Antigen presentation i sekundära lymfoida organ av dendritiska celler är avgörande för inledandet av T-cells medierade adaptiva immunsvaret. Här kan vi visa på kulturen i benmärgen härrör murina dendritiska celler, aktivering och märkning för 2-photon avbildning.
Flera metoder för beredning av murina dendritiska celler kan hittas i litteraturen. Här presenterar vi en metod som ger mer än 85% CD11c stora dendritiska celler i kultur som hem till dränerande lymfkörteln efter subkutan injektion och presentera antigen för att antigen specifika T-celler (se video). Dessutom använder vi Essen Instruments Incucyte att spåra dendritiska celler mognad, där, på dag 10, är morfologi av de odlade cellerna typiska för en mogen dendritiska celler och <85% av celler CD11chigh. Studien av antigen presentation i perifera lymfkörtlar med 2-fotonen imaging visade att det finns tre distinkta faser av dendritiska celler och T-cell interaktion 1, 2. Fas I består av korta seriella kontakter mellan mycket rörliga antigen specifika T-celler och antigen bär dendritiska celler 1, 2. Fas två präglas av långvarig kontakt mellan antigen-specifika T-cell och antigen bärande dendritiska celler 1, 2. Slutligen är fas III kännetecknas av T-celler lossnar från dendritiska celler, återfå rörlighet och börjar dela 1, 2. Detta är ett exempel på den typ av antigen-specifika interaktioner som kan analyseras med två-photon avbildning av antigen-laddad cell tracker dye-märkta dendritiska celler.
Dendritiska celler är viktiga förmedlare av det adaptiva immunsvaret och den mest effektiva antigenpresenterande celler kännetecknas hittills. Metoder för människa och mus dendritiska cellodling i litteraturen skiljer sig i den typ av cytokiner som används för att påverka utvecklingen av olika dendritiska celltyper. Anmärkningsvärt är att GM-CSF, flt3L, IL4, IL13, TNF-alfa och IFN-gamma används i olika kombinationer för att producera mogna, omogna, inflammatoriska och steady-state som murin benmärg härrör dendritiska celler …
National Institutes of Health Kirchstein Fellowship predoctoral gemenskap AI-64.128 (MPM), GM-41.514 (MDC), GM-48.071 (IP)