Undersøkelse av oral Candida-infeksjon hos pasienter med Primær Sjøgrens syndrom
Summary
Her presenterer vi en protokoll for undersøkelse av oral Candida-infeksjon hos pasienter med primær Sjøgrens syndrom, som kan brukes til rettidig behandling og deretter unngå relaterte komplikasjoner.
Abstract
Primær Sjøgrens syndrom (pSS) er en autoimmun sykdom preget av symptomer som tørr munn, tørre øyne og andre systematiske symptomer. På grunn av hyposalivasjonen som oppleves av pSS-pasienter, oppstår ofte oral dysbakteriose. En vanlig komplikasjon av pSS er oral Candida infeksjon. I denne artikkelen beskriver forfatterne systematiske metoder som effektivt kan diagnostisere oral Candida-infeksjon og identifisere Candida-stammene ved hjelp av spytt, orale slimhinneprøver eller munnvann fra pSS-pasienter. Sabourauds Dextrose Agar (SDA), hyphaldannelsesanalyse, kaliumhydroksid (KOH) smøretest og kalkofluorhvit (CFW) fargeanalyse brukes til diagnostisering av oral Candida-infeksjon . En Candida diagnostisk agar brukes til identifisering av Candida-stammer . Endelig brukes antifungal følsomhetstesting for å bestemme passende antifungal medikamentbehandling. Denne standardiserte metoden kan forbedre diagnose, behandling og fremtidig forskning av pSS-relaterte orale Candida-infeksjoner . Tidlig diagnose, ved hjelp av denne metoden, kan også forhindre komplikasjoner som oppstår på grunn av forsinkelse i mottak av passende behandling.
Introduction
Candidiasis er forårsaket av Candida spp., som er opportunistiske patogener. Vanlige stammer inkluderer Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis og Candida dubliniensis1. Opportunistiske infeksjoner forårsaket av Candida spp. inkluderer overfladiske Candida-infeksjoner og invasiv candidiasis. Invasiv candidiasis skjer hovedsakelig hos immunkompromitterte individer; For eksempel, hos pasienter med ervervet immunsviktsyndrom (AIDS), kan invasiv candidiasis betydelig true livskvaliteten eller til og med levetiden2. Overfladisk Candida-infeksjon , som mukokutan candidiasis, er vanligere hos pasienter3.
Oral candidiasis, en overfladisk Candida-infeksjon , er den vanligste soppinfeksjonen hos mennesker. Candida albicans er en normal commensal av munnen; Transportraten av Candida spp. er rapportert å variere fra 20 % til 75 % i den generelle befolkningen uten symptomer4. Overvekst av Candida kan føre til lokalt ubehag hos pasienter, for eksempel endret smak av følelse, brennende følelse i munnen, dysfagi på grunn av dårlig ernæring, forsinket utvinning og langvarig sykehusopphold. Langvarig oral candidiasis kan føre til alvorlig invasiv candidiasis, noe som resulterer i betydelig sykelighet og dødelighet5. Oral candidiasis kan også øke risikoen for munnhulekreft5. Nedsatt spyttkjertelfunksjon er blant risikofaktorene for oral candidiasis6. Initiering av infeksjon er adhesjon av Candida til epitelcellevegger. Dette etterfølges av spredning og filamentering av Candida og dannelse og modning av biofilm7. Biofilm er ekstremt vanskelig å utrydde og er motstandsdyktig mot konvensjonell antifungal behandling, noe som gjør klinisk behandling til en utfordring for biofilmassosiert oral Candida-infeksjon 7.
Primær Sjøgrens syndrom (pSS) er en autoimmun sykdom som kjennetegnes av munntørrhet, tørre øyne og andre systematiske symptomer8. Munntørrhet er det hyppigste symptomet på pSS. Spytt har viktige fysiologiske antifungale funksjoner. På den ene siden kan det fortynne og skure munnen og deretter fjerne organismer fra slimhinnen. På den annen side inneholder spytt antimikrobielle proteiner, som laktoferrin, sialoperoksidase, lysozym, histidinrike polypeptider og spesifikke anti-candidale antistoffer, som kan interagere med munnslimhinnen og forhindre overvekst av Candida6. Den reduserte spyttstrømmen kan predisponere pSS-pasienter for oral candidiasis. En observasjonell tverrsnittsstudie utført på 61 pSS-pasienter fant at 13,1 % av pSS-pasientene presenterte orale tegn på candidiasis og kolonidannende enhet (CFU)/ml Candida albicans ble funnet signifikant og negativt korrelert med nivåer av ustimulert helspytt (UWS) og stimulert helspytt (SWS)9.
Metodene som introduseres i dette manuskriptet kan identifisere oral Candida-infeksjon basert på karakteriserte morfologiske egenskaper (f.eks. hyfer og gjærceller) i direkte utstryk eller etter dyrkning10. Stammeidentifikasjonen av Candida ved hjelp av en Candida-diagnostisk agar er basert på dannelsen av forskjellige fargede kolonier med variert morfologi, som skyldes spaltning av kromogene substrater av artsspesifikke enzymer11. I dette manuskriptet introduseres systematiske metoder for påvisning av oral Candida-infeksjon, inkludert tradisjonell oral Candida-kultur og rask undersøkelse ved kaliumhydroksid (KOH) smøretest og kalkofluorhvit (CFW) fargeanalyse10. I tillegg har antifungal følsomhetstest, som kan veilede klinisk oral Candida-infeksjonsbehandling, blitt introdusert. I faktiske situasjoner er det ikke nødvendig å utføre alle de introduserte metodene i dette manuskriptet; den orale Candida-deteksjonsmetoden(e) kan velges i henhold til formålet. Undersøkelsen av oral Candida-infeksjon og bestemmelse av Candida-stammer hos pSS-pasienter er ikke bare til nytte for sykdomsbehandlingen, men bidrar også til å vurdere karakteriseringen av oral candidiasis og artsprofilene.
Protocol
Representative Results
Discussion
I dette manuskriptet tilbyr vi en rekke systematiske, enkle og gjennomførbare metoder for å oppdage orale Candida-infeksjoner , identifisere Candida-stammer og teste antifungal følsomhet av vanlige legemidler hos pasienter med pSS.
I praktiske sammenhenger er ikke alle metodene som introduseres i dette manuskriptet nødvendige. Den orale Candida-deteksjonsmetoden(e) kan velges basert på det spesifikke formålet. KOH-smøretester og CFW-fargeanalyser, ved bruk av…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Denne forskningen ble støttet av National Natural Science Foundation of China (82201084), China Postdoctoral Science Foundation (2022M722232), Beijing Postdoctoral Research Foundation (2023-ZZ-020), Miaopu Project of Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University (2023MP10) og General Research Fund, Hong Kong Research Grants Council (27111820 og 17116521).
Materials
| 0.22 µm Syringe Filter | MERCK | SLGV004SL | |
| 1.5 mL Centrifuge Tube | axygen | MCT-150-C-S | |
| 10 cm Microbiological Culture Dishes | Jet Bio-Filtration Co. Ltd | TCD000100 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | Jet Bio-Filtration Co., Ltd | CFT011150 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430290 | |
| 96-well Microplates | Corning | 3599 | |
| API 0.85% NaCl ampule | BIOMERIEUX | 20070 | |
| Calcofluor White Stain | Sigma-Aldrich | 18909-100ML-F | |
| CHROMagar Candida | CHROMagar | P002860 | Candida diagnostic agar |
| D(+)-Glucose Monohydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10010518 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26170035 | |
| McFarland Standards Kit | BIOMERIEUX | 70900 | |
| Nunc precision molded loops | ThermoFisher Scientific | 254399 | |
| Phosphate Buffered Saline | Gibco | C10010500BT | |
| Potassium Hydroxide | Aladdin | P112284-500g | |
| PowerSoil DNA Isolation Kit | MO BIO | 12888-50 | |
| RPMI 1640 Medium | Gibco | 11875119 | |
| Sabourand's Agar Medium | Solarbio | S9710 | |
| Yeast Nitrogen Base Without Amino acids | Solarbio | Y8040 | |
| Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) | BIOMERIEUX | 14204 |
References
- Wang, X., et al. Microbiota dysbiosis in primary Sjögren’s syndrome and the ameliorative effect of hydroxychloroquine. Cell Rep. 40 (11), 111352 (2022).
- Humphrey, S. P., Williamson, R. T. A review of saliva: normal composition, flow, and function. J Prosthet Dent. 85 (2), 162-169 (2001).
- Marsh, P. D., Do, T., Beighton, D., Devine, D. A. Influence of saliva on the oral microbiota. Periodontol 2000. 70 (1), 80-92 (2016).
- Vila, T., Rizk, A. M., Sultan, A. S., Jabra-Rizk, M. A. The power of saliva: Antimicrobial and beyond. PLoS Pathog. 15 (11), e1008058 (2019).
- Serrano, J., et al. Risk factors related to oral candidiasis in patients with primary Sjögren’s syndrome. Med Oral Patol Oral Cir Bucal. 25 (5), e700-e705 (2020).
- Napeñas, J. J., Rouleau, T. S. Oral complications of Sjögren’s syndrome. Oral Maxillofac Surg Clin North Am. 26 (1), 55-62 (2014).
- Mathews, S. A., Kurien, B. T., Scofield, R. H. Oral manifestations of Sjögren’s syndrome. J Dent Res. 87 (4), 308-318 (2008).
- Leung, K. C. M., McMillan, A. S., Cheung, B. P. K., Leung, W. K. Sjögren’s syndrome sufferers have increased oral yeast levels despite regular dental care. Oral Dis. 14 (2), 163-173 (2008).
- Lundstrom, I. M., Lindstrom, F. D. Subjective and clinical oral symptoms in patients with primary Sjögren’s syndrome. Clin Exp Rheumatol. 13 (6), 725-731 (1995).
- Alam, M. Z., et al. Candida identification: a journey from conventional to molecular methods in medical mycology. World J Microbiol Biotechnol. 30 (5), 1437-1451 (2014).
- Bauters, T. G., Nelis, H. J. Comparison of chromogenic and fluorogenic membrane filtration methods for detection of four Candida species. J Clin Microbiol. 40 (5), 1838-1839 (2002).
- Soto-Rojas, A. E., Villa, A. R., Sifuentes-Osornio, J., Alarcón-Segovia, D., Kraus, A. Oral candidiasis and Sjögren’s syndrome. J Rheumatol. 25 (5), 911-915 (1998).
- Gilchrist, J. E., Campbell, J. E., Donnelly, C. B., Peeler, J. T., Delaney, J. M. Spiral plate method for bacterial determination. Appl Microbiol. 25 (2), 244-252 (1973).
- Biomerieux. ATB FUNGUS 3 Sensitivity test for yeast-like fungi. REF 14204. Biomerieux. , (2014).
- Zhang, L., et al. The widely used ATB FUNGUS 3 automated readings in China and its misleading high MICs of Candida spp. to Azoles: Challenges for developing countries’ clinical microbiology labs. PLoS One. 9 (12), e114004 (2014).
- Hu, L., Zhou, P., Zhao, W., Hua, H., Yan, Z. Fluorescence staining vs. routine KOH smear for rapid diagnosis of oral candidiasis-A diagnostic test. Oral Dis. 26 (5), 941-947 (2020).
- Samaranayake, L. P. Candida krusei infections and fluconazole therapy. Hong Kong Med J. 3 (3), 312-314 (1997).
- Lee, Y., Puumala, E., Robbins, N., Cowen, L. E. Antifungal drug resistance: Molecular mechanisms in Candida albicans and beyond. Chem Rev. 121 (6), 3390-3411 (2021).
- Rihab, B., Lina, E. H., Noémie, S. T., Jean, S., Marjolaine, G. The experience of dry mouth and screening for Sjogren’s syndrome by the dentist: patient-reported experiences. BMC Oral Health. 23 (1), 1010 (2023).
- Panpetch, W., et al. Oral Candida administration in a Clostridium difficile mouse model worsens disease severity but is attenuated by Bifidobacterium. PLoS One. 14 (1), e210798 (2019).
- Alwaily, E. R., Abood, M. S., Al Uobody, R. M. Diagnosis of oral candidiasis in patients under 12 years: 18S rRNA as a marker of molecular characterization of Candida tropicalis. Arch Razi Inst. 78 (1), 475-483 (2023).
- Chen, C. L., et al. Candida infection as an early sign of subsequent Sjögren’s syndrome: A population-based matched cohort study. Front Med (Lausanne). 8, 796324 (2022).
