Generierung von Knochenmark murinen dendritischen Zellen für den Einsatz in 2-Photonen-Imaging
Summary
Antigen-Präsentation in sekundären lymphatischen Organen durch dendritische Zellen ist entscheidend für die Einleitung des T-Zell-vermittelten adaptive Immunantwort. Hier zeigen wir die Kultur von Knochenmark abgeleiteten dendritischen Zellen, Aktivierung und Etikettierung für die 2-Photonen-Imaging.
Abstract
Mehrere Methoden für die Herstellung von murinen dendritischen Zellen sind in der Literatur gefunden werden. Hier präsentieren wir eine Methode, die größer als 85% CD11c hoch dendritischen Zellen produziert in Kultur, die Heimat der Lymphknoten nach subkutaner Injektion und präsentieren Antigen Antigen-spezifischen T-Zellen (siehe Video). Darüber hinaus verwenden wir Essen Instruments Incucyte zu dendritischen Zell-Reifung, wo am Tag 10, ist die Morphologie der kultivierten Zellen typisch für einen reifen dendritischen Zellen und <85% der Zellen sind CD11chigh verfolgen. Das Studium der Antigen-Präsentation in peripheren Lymphknoten durch 2-Photonen-Imaging ergab, dass es drei verschiedene Phasen der dendritischen Zellen und T-Zell-Interaktion 1, 2. Phase I besteht aus kurzen serielle Kontakte zwischen hoch bewegliche Antigen-spezifischen T-Zellen und Antigen tragen dendritische Zellen 1, 2. Phase zwei ist bei längerer Kontakte zwischen Antigen-spezifischen T-Zell-und Antigen-tragende dendritische Zellen 1, 2 markiert. Schließlich ist die Phase III von T-Zellen Ablösen von dendritischen Zellen, Wiedererlangung Motilität und Beginn auf 1, 2 teilen aus. Dies ist ein Beispiel für die Art von Antigen-spezifischen Wechselwirkungen, die durch Zwei-Photonen-Imaging von Antigen-beladenen Zellen tracker Farbstoff markierten dendritischen Zellen analysiert werden können.
Protocol
Discussion
Dendritische Zellen sind wichtige Mediatoren der adaptiven Immunantwort und die effizientesten Antigen-präsentierenden Zelle charakterisiert bis heute. Methoden für die Human-und Maus dendritischen Zellkultur in der Literatur in der Art der Zytokine verwendet werden, um die Entwicklung der verschiedenen dendritischen Zelltypen Einfluss abweichen. Bemerkenswert ist, dass GM-CSF, flt3L, IL4, IL13, TNF-alpha und IFN-gamma in verschiedenen Kombinationen eingesetzt, um zu reifen, unreifen, Entzündungs-und Steady-State-wie murine Knochenmark a…
Acknowledgements
National Institutes of Health Kirchstein Fellowship Promotionsstipendium AI-64128 (MPM), GM-41514 (MDC), GM-48071 (IP)
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