在人类胚胎干细胞体外培养的标签用于磁共振成像

Summary

在这段视频中，我们展示了如何标注人类胚胎干细胞（胚胎干细胞）与氯化锰（MnCl₂）可以通过电压门控钙离子通道进入细胞，当细胞生物活性。此外，我们将展示使用MnCl₂蜂窝磁共振造影剂，以确定人类胚胎干细胞在体外的生存能力。

Abstract

人类胚胎干细胞（胚胎干细胞）已经证明能够恢复受伤的心肌。磁共振成像（MRI）已成为主要的成像方法之一来评估受伤的心肌恢复。此外，前体内标签剂，如氧化铁纳米粒子，已被用于跟踪和本地化移植的干细胞。但是，这种方法不监视一个基本的细胞生物学特性，细胞移植的可行性。它已经知道，氯化锰（MnCl _2）进入细胞，通过电压门控钙（ ^钙离子）当细胞生物活性的渠道，并积累细胞^内产生T 1缩短的效果。因此，我们建议，锰制导MRI可有用的监视后的人类胚胎干细胞移植到心肌细胞的活力。

在这段视频中，我们将展示如何与MnCl ₂和如何使用MRI体外，这些细胞可以清楚地看到标签的人类胚胎干细胞。与此同时，生物活性的Ca ^{2 +}渠道将调制利用双方的Ca ^{2 +}通道激动剂和拮抗剂，以评估随之而来的信号变化。

Protocol

人类胚胎干细胞的锰标签 Trypsinize馈线免费5分钟的条件已在培养的人类胚胎茎。中加入文化传媒的胰蛋白酶。 旋转下降的细胞，离心5分钟800转20摄氏度。重新悬浮的细胞沉淀后，通过台盼蓝染色计数细胞数量。根据获得的细胞计数，分为四个等分3万到锥形管的细胞的细胞。沉淀细胞再次离心。 之前开始锰标签，氯化锰溶于0.9％氯化钠溶液做一个0.1mm的氯化锰溶液新鲜。 <l…

Discussion

这些结果表明，锰输入通过电压门控性钙通道，锰可作为MRI造影剂的使用，还可以显示细胞活力。因此，我们建议，锰制导MRI可有用的监视后，人类胚胎干细胞移植到心肌细胞活力。

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Manganese chloride tetrahydrate	Reagent	Sigma	M8054
(S)-(-)-Bay K8644	Reagent	Sigma	B133
(+)-Verapamil hydrochloride, minimum 99.0% titration	Reagent	Sigma	V4629
Sodium Chloride 0.85-0.90% W/V	Reagent	VWR	VW 3257-1
Feridex I.V.	Reagent	Berlex Laboratories	NDC 59338-7035-5	ferumoxides injectable solution 11.2mg iron/mL
Protamine sulfate	Reagent	American Pharmaceutical Partners	NDC 63323-229-05	50 mg (10 mg/mL)
Knockout SR (Serum replacement for ES cells)	Reagent	Gibco	10828
DMEM/F12 (1:1)	Reagent	Gibco	11330
2- mercaptoethanol 98+%	Reagent	Sigma	M 3148
L-Glutamine 200mM 100x	Reagent	Gibco	25030
Penicillin-Streptomyocin 10,000 units/ml	Reagent	Gibco	15140-122
MEM Non-Essential Amino Acids 100x solution	Reagent	Gibco	11140
Signa HDx 3T MRI	Tool	GE Medical Systems
clinical Knee coil	Tool	GE Medical Systems
DPBS	Reagent	Gibco	14190