In questo video, ci mostra come etichetta cellule staminali embrionali umane (hESC) con cloruro di manganese (MnCl<sub> 2</sub>), Che possono entrare nelle cellule attraverso i canali voltaggio-dipendenti del calcio quando le cellule sono biologicamente attivi. Inoltre, ci mostrano l'uso di MnCl<sub> 2</sub> Cellulare come agente di contrasto per risonanza magnetica per determinare la fattibilità in vitro di hESC.
Abstract
Cellule staminali embrionali umane (hESC) hanno dimostrato la capacità di ripristinare i feriti miocardio. Risonanza magnetica (MRI) è emerso come una delle modalità di imaging predominante per valutare il restauro dei feriti miocardio. Inoltre, ex-vivo agenti etichettatura, come ad esempio nanoparticelle di ossido di ferro, sono stati impiegati per tracciare e localizzare le cellule staminali trapiantate. Tuttavia, questo metodo non controlla una proprietà fondamentale della biologia cellulare per quanto riguarda la vitalità delle cellule trapiantate. È noto che il cloruro di manganese (MnCl 2) entra nelle cellule attraverso voltaggio-dipendenti del calcio (Ca 2 +) canali quando le cellule sono biologicamente attivi e si accumula nelle cellule per generare T 1 effetto accorciamento. Pertanto, si consiglia di manganese-guidata risonanza magnetica può essere utile per monitorare la vitalità cellulare dopo il trapianto di hESC nel miocardio.
In questo video, ci mostrerà come etichetta hESC con MnCl 2 e come queste cellule può essere vista chiaramente utilizzando la risonanza magnetica in vitro. Allo stesso tempo, l'attività biologica di Ca 2 +-canali saranno modulati utilizzando sia Ca 2 + canali agonista e antagonista per valutare le variazioni del segnale concomitanti.
Protocol
Etichettatura di manganese di cellule staminali embrionali umane Trypsinize i gambi embrionali umane che sono state coltivate in alimentazione priva di condizioni per 5 minuti. Neutralizzare la tripsina aggiungendo terreni di coltura. Spin giù le cellule per centrifugazione a 800 rpm per 5 minuti a 20 ° Celsius. Dopo aver ri-sospendere il pellet di cellule, contare il numero di celle trypan colorazione blu. Sulla base della conta delle cellule ottenute, dividere le cellule in quattro aliquote di 3 …
Discussion
Questi risultati indicano che il manganese si entra attraverso il voltaggio-dipendente dei canali del calcio, manganese e può essere usato come agente di contrasto per risonanza magnetica, che può anche mostrare la vitalità cellulare. Pertanto, si consiglia di manganese-guidata risonanza magnetica può essere utile per monitorare la vitalità cellulare dopo il trapianto di cellule staminali embrionali umane nel miocardio.