical microbiology labs. PLoS One. 9 (12), e114004 (2014).
- Hu, L., Zhou, P., Zhao, W., Hua, H., Yan, Z. Fluorescence staining vs. routine KOH smear for rapid diagnosis of oral candidiasis-A diagnostic test. Oral Dis. 26 (5), 941-947 (2020).
- Samaranayake, L. P. Candida krusei infections and fluconazole therapy. Hong Kong Med J. 3 (3), 312-314 (1997).
- Lee, Y., Puumala, E., Robbins, N., Cowen, L. E. Antifungal drug resistance: Molecular mechanisms in Candida albicans and beyond. Chem Rev. 121 (6), 3390-3411 (2021).
- Rihab, B., Lina, E. H., Noémie, S. T., Jean, S., Marjolaine, G. The experience of dry mouth and screening for Sjogren’s syndrome by the dentist: patient-reported experiences. BMC Oral Health. 23 (1), 1010 (2023).
- Panpetch, W., et al. Oral Candida administration in a Clostridium difficile mouse model worsens disease severity but is attenuated by Bifidobacterium. PLoS One. 14 (1), e210798 (2019).
- Alwaily, E. R., Abood, M. S., Al Uobody, R. M. Diagnosis of oral candidiasis in patients under 12 years: 18S rRNA as a marker of molecular characterization of Candida tropicalis. Arch Razi Inst. 78 (1), 475-483 (2023).
- Chen, C. L., et al. Candida infection as an early sign of subsequent Sjögren’s syndrome: A population-based matched cohort study. Front Med (Lausanne). 8, 796324 (2022).
