Исследование кандидозной инфекции полости рта у пациентов с первичным синдромом Шегрена
Summary
Здесь мы представляем протокол обследования кандидозной инфекции полости рта у пациентов с первичным синдромом Шегрена, который может быть использован для своевременного лечения и последующего предотвращения связанных с ним осложнений.
Abstract
Первичный синдром Шегрена (pSS) — это аутоиммунное заболевание, характеризующееся такими симптомами, как сухость во рту, сухость глаз и другие систематические симптомы. Из-за гипосаливации, испытываемой пациентами с ПСС, часто возникает дисбактериоз полости рта. Распространенным осложнением ПСС является инфекция кандиды полости рта. В этой статье авторы описывают систематические методы, которые могут эффективно диагностировать кандидозную инфекцию полости рта и идентифицировать штаммы кандиды с помощью слюны, мазков слизистой оболочки полости рта или жидкости для полоскания рта у пациентов с ПСС. Для диагностики кандидозной инфекции полости рта используются агар декстрозы Сабуро (SDA), анализ образования гиф, мазок на гидроксид калия (KOH) и анализ окрашивания калькофтором белым (CFW). Диагностический агар Candida используется для идентификации штаммов Candida . Наконец, тестирование на чувствительность к противогрибковым препаратам используется для определения соответствующего противогрибкового лекарственного лечения. Этот стандартизированный метод может улучшить диагностику, лечение и будущие исследования кандидозных инфекций полости рта, связанных с псС. Ранняя диагностика с использованием этого метода также может предотвратить любые осложнения, возникающие из-за задержки в получении соответствующего лечения.
Introduction
Кандидоз вызывается Candida spp., которые являются условно-патогенными микроорганизмами. Распространенные штаммы включают Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis и Candida dubliniensis1. Оппортунистические инфекции, вызванные Candida spp., включают поверхностные инфекции Candida и инвазивный кандидоз. Инвазивный кандидоз в основном встречается у людей с ослабленным иммунитетом; например, у пациентов с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД) инвазивный кандидоз может значительно угрожать качеству жизни или даже продолжительностижизни2. Поверхностная кандидозная инфекция, такая как слизисто-кожный кандидоз, чаще встречается у пациентов3.
Кандидоз полости рта, поверхностная кандидозная инфекция, является наиболее распространенной грибковой инфекцией человека. Candida albicans — нормальный комменсал полости рта; сообщалось, что частота носительства Candida spp. колеблется от 20% до 75% в общей популяции без каких-либо симптомов4. Чрезмерный рост Candida может привести к местному дискомфорту у пациентов, такому как изменение вкуса чувствительности, жжение во рту, дисфагия из-за плохого питания, задержка выздоровления и длительное пребывание в больнице. Длительный кандидоз полости рта может привести к тяжелому инвазивному кандидозу, что приводит к значительной заболеваемости и смертности5. Кандидоз полости рта также может увеличить риск развития рака полости рта5. Нарушение функции слюнных желез является одним из факторов риска развития кандидоза полости рта6. Инициацией инфекции является адгезия Candida к стенкам клеток эпителия. За этим следует пролиферация и филаментация Candida , а также образование и созревание биопленки7. Биопленки чрезвычайно трудно искоренить, и они устойчивы к обычному противогрибковому лечению, что делает клиническое лечение проблемой для биопленкоассоциированной инфекции кандиды полости рта 7.
Первичный синдром Шегрена (pSS) — это аутоиммунное заболевание, которое характеризуется сухостью во рту, сухостью глаз и другими систематическими симптомами8. Сухость во рту является наиболее частым симптомом пСС. Слюна обладает важными физиологическими противогрибковыми функциями. С одной стороны, он может разбавлять и очищать ротовую полость, а затем удалять микроорганизмы со слизистой оболочки. С другой стороны, слюна содержит антимикробные белки, такие как лактоферрин, сиалопероксидаза, лизоцим, богатые гистидином полипептиды и специфические антикандидозные антитела, которые могут взаимодействовать со слизистой оболочкой полости рта и предотвращать чрезмерный рост Candida6. Снижение оттока слюны может предрасполагать пациентов с псс к кандидозу полости рта. Обсервационное перекрестное исследование, проведенное у 61 пациента с пСС, показало, что у 13,1% пациентов с ПС наблюдались оральные признаки кандидоза, а было обнаружено, что колониеобразующая единица (КОЕ)/мл Candida albicans значительно и отрицательно коррелирует с уровнями нестимулированной цельной слюны (UWS) и стимулированной цельной слюны (SWS)9.
Методы, представленные в этой рукописи, могут идентифицировать кандидозную инфекцию полости рта на основе характерных морфологических признаков (например, гиф и дрожжевых клеток) в прямом мазке или после культивирования10. Идентификация штамма Candida с помощью диагностического агара Candida основана на образовании разноцветных колоний с различной морфологией, которые возникают в результате расщепления хромогенных субстратов видоспецифичными ферментами11. В этой рукописи представлены систематические методы выявления кандидозной инфекции полости рта, включая традиционное бактериологическое исследование кандиды в полости рта и экспресс-исследование с помощью мазка на гидроксид калия (KOH) и теста на окрашивание калькофтором белым (CFW)10. Кроме того, был введен тест на чувствительность к противогрибковым препаратам, который может помочь в клиническом лечении кандидозной инфекции полости рта. В реальных ситуациях нет необходимости выполнять все методы, представленные в этой рукописи; пероральный метод (методы) обнаружения кандиды может быть выбран в соответствии с целью. Исследование кандидозной инфекции полости рта и определение штаммов Candida у пациентов с псс не только способствуют лечению заболевания, но и помогают оценить характеристику кандидоза полости рта и видовые профили.
Protocol
Representative Results
Discussion
В настоящей рукописи мы представляем ряд систематических, простых и осуществимых методов выявления инфекций Candida полости рта, идентификации штаммов Candida и тестирования чувствительности к противогрибковым препаратам у пациентов с pSS.
В практических условиях н?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (82201084), Китайским фондом постдокторантуры (2022M722232), Пекинским фондом постдокторских исследований (2023-ZZ-020), проектом Мяопу Пекинской больницы Тяньтань, Столичным медицинским университетом (2023MP10) и Общим исследовательским фондом, Советом по исследовательским грантам Гонконга (27111820 и 17116521).
Materials
| 0.22 µm Syringe Filter | MERCK | SLGV004SL | |
| 1.5 mL Centrifuge Tube | axygen | MCT-150-C-S | |
| 10 cm Microbiological Culture Dishes | Jet Bio-Filtration Co. Ltd | TCD000100 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | Jet Bio-Filtration Co., Ltd | CFT011150 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430290 | |
| 96-well Microplates | Corning | 3599 | |
| API 0.85% NaCl ampule | BIOMERIEUX | 20070 | |
| Calcofluor White Stain | Sigma-Aldrich | 18909-100ML-F | |
| CHROMagar Candida | CHROMagar | P002860 | Candida diagnostic agar |
| D(+)-Glucose Monohydrate | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10010518 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 26170035 | |
| McFarland Standards Kit | BIOMERIEUX | 70900 | |
| Nunc precision molded loops | ThermoFisher Scientific | 254399 | |
| Phosphate Buffered Saline | Gibco | C10010500BT | |
| Potassium Hydroxide | Aladdin | P112284-500g | |
| PowerSoil DNA Isolation Kit | MO BIO | 12888-50 | |
| RPMI 1640 Medium | Gibco | 11875119 | |
| Sabourand's Agar Medium | Solarbio | S9710 | |
| Yeast Nitrogen Base Without Amino acids | Solarbio | Y8040 | |
| Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution) | BIOMERIEUX | 14204 |
References
- Wang, X., et al. Microbiota dysbiosis in primary Sjögren’s syndrome and the ameliorative effect of hydroxychloroquine. Cell Rep. 40 (11), 111352 (2022).
- Humphrey, S. P., Williamson, R. T. A review of saliva: normal composition, flow, and function. J Prosthet Dent. 85 (2), 162-169 (2001).
- Marsh, P. D., Do, T., Beighton, D., Devine, D. A. Influence of saliva on the oral microbiota. Periodontol 2000. 70 (1), 80-92 (2016).
- Vila, T., Rizk, A. M., Sultan, A. S., Jabra-Rizk, M. A. The power of saliva: Antimicrobial and beyond. PLoS Pathog. 15 (11), e1008058 (2019).
- Serrano, J., et al. Risk factors related to oral candidiasis in patients with primary Sjögren’s syndrome. Med Oral Patol Oral Cir Bucal. 25 (5), e700-e705 (2020).
- Napeñas, J. J., Rouleau, T. S. Oral complications of Sjögren’s syndrome. Oral Maxillofac Surg Clin North Am. 26 (1), 55-62 (2014).
- Mathews, S. A., Kurien, B. T., Scofield, R. H. Oral manifestations of Sjögren’s syndrome. J Dent Res. 87 (4), 308-318 (2008).
- Leung, K. C. M., McMillan, A. S., Cheung, B. P. K., Leung, W. K. Sjögren’s syndrome sufferers have increased oral yeast levels despite regular dental care. Oral Dis. 14 (2), 163-173 (2008).
- Lundstrom, I. M., Lindstrom, F. D. Subjective and clinical oral symptoms in patients with primary Sjögren’s syndrome. Clin Exp Rheumatol. 13 (6), 725-731 (1995).
- Alam, M. Z., et al. Candida identification: a journey from conventional to molecular methods in medical mycology. World J Microbiol Biotechnol. 30 (5), 1437-1451 (2014).
- Bauters, T. G., Nelis, H. J. Comparison of chromogenic and fluorogenic membrane filtration methods for detection of four Candida species. J Clin Microbiol. 40 (5), 1838-1839 (2002).
- Soto-Rojas, A. E., Villa, A. R., Sifuentes-Osornio, J., Alarcón-Segovia, D., Kraus, A. Oral candidiasis and Sjögren’s syndrome. J Rheumatol. 25 (5), 911-915 (1998).
- Gilchrist, J. E., Campbell, J. E., Donnelly, C. B., Peeler, J. T., Delaney, J. M. Spiral plate method for bacterial determination. Appl Microbiol. 25 (2), 244-252 (1973).
- Biomerieux. ATB FUNGUS 3 Sensitivity test for yeast-like fungi. REF 14204. Biomerieux. , (2014).
- Zhang, L., et al. The widely used ATB FUNGUS 3 automated readings in China and its misleading high MICs of Candida spp. to Azoles: Challenges for developing countries’ clinical microbiology labs. PLoS One. 9 (12), e114004 (2014).
- Hu, L., Zhou, P., Zhao, W., Hua, H., Yan, Z. Fluorescence staining vs. routine KOH smear for rapid diagnosis of oral candidiasis-A diagnostic test. Oral Dis. 26 (5), 941-947 (2020).
- Samaranayake, L. P. Candida krusei infections and fluconazole therapy. Hong Kong Med J. 3 (3), 312-314 (1997).
- Lee, Y., Puumala, E., Robbins, N., Cowen, L. E. Antifungal drug resistance: Molecular mechanisms in Candida albicans and beyond. Chem Rev. 121 (6), 3390-3411 (2021).
- Rihab, B., Lina, E. H., Noémie, S. T., Jean, S., Marjolaine, G. The experience of dry mouth and screening for Sjogren’s syndrome by the dentist: patient-reported experiences. BMC Oral Health. 23 (1), 1010 (2023).
- Panpetch, W., et al. Oral Candida administration in a Clostridium difficile mouse model worsens disease severity but is attenuated by Bifidobacterium. PLoS One. 14 (1), e210798 (2019).
- Alwaily, E. R., Abood, M. S., Al Uobody, R. M. Diagnosis of oral candidiasis in patients under 12 years: 18S rRNA as a marker of molecular characterization of Candida tropicalis. Arch Razi Inst. 78 (1), 475-483 (2023).
- Chen, C. L., et al. Candida infection as an early sign of subsequent Sjögren’s syndrome: A population-based matched cohort study. Front Med (Lausanne). 8, 796324 (2022).
