Kemik İliği Üretimi 2-foton Görüntüleme Kullanım murin Dendritik Hücreler Türetilmiş
Summary
Dendritik hücreler tarafından ikincil lenfoid organlara Antijen sunumu T hücre aracılı adaptif immün yanıt başlatılması için çok önemlidir. Burada kemik iliği kültürü elde edilen fare dendritik hücreler, aktivasyon, 2-foton görüntüleme için etiketleme göstermektedir.
Abstract
Fare dendritik hücrelerin hazırlanması için çeşitli yöntemler literatürde bulunabilir. Burada, kültürde% 85 daha fazla CD11c yüksek dendritik hücreler üreten bir yöntem mevcut subkutan enjeksiyon ve antijen spesifik T hücreleri (video) mevcut antijen sonra drenaj lenf nodu ev. Ayrıca, 10 gün, kültürlü hücrelerinin morfolojisi, olgun bir dendritik hücre ve hücre <% 85 CD11chigh olan tipik, dendritik hücre olgunlaşması izlemek Essen Aletleri Incucyte kullanın. 2-foton görüntüleme ile periferik lenf düğümlerine antijen sunumu çalışma dendritik hücre ve T hücre etkileşimi 1, 2, üç farklı aşama olduğunu ortaya çıkardı. Faz I, son derece hareketli bir antijen spesifik T hücreleri ve dendritik hücreler 1, 2 taşıyan antijen arasında kısa seri kişilerin oluşur. Faz iki antijen spesifik T hücre ve dendritik hücreler 1, 2 yatak antijen arasındaki uzun süreli temas ile işaretlenir . Son olarak, Faz III, dendritik hücreler ayrılmakta motilite kazanmak ve 1, 2 bölmek için, T hücreleri tarafından karakterize edilir . Bu antijen yüklü hücre izci boya etiketli dendritik hücreler iki-foton görüntüleme ile analiz edilebilir antijen-spesifik etkileşimler türünün tek örneğidir.
Protocol
Discussion
Dendritik hücreler, adaptif immün yanıt, bugüne kadar karakterize en etkili antijen sunan hücre anahtar arabulucular. Literatürde insan ve fare dendritik hücre kültürü yöntemleri farklı dendritik hücre tiplerinin gelişimini etkilemek için kullanılan sitokinlerin türü farklıdır. Özellikle, GM-CSF, flt3L, IL4, IL13, TNF-alfa ve IFN-gama, olgun, olgunlaşmamış, inflamatuvar ve kararlı durum in vitro 3-7 dendritik hücreler elde edilen fare kemik iliği gibi üretmek için farklı kombinasyonları kullanılır…
Acknowledgements
National Institutes of Health Kirchstein Bursu predoctoral dostluk AI-64.128 (MPM), GM-41.514 (MDC), GM-48.071 (IP)
References
- Miller, M. J., Safrina, O., Parker, I., Cahalan, M. D. Imaging the single cell dynamics of CD4+ T cell activation by dendritic cells in lymph nodes. J Exp Med. 200, 847-856 (2004).
- Henrickson, S. E., et al. T cell sensing of antigen dose governs interactive behavior with dendritic cells and sets a threshold for T cell activation. Nat Immunol. 9, 282-291 (2008).
- Jefford, M., et al. Functional comparison of DCs generated in vivo with Flt3 ligand or in vitro from blood monocytes: differential regulation of function by specific classes of physiologic stimuli. Blood. 102, 1753-1763 (2003).
- Inaba, K., et al. Generation of large numbers of dendritic cells from mouse bone marrow cultures supplemented with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor. J Exp Med. 176, 1693-1702 (1992).
- Lutz, M. B., et al. Differential functions of IL-4 receptor types I and II for dendritic cell maturation and IL-12 production and their dependency on GM-CSF. J Immunol. 169, 3574-3580 (2002).
- Xu, Y., Zhan, Y., Lew, A. M., Naik, S. H., Kershaw, M. H. Differential development of murine dendritic cells by GM-CSF versus Flt3 ligand has implications for inflammation and trafficking. J Immunol. 179, 7577-7584 (2007).
- Inaba, K., Swiggard, W. J., Steinman, R. M., Romani, N., Schuler, G. Isolation of dendritic cells. Curr Protoc Immunol. 3, (2001).
- Winzler, C., et al. Maturation stages of mouse dendritic cells in growth factor-dependent long-term cultures. J Exp Med. 185, 317-328 (1997).
- Koch, F., et al. Tumor necrosis factor alpha maintains the viability of murine epidermal Langerhans cells in culture, but in contrast to granulocyte/macrophage colony-stimulating factor, without inducing their functional maturation. J Exp Med. 171, 159-171 (1990).
- Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
- Wei, S. H., et al. Ca2+ signals in CD4+ T cells during early contacts with antigen-bearing dendritic cells in lymph node. J Immunol. 179, 1586-1594 (2007).
- Castellino, F., et al. Chemokines enhance immunity by guiding naive CD8+ T cells to sites of CD4+ T cell-dendritic cell interaction. Nature. 440, 890-895 (2006).
